楊士杰 占軍平

（1.江西省宜春學院生命科學與資源環(huán)境學院，江西 宜春 336000；2.江西新龍生物科技股份有限公司，江西 宜春 336000）

辣椒菌核病為大棚辣椒的重要病害之一，發(fā)生普遍，一般在3月下旬發(fā)病，4～5月為發(fā)病高峰期，長時間陰雨天氣病害加重，防治不及時常造成減產(chǎn)20%～50%，嚴重的死苗達70%[1]。長期以來，農(nóng)戶采用化學藥劑防治辣椒菌核病，但隨著藥劑使用年限的延長，辣椒菌核病菌已對多種藥劑產(chǎn)生了抗藥性。為了了解目前常用藥劑戊唑醇、咯菌腈、啶酰菌胺、苯醚甲環(huán)唑、烯酰嗎啉對辣椒菌核病菌的抑制效果，我們特開展了相關(guān)試驗，現(xiàn)將試驗結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試藥劑為97%戊唑醇、95%苯醚甲環(huán)唑原藥（湖北康寶泰精細化工有限公司生產(chǎn)），98%咯菌腈（上虞穎泰精細化工有限公司生產(chǎn)），96%烯酰嗎啉（山東先達化工有限公司生產(chǎn)），95%啶酰菌胺（湖北薪和化工有限公司生產(chǎn)）。2017年從宜春市郊辣椒種植地采集感病辣椒菌核病菌樣品，在室內(nèi)進行單孢分離純化后得到單孢菌株，通過斜面（4℃）和濾紙片法低溫（-20℃）將供試菌株保存在江西省宜春學院植物保護實驗室。其他試驗儀器和器皿為YXQ-LS-50-SII滅菌器（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)）、SW-CJ-2F型雙人雙面凈化工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司生產(chǎn)）、QHX-40085H-III人工氣候培養(yǎng)箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司生產(chǎn)）、威爾250B生化培養(yǎng)箱（蘇州威爾實驗用品有限公司生產(chǎn)）、電子萬用爐、燒杯、量筒、鑷子、試管、酒精燈、漏斗、玻璃棒、游標卡尺等。

1.2 試驗方法

采用PDA培養(yǎng)基，成分為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15～20 g、水1 000 mL。分別將97%戊唑醇、98%咯菌腈、96%烯酰嗎啉、95%啶酰菌胺、95%苯醚甲環(huán)唑稀釋至0.01 μg/mL、0.1 μg/mL、1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、100 μg/mL，然后置于45℃PDA培養(yǎng)基中，制成含藥平板，以不加藥劑的平板為空白對照。在新鮮的辣椒菌核病菌菌落邊緣打取6 mm菌餅，接種于各藥劑培養(yǎng)基的平板中央，在23℃黑暗條件下培養(yǎng)72 h。

測量菌落直徑，計算菌絲生長抑制百分率，繪制抑菌率變化趨勢圖，并求出毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)、有效抑制中濃度（EC50值）[2]?？剐运揭罁?jù)紀明山等的敏感基線值進行判別[3]，菌株EC50值小于0.455 μg/mL為敏感菌株，菌株EC50值處于0.455～0.911 μg/mL為低抗菌株，菌株EC50值處于0.911～3.644 μg/mL為中抗菌株，菌株EC50值大于3.644 μg/mL為高抗菌株。

抑制率（%）=[（對照菌落生長直徑-藥劑處理菌落生長直徑）/（對照菌落生長直徑-接種菌的菌餅直徑）]×100。

圖1 各處理辣椒菌核病菌的抑菌率

2 結(jié)果與分析

2.1 各處理對辣椒菌核病菌的抑菌率及抑菌趨勢

由圖1可知，戊唑醇、咯菌腈、苯醚甲環(huán)唑、啶酰菌胺對辣椒菌核病菌抑菌率相對較高，烯酰嗎啉的抑菌效果較差，100 μg/mL濃度的抑菌率也僅為45.05%。

2.2 不同藥劑不同濃度間的抑菌差異性

根據(jù)戊唑醇、咯菌腈、苯醚甲環(huán)唑、啶酰菌胺、烯酰嗎啉對辣椒菌核病菌的抑制率數(shù)值，經(jīng)方差處理得表1。由表1可見，相同藥劑不同濃度間F=48.4＞F0.01（5，20）=4.1，即濃度間差異極顯著，不同藥劑間F=14＞F0.01（4，20）=4.43，即藥劑間差異極顯著。

表1 不同藥劑不同濃度間抑菌方差分析

2.3 濃度間多重比較

用LSD法做相互比較。v=20時，t0.05=2.086，t0.01=2.845，故LSD0.05=0.094，LSD0.01=0.128。濃度間多重比較結(jié)果見表2。由表2可以看出，5 μg/mL與10 μg/mL間和10 μg/mL與100 μg/mL間抑菌率無顯著性差異，其他各濃度間抑菌率均存在極顯著差異。

表2 不同濃度間與0.01 μg/mL的多重比較

2.4 藥劑間多重比較

用LSD法做相互比較。v=20時，t0.05=2.086，t0.01=2.845，故LSD0.05=0.09，LSD0.01=0.120。藥劑間多重比較結(jié)果見表3。由表3可見，烯酰嗎啉與戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、啶酰菌胺、咯菌腈間抑菌率均存在極顯著差異，咯菌腈與烯酰嗎啉間抑菌率存在極顯著差異，咯菌腈與啶酰菌胺間、啶酰菌胺與苯醚甲環(huán)唑間、苯醚甲環(huán)唑與戊唑醇間無顯著性差異。

2.5 辣椒菌核病菌與不同藥劑間敏感性分析

通過回歸統(tǒng)計方法，將濃度轉(zhuǎn)化成對數(shù)和百分率轉(zhuǎn)化成幾率值，分別求出辣椒菌核病菌與戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、啶酰菌胺、咯菌腈、烯酰嗎啉敏感相關(guān)回歸方程和相關(guān)系數(shù)、抑菌中量EC50。

表3 不同藥劑間烯酰嗎啉的多重比較

由表4可知，辣椒菌核病菌對戊唑醇的EC50=0.65 μg/mL，大于敏感菌株標準值0.455 μg/mL（紀明山等的敏感基線值劃分標準），居0.455～0.911 μg/mL之間，表明辣椒菌核病菌對戊唑醇為低抗；辣椒菌核病菌對苯醚甲環(huán)唑和啶酰菌胺的EC50分別為1.16786 μg/mL和2.96226 μg/mL，居0.911～3.644 μg/mL之間，表明辣椒菌核病菌對苯醚甲環(huán)唑和啶酰菌胺為中抗；辣椒菌核病菌對咯菌腈和烯酰嗎啉的EC50分別為5.1999 μg/mL和217.76 μg/mL，均大于高抗標準值3.644 μg/mL，表明辣椒菌核病菌對咯菌腈、烯酰嗎啉為高抗，辣椒菌核病菌對烯酰嗎啉的EC50值為高抗標準值3.644 μg/mL的59.75倍。

表4 辣椒菌核病菌對各參試藥劑的敏感相關(guān)回歸方程和相關(guān)系數(shù)、ED50值

3 小結(jié)

試驗結(jié)果表明，辣椒菌核病菌對戊唑醇表現(xiàn)為低抗，抑菌效果較好；辣椒菌核病菌對苯醚甲環(huán)唑、啶酰菌胺表現(xiàn)中抗，建議生產(chǎn)中盡量少用這兩種藥劑；辣椒菌核病菌對咯菌腈、烯酰嗎啉已產(chǎn)生較高抗藥性，生產(chǎn)中不宜采用這兩種藥劑。防治辣椒菌核病時，可采用藥效較好的戊唑醇與其他藥劑交替使用，以盡量延緩病菌產(chǎn)生抗藥性的時間。同時應(yīng)綜合考慮環(huán)境、作物以及藥劑等因素，篩選出最佳的藥劑濃度。進一步比較EC50值可知，辣椒菌核病菌為低抗菌，生產(chǎn)上不宜在同一目標作物上頻繁使用同種藥劑。