伍丹 關潤霞 姚秋萍

摘要：以小蠟葉片為原料，通過超聲輔助提取，減壓濃縮的粗提物，經(jīng)大孔吸附樹脂D101依次用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水洗脫分離的五段極性不同的部分，并對甲醇段進行薄層層析檢測，通過展開劑的優(yōu)化實驗，獲得甲醇段展開劑的最優(yōu)配比為甲醇∶氯仿∶氨水∶水=7∶5∶0.4∶3。在365nm處紫外檢測可清晰看到層析分離出四個點，說明甲醇段洗脫部分至少有四種成分可在365nm處顯綠色熒光。

關鍵詞：柱層析；薄層色譜；化學成分；小蠟

中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2018）38-0082-02

一、緒論

（一）前言

小蠟，俗稱毛白蠟、水白蠟，與小葉女貞同屬木犀科女貞屬植物。常綠喬木或半常綠灌木，可高達15米。小蠟樹在我國南部地區(qū)都有分布，生長迅速，喜濕潤，多分布于山洞溪流旁，播種扦插均可，耐修剪，可用做庭院樹、行道樹栽植，也是一種名貴天然藥物原料。中醫(yī)學上用為清熱藥。

（二）選題背景及研究現(xiàn)狀

據(jù)《陜西中草藥》收載，水白蠟功用主治清熱解毒；治燙傷、外傷；葉夏、秋采收，曬干或鮮用；性味歸經(jīng)：苦，涼[1]。植物的樹皮（水白蠟樹皮）亦供藥用。據(jù)《四川常用中草藥》收載，水白蠟功用主治清熱，降火；治吐血，牙痛，口瘡，咽喉痛，濕熱黃水癢瘡；春、秋季采樹皮及葉，曬干備用；性味：淡微苦，平；入肺、心二經(jīng)[2]。

口腔潰瘍（口瘡）是一種最常見的口腔粘膜疾病，在人群中患病率一般超過10%，可以自愈，可發(fā)生于口腔粘膜的任何部位，以唇、頰、舌部多見，嚴重者可以波及咽部粘膜?？谇粷冸m不是什么重病，但卻給患者的生活時時帶來不便與痛苦?？谇粌?nèi)經(jīng)久不愈的潰瘍，由于經(jīng)常受到咀嚼、說話的刺激，日久也有可能會發(fā)生癌變。之前許多的口腔潰瘍用藥的液體制劑幾乎都會用乙醇做輔料，會在用藥時產(chǎn)生刺激導致疼痛，這勢必給患者造成用藥的不適應性。

據(jù)調(diào)查，小蠟葉它已經(jīng)成為廣東恩平侗族民間常用來治療口舌潰爛的一個驗方，已使用多年。在貴州銅仁地區(qū)的侗族聚集地也用來治療口舌潰爛、口腔潰瘍、咽喉腫痛，用法是取新鮮葉片5—10枚放入口中嚼爛，將其汁液含于口中逐漸吞咽，每日2—3次，一般第二天就會有明顯好轉。作者通過模擬民間藥用模式，模擬在口腔潰瘍時pH6.58的情況下，對小蠟葉極性成分提取進行初步探索。

（三）小蠟的研究意義及研究思路設計

中藥民族藥是中華民族的寶貴財富，歷史悠久，應用廣泛，獨具特色，通過歷代學者的繼承、整理、發(fā)掘、提高，特別是現(xiàn)代科學技術方法的引入，中藥民族藥正生機勃發(fā)，發(fā)揚光大[3]。中藥民族藥和天然藥物的預防、治療和保健作用比較明確，通過中藥民族藥和天然藥物研制新藥的成功率比較高。有些中藥藥效物質(zhì)的療效好，毒副作用小，在中藥中含量較高，可以從其原植物中提取分離出來供臨床使用，或用植物的其他部位替代。再有民族藥、民間用藥、民間驗方，經(jīng)過多年民間臨床實踐已證明有效，只是缺乏活性作用的物質(zhì)基礎、質(zhì)量標準和現(xiàn)代化的劑型等。特別是民族藥本身具有其獨特的用藥醫(yī)理，因而要開展民族藥的二次開發(fā)，民族藥的藥用基礎物質(zhì)研究顯得更加重要。

中藥民族藥和天然藥物所含化學成分復雜。植物中的多種有效成分需要從復雜的均相或非均相體系中提取出來[4]。有效成分的提取國內(nèi)很多藥用植物做的多是脂溶性部分，對水溶性部分重視不夠，但是很多植物民間藥常用水煮等方法，所以提示活性部位可能存在于水溶性部分。有些植物生長的環(huán)境特殊，例如土壤、氣候，這種植物很可能與同屬其他環(huán)境下的植物不僅從形態(tài)上，還從功效、化學成分上都有很多區(qū)別。

本文設計根據(jù)其民族藥獨特的用藥醫(yī)理，用藥形式模擬，對小蠟葉的水溶性部分進行提取。

二、實驗

（一）實驗材料與儀器設備

小蠟葉（新鮮葉片，干葉，采收于銅仁地區(qū)石阡縣）；大孔樹脂 D101（天津市光復精細化工研究所）；薄層層析硅膠板（100×200mm，100×100mm，青島海洋化工廠分廠）；超聲波清洗機（SB-100DT，寧波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉蒸發(fā)器（RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠）；低溫恒溫槽（DC-0504B，上海恒平科學儀器有限公司）；循環(huán)水式真空泵（SHZ-DIII，浙江黃巖黎明實業(yè)有限公司）；三用紫外儀（ZF-2，上海市安亭電子儀器廠）

（二）實驗提取

目前木犀科女貞屬植物中以小葉女貞為例，其主要的化學成分是一些三萜類化合物、揮發(fā)油類化合物、黃酮類化合物、甾醇類化合物、裂環(huán)環(huán)烯醚萜類化合物等[1]。這些化合物之間的極性差異較大，本文通過模擬在口腔潰瘍時的pH6.58情況下，擬采用超聲波提取法對小蠟葉的水溶性部分進行模擬提取，選用柱層析色譜分離直接洗脫的實驗方案，通過薄層層析色譜檢測方法進行探討。

（三）小蠟葉水溶性成分的分離

大孔吸附樹脂能選擇性的吸附有機物，已廣泛應用于中草藥成分的分離純化。本文采用的大孔樹脂D-101，用濕柱法進行初步分離。提取物依次使用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水五種溶劑作為洗脫劑來分段分離，分段收集極性相近的化合物，洗脫液用西林瓶接收。洗脫分段情況，鮮葉：石油醚段A，乙酸乙酯段丙酮段1-22，甲醇段23-31，水段32-49；干葉：石油醚段、乙酸乙酯段、丙酮段1-23，甲醇段24-33，水段34-46。

（四）提取物極性成分的薄層檢測

在展開條件相同時，樣品點移動距離與展開劑移動距離之比是一定的，也就是說Rf值是樣品的物理常數(shù)，只與樣品的結構有關，因此Rf值可以用來鑒別樣品。

將過柱分離的甲醇段進行薄層色譜檢測，于365nm處紫外燈下進行標示，并計算遷移率Rf值。

展開劑的選擇對樣品分離的影響很大，通過優(yōu)化實驗，確定甲醇段展開劑為甲醇∶氯仿∶氨水∶水=7∶5∶0.4∶3，分離效果最佳。

毛白蠟干葉和鮮葉甲醇段薄層檢測分別分離出的點其Rf值為干葉：24 0.71 0.79 0.87，25 0.72 0.83 0.89，26 0.73 0.83，27 0.79 0.81 0.89，28 0.90 0.88，29 0.78 0.89，30 0.72 0.80 0.90，31 0.70 0.81 0.90，32-33 0.72 0.80。鮮葉：23-24 0.77 0.89，25 0.56 0.75 0.80 0.88，26 0.59 0.74 0.87 0.82 0.88，27 0.76 0.87，28 0.76，29 0.79 0.88，30 0.78 0.87，31。

三、結論及建議

1.通過展開劑優(yōu)化實驗，獲得甲醇段展開劑的最優(yōu)配比為甲醇∶氯仿∶氨水∶水=7∶5∶0.4∶3。

2.通過對新鮮毛白蠟葉的甲醇段洗脫部分進行薄層層析，在365nm處紫外檢測可清晰看到分離出四個點，說明甲醇段洗脫部分至少有四種成分可在365nm處顯熒光。

3.對于毛白蠟干葉的甲醇段洗脫部分，通過其Rf值計算結果可粗略看出有四個點，其中干葉有兩個點和新鮮葉的Rf值不同，以此初步判斷干葉與新鮮葉至少有兩個不同的成分存在。

通過對毛白蠟葉的民間藥用模式探討，完成了毛白蠟葉粗提浸物的柱層析分離和甲醇段洗脫部分的薄層檢測，但其中還有很多化學成分需要進一步的研究和探討。

參考文獻：

[1]陜西省革命委員會衛(wèi)生局商業(yè)局.陜西中草藥[M].科學出版社，1971.

[2]四川省中藥研究所.四川常用中草藥[M].成都：四川人民出版社，1971.

[3]貴州省中藥民族藥“十一五”科技發(fā)展規(guī)劃[Z].貴州省科技廳，2006.

[4]陳梅，趙鑫，沈舒，等.中藥藥效物質(zhì)基礎研究思路與方法概述[J].海峽藥學，2010，03（22）：11-13.