王成河

（江蘇省宜興市東山東路宜興市腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科 江蘇 宜興 214200）

日常工作中，發(fā)現(xiàn)部分終點(diǎn)法項(xiàng)目在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)時(shí)，儀器的檢測(cè)效率尚有提升的空間。通過(guò)調(diào)整項(xiàng)目時(shí)間模式以縮短分析流程時(shí)間，力求在保障結(jié)果可靠的前提下，更好地發(fā)揮儀器的檢測(cè)效率。為此，根據(jù)美國(guó)“用病人樣本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏差評(píng)估”指南文件EP9-A2方案[1]，選用氧化法測(cè)定的TBIL為對(duì)象，分別設(shè)置兩種不同的時(shí)間模式、不同的讀點(diǎn)，平行測(cè)定同一組標(biāo)本，以評(píng)價(jià)兩法可比性及偏倚，觀察兩種方法是否均能達(dá)到終點(diǎn)。

1.材料和方法

1.1 樣品

收集2018年7月21日—2018年7月26日的本院患者血清，包括正常值和異常值標(biāo)本，標(biāo)本要求新鮮、無(wú)溶血脂血。

1.2 儀器和試劑

日立7180生化儀。TBIL試劑：北京利德曼公司，Lot705121E。TBIL校準(zhǔn)液：北京利德曼公司，Lot709041I。質(zhì)控血清：RANDOX公司，正常值批號(hào)：1131UN；異常值批號(hào)：746UE。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 現(xiàn)有TBIL測(cè)試為基本方法，項(xiàng)目命名TB-1；新增TBIL測(cè)試的對(duì)比方法，項(xiàng)目命名TB-2。兩法均使用相同試劑、相同校準(zhǔn)液，同時(shí)校準(zhǔn)。

TB-1參數(shù)依據(jù)試劑說(shuō)明書設(shè)置，其中，讀點(diǎn)16/34，時(shí)間模式10min。TB-1分析大致流程：標(biāo)本與R1孵育5min，第16、17點(diǎn)間加入R2，反應(yīng)5min，第34點(diǎn)流程結(jié)束。TB-2參數(shù)設(shè)置：讀點(diǎn)設(shè)為5/17，時(shí)間模式5min，其余參數(shù)同TB-1；TB-2分析大致流程：標(biāo)本與R1孵育1.5min，第5、6點(diǎn)間加入R2，反應(yīng)3.5min，第17點(diǎn)流程結(jié)束。

1.3.2 標(biāo)本測(cè)定 線性范圍內(nèi)，隨機(jī)挑選48份包含高、中、低TBIL濃度樣本，TB-1和TB-2平行進(jìn)行測(cè)定，每天測(cè)定8份樣本及2個(gè)水平質(zhì)控品，第3位和第9位插入正常-異常2個(gè)水平質(zhì)控品，按順序1、2、3 …… 10測(cè)定一次，再按反序10、9、8 ……1復(fù)測(cè)一次，觀察質(zhì)控結(jié)果，糾正測(cè)試。測(cè)定6d，雙份測(cè)定均值作為1個(gè)結(jié)果，共48個(gè)結(jié)果。記錄每一測(cè)試最后兩點(diǎn)吸光度差值及吸光度最大變化量（對(duì)于TB-1：差值=A34-A33，對(duì)于TB-2：差值=A17-A16。最大變化量=A34-A16）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

1.4.1 離群值檢驗(yàn) 共分為2種情況，即方法內(nèi)離群值檢驗(yàn)和方法間離群值檢驗(yàn)。

1.4.2 相關(guān)性試驗(yàn) 以TB-1每樣本雙份均值為X軸、TB-2雙份均值為Y軸，用Excel繪制相關(guān)性散點(diǎn)圖，計(jì)算相關(guān)系數(shù)R及回歸方程。

1.4.3 相對(duì)偏倚分析 以TB-1每樣本雙份均值為X軸、以同一標(biāo)本的TB-2均值與TB-1均值之差除以TB-1均值所得相對(duì)偏倚為Y軸，用Excel作散點(diǎn)圖。

1.4.4 兩組結(jié)果的差異性比較、反應(yīng)完成情況的觀察 采用配對(duì)t檢驗(yàn)，使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。

2.結(jié)果

2.1 兩法的相關(guān)性比對(duì)及相對(duì)偏倚分析。

2.1.1 離群值檢驗(yàn)：所有48個(gè)標(biāo)本結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)離群點(diǎn)，符合EP9-A文件要求，可以進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.2 相關(guān)性散點(diǎn)圖，見(jiàn)圖1。

圖1 TB-1和TB-2雙份均值相關(guān)性散點(diǎn)圖

通過(guò)計(jì)算，相關(guān)系數(shù)R=0.9968。EP9-A2要求R≥0.975，說(shuō)明兩方法的測(cè)定范圍合適?；貧w方程y=0.9465x+5.3132，數(shù)據(jù)點(diǎn)擬合程度R2=0.9937。

2.1.3 相對(duì)偏倚散點(diǎn)圖，見(jiàn)圖2。

圖2 TB-2對(duì)TB-1的相對(duì)偏倚散點(diǎn)圖

可看出，線性范圍內(nèi)散點(diǎn)圖分布正常，絕大多數(shù)點(diǎn)在-0.05～0.05間波動(dòng)，最大相對(duì)偏倚為6.1%。

2.2 兩組結(jié)果間的差異性比較、每一測(cè)試反應(yīng)完成情況的對(duì)比觀察

以TB-1組48個(gè)結(jié)果為參照，TB-2組48個(gè)結(jié)果與之比較，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，組間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。兩組所有測(cè)試最后兩點(diǎn)吸光度差值均在±5以內(nèi)；兩組反應(yīng)剩余比率（即最后兩點(diǎn)吸光度差值占最大吸光度變化量的百分比）均在-0.1058%～0.1011%之間波動(dòng)。

3.結(jié)論

兩組所有反應(yīng)均已達(dá)到終點(diǎn)，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此，兩法所測(cè)結(jié)果同樣可靠，但對(duì)比方法耗時(shí)更少，檢測(cè)效率更高。

4.討論

本研究對(duì)本實(shí)驗(yàn)室TBIL的基本方法與對(duì)比方法進(jìn)行了分析，EP9-A文件要求最終的有效標(biāo)本數(shù)40～100個(gè)，且至少一半的結(jié)果位于參考范圍以外，不能包含離群值，若離群值≥2時(shí)，應(yīng)終止實(shí)驗(yàn)，問(wèn)題排查后，重新實(shí)驗(yàn)[2]。當(dāng)相關(guān)系數(shù)R＜0.975或R2＜0.95時(shí)提示樣本量過(guò)少，應(yīng)追加樣本數(shù)，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均滿足要求。