慢性阻塞性肺疾病(COPD)為一種常見的慢性氣道性疾病，臨床上表現(xiàn)為進行性加重的呼吸困難，隨著疾病進展，可以并發(fā)呼吸衰竭、肺心病等，導(dǎo)致病人死亡，預(yù)計到2020年該病將會成為全球第三位主要的死亡原因和第五位主要的致殘原因[1-5]。研究表明，病人反復(fù)急性加重是疾病進展的主要危險因素，其發(fā)作頻率約為每年2.4～3次。目前針對預(yù)測COPD急性加重(AECOPD)的生物學(xué)標(biāo)志物的研究多集中在血清炎癥因子，部分研究發(fā)現(xiàn)纖維蛋白原(Fg)水平在AECOPD病人中增高，分析可能與AECOPD病人血液黏稠度增高、存在炎癥導(dǎo)致病人血管內(nèi)皮功能受損有關(guān)。但未見Fg基因多態(tài)性和AECOPD的相關(guān)性研究的報道。目前有研究表明，F(xiàn)gBβ鏈基因的10余個多態(tài)性位點中，F(xiàn)gBβ-249C/T和Bβ-854G/A位點可能與血管內(nèi)皮損傷有關(guān)[6-10]。

因此，本研究探討FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A基因多態(tài)性與AECOPD的關(guān)系，為早期識別AECOPD高風(fēng)險人群提供依據(jù)，以便臨床醫(yī)師早期干預(yù)。

1 對象和方法

1.1 研究對象 納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會慢性阻塞性肺疾病學(xué)組COPD診治指南(2013年修訂版)中關(guān)于COPD的定義[1]，選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的COPD病人80例作為病例組，同時選擇年齡、性別、吸煙史與之相匹配的健康體檢者100例作為對照組。根據(jù)上一年度急性加重次數(shù)劃分亞組，其中≥2次/年為急性加重亞組，<2次/年為非急性加重亞組。病例組男51例，女29例，年齡67～71歲，平均(69.17±2.87)歲，平均吸煙(5.91±3.12)年，對照組男68例，女32例，年齡66～72歲，平均(69.00±3.12)歲，平均吸煙(5.56±4.91)年。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重肝腎疾病、惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾病病人；(2)合并嚴(yán)重心臟疾病及心律失常病人；(3)應(yīng)用抗凝藥物病人。

1.2 研究方法 2組病人入組后均抽取清晨空腹靜脈血檢測Fg水平，同時抗凝管采血3 mL，低滲法分離白細(xì)胞后，應(yīng)用酚/氯仿法提取DNA，應(yīng)用多聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增目的DNA，限制性內(nèi)切酶酶切擴增產(chǎn)物，將酶切產(chǎn)物在8%(質(zhì)量濃度)非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，檢測FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A基因多態(tài)性位點的基因型。比較2組病人Fg水平及兩個位點基因型分布頻率及等位基因分布頻率。

2 結(jié)果

2.1 FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A基因位點多態(tài)性電泳結(jié)果 PCR擴增FgBβ-249C/T基因T純合子(T/T)產(chǎn)物片段長度為311 bp；C純合子(C/C)產(chǎn)物片段長度為249 bp和62 bp；CT雜合子(C/T)產(chǎn)物片段長度為311 bp、249 bp和62 bp，因62 bp的片段分子量小，泳動速度較快，已經(jīng)跑出膠外，因此圖中未顯示。PCR擴增FgBβ-854G/A基因A純合子(A/A)產(chǎn)物片段長度為114 bp；G純合子(G/G)產(chǎn)物片段長度為90 bp和24 bp；GA雜合子(G/A)產(chǎn)物片段長度為114 bp、90 bp和24 bp。因24 bp的片段分子量小，泳動速度較快，已經(jīng)跑出膠外，因此圖中未顯示。見圖1，2。

2.2 2組血漿Fg水平比較 與對照組相比，病例組血漿Fg水平明顯增高[(275.81±49.99)mg/dL比(418.51± 154.00)mg/dL,t=7.959 ,P<0.05]。在病例組中，急性加重與非急性加重亞組比較，血漿Fg水平無明顯差異[(412.02±146.61)mg/dL比(431.26±169.76)mg/dL,t=0.5269 ,P=0.106]。

圖1 FgBβ-249C/T電泳結(jié)果

圖2 FgBβ-854G/A電泳結(jié)果

2.3 FgBβ-249及FgBβ-854基因多態(tài)類型及等位基因比較 病例組FgBβ-854 GA型突變率高于對照組(25.0%比4.0%，P<0.01)；病例組FgBβ-249 CT型突變率高于對照組CT型突變率(56.2%比27.0%，P<0.01)；FgBβ-854G/A及FgBβ-249C/T等位基因分布頻率在病例組及對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.4 各亞組間FgBβ-249及FgBβ-854基因分布頻率及突變率比較 與非急性加重亞組比較，急性加重亞組FgBβ-854G/A基因型GG型、GA型、AA型分布頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；FgBβ-249C/T基因型CT型、TT型分布頻率差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

3 討論

COPD臨床上表現(xiàn)為進行性加重的呼吸困難，病理生理上主要表現(xiàn)為進行性加重的氣流受限。隨著疾病進展，可以并發(fā)呼吸衰竭、肺心病等，導(dǎo)致病人死亡及殘疾，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量[1-4]。

表1 FgBβ-249及FgBβ-854基因型頻率及等位基因頻率比較

注：與對照組比較，**P<0.01

表2 急性加重與無急性加重亞組間FgBβ-249及FgBβ-854基因分布頻率及突變率比較(n,%)

注：與非急性加重亞組比較，**P<0.01

在之前研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)gβ鏈基因的10余個多態(tài)性位點中，Bβ-249C/T和Bβ-854G/A位點可能分別與血管內(nèi)皮損傷有關(guān)。血管內(nèi)皮受損，一方面可以導(dǎo)致體內(nèi)凝血異常，出現(xiàn)微小血栓形成，影響組織血供；另一方面，血管內(nèi)皮損傷可以引起部分炎癥因子釋放[11-14]，引發(fā)體內(nèi)炎癥反應(yīng)。AECOPD病人由于肺部及全身炎癥反應(yīng)，可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷及凝血功能異常，導(dǎo)致體內(nèi)高凝狀態(tài)形成。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，病例組血漿Fg水平明顯增高，這與既往研究結(jié)果一致。但在病例組中，急性加重與非急性加重亞組比較，血漿Fg水平無明顯差異，分析該項結(jié)果可能與病人數(shù)量較少有關(guān)。下一步研究應(yīng)進一步擴大研究病人數(shù)量。

FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A位點導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷進一步引發(fā)COPD病人體內(nèi)炎癥反應(yīng)及凝血異常，從而出現(xiàn)惡性循環(huán)。本研究發(fā)現(xiàn)，病例組FgBβ-854 GA型突變率高于對照組(25.0%比4.0%，P<0.05)；病例組FgBβ-249 CT型突變率高于對照組(56.2%比27.0%，P<0.05)；FgBβ-854G/A及FgBβ-249C/T等位基因分布頻率在病例組及對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與非急性加重亞組比較，急性加重亞組FgBβ-249CT型、TT型分布頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。這提示FgBβ-249C/T位點突變率和AECOPD相關(guān)。

因此，針對COPD病人檢測FgBβ-249C/T位點突變率有助于預(yù)測AECOPD風(fēng)險，有助于臨床醫(yī)生及早給予干預(yù)，減少病人急性加重次數(shù)，減輕病人因急性加重導(dǎo)致的肺功能下降及住院增加的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，具有較好的應(yīng)用前景。但本研究存在以下局限性：一方面本研究為回顧性研究，未進行前瞻性研究，需進一步明確FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A基因?qū)τ贏ECOPD風(fēng)險的預(yù)測作用；另一方面，本研究入組人數(shù)偏少，有可能不能反映群體FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A基因分布情況。因此，下一步的研究中，需要進一步擴大樣本量，同時開展前瞻性研究，進一步探討FgBβ-249C/T和Bβ-854G/A基因多態(tài)性與AECOPD的相關(guān)性。