牛魯燕 張曉艷 鄭紀(jì)業(yè) 孔慶富 王風(fēng)云

摘要：針對傳統(tǒng)方法測定葉綠素含量存在的不足，采用高光譜技術(shù)建立了快速、準(zhǔn)確、無損估測葡萄葉片葉綠素含量的方法。以采自泰安萬吉山基地的葡萄葉片的高光譜反射率和SPAD值為數(shù)據(jù)源，在分析SPAD值與原始光譜反射率、原始光譜反射率一階導(dǎo)數(shù)、高光譜特征變量間相關(guān)性的基礎(chǔ)上，篩選敏感波段，建立了基于高光譜反射率的葡萄葉片葉綠素含量估測模型，即SPAD=59.352+44836.313R′601，其中R′601為601 nm波段原始光譜反射率一階導(dǎo)數(shù)。

關(guān)鍵詞：葡萄；葉綠素；高光譜；光譜特征

中圖分類號：S123文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2018）07-0152-04

Abstract In view of the shortage of traditional monitoring methods for chlorophyll content， the hyperspectral technology was used to estimate the chlorophyll content in grape leaves rapidly， accurately and nondestructively. With the hyperspectral reflectance and SPAD value of grape leaves collected from the Wanjishan Base in Taian as data， the correlation between the SPAD value and the original spectral reflectance， spectral reflectance derivative and high spectral value were analyzed， and then the sensitive bands were screened out. Based on these， we established the estimation model of chlorophyll content in grape as SPAD=59.352+44836.313R′601， in which， R′601 was the spectral reflectance derivative of 601 nm brand.

Keywords Grape； Chlorophyll； Hyperspectral； Spectral features

葉綠素含量在指示植物營養(yǎng)脅迫、光合作用能力和生長狀況等方面具有重要作用。傳統(tǒng)的葉綠素含量測定一般采用破壞性的分光光度法，不僅繁瑣、費(fèi)時，而且野外條件下樣本的保存及運(yùn)輸都存在困難。SPAD-502型葉綠素儀可以無損地即時測量植物葉片的葉綠素相對含量（SPAD值），使用簡單、方便，且SPAD值與葉片的實(shí)際葉綠素含量顯著正相關(guān)[1]，可以很好地表征植物葉片的葉綠素變化趨勢，但該方法只能逐點(diǎn)對單個葉片進(jìn)行測量，測定結(jié)果受葉片大小、厚薄影響較大，需取多次測定結(jié)果的平均值作為最終測定結(jié)果，工作量大[2]。

高光譜遙感是一種快速、無損的監(jiān)測技術(shù)，可在不破壞植物組織結(jié)構(gòu)的前提下，實(shí)現(xiàn)對作物生長季營養(yǎng)狀況的監(jiān)測[3，4]。目前國內(nèi)學(xué)者對高光譜遙感技術(shù)在作物生長監(jiān)測方面的研究多集中在水稻[5]、玉米[6，7]、小麥[8]等糧食作物以及棉花[9]、大豆[10]、蘋果[11]等經(jīng)濟(jì)作物上，而在葡萄上的應(yīng)用研究主要是針對果實(shí)，如：徐麗等[12]使用高光譜成像系統(tǒng)采集葡萄漫反射光譜，提出一種應(yīng)用高光譜成像技術(shù)檢測葡萄可溶性固形物含量的方法，并證明基于高光譜成像技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)采后葡萄可溶性固形物含量的準(zhǔn)確無損檢測；吳迪等[13]采集60組釀酒葡萄樣本高光譜圖像，獲取樣本光譜曲線，并采用多元散射校正預(yù)處理方法提高信噪比，最終應(yīng)用高光譜成像技術(shù)結(jié)合連續(xù)投影算法實(shí)現(xiàn)葡萄果皮中花色苷含量的快速無損檢測，結(jié)果表明，利用近紅外高光譜成像技術(shù)能夠有效檢測釀酒葡萄果皮中的花色苷含量；劉旭等[14]以釀酒葡萄赤霞珠果實(shí)為研究對象，采集60組樣本的900～1 700 nm近紅外波段高光譜圖像，利用高光譜成像技術(shù)檢測葡萄果皮中的花色苷含量，并用pH示差法測量樣本果皮中花色苷含量，結(jié)果顯示基于PLSR模型推薦的13個隱含變量建立的BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型的預(yù)測決定系數(shù)和預(yù)測均方根誤差分別為0.9102和0.3795；楊杰等[15]為明確采用高光譜成像技術(shù)對葡萄可溶性固形物檢測的可行性，用高光譜成像系統(tǒng)采集葡萄樣本的漫反射光譜，建立葡萄可溶性固形物的定量預(yù)測模型，并對比分析不同光程校正方法、不同預(yù)處理方法對建模精度的影響，結(jié)果表明，應(yīng)用高光譜成像技術(shù)可以對葡萄可溶性固形物含量進(jìn)行無損檢測。但利用高光譜反射率對生長時期葡萄葉片葉綠素含量反演方面的研究甚少。本研究嘗試?yán)闷咸讶~片高光譜與葉綠素相對含量（SPAD值）數(shù)據(jù)，經(jīng)相關(guān)分析篩選出敏感波段，并在此基礎(chǔ)上建立葡萄葉片SPAD值與敏感波段光譜特征參量間的定量關(guān)系模型，探求利用光譜分析技術(shù)監(jiān)測葡萄葉片葉綠素狀況的可行性。

1 材料與方法

1.1 葉綠素測定及樣品采集

2017年6月8日從山東泰安萬吉山葡萄種植基地，選擇巨玫瑰葡萄品種生長一致、健康的葉片，用SPAD-502型葉綠素儀測其SPAD值，然后采下葉片進(jìn)行標(biāo)記后立即裝于保鮮袋中，在確保低溫、無損害的條件下帶回實(shí)驗(yàn)室，用于高光譜測定。

1.2 光譜數(shù)據(jù)采集

采用美國Surface Optics Corporation公司生產(chǎn)的SOC710VP可見-近紅外高光譜成像式地物光譜儀在可控制光照條件（鎢燈照明）的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，光譜范圍為350～1 050 nm，光譜分辨率為4.6875 nm。測定前，先用標(biāo)準(zhǔn)白板進(jìn)行校正，并將待測葉片表面擦拭干凈。測定時，將葉片單層、平整放置于反射率近似為零的黑色試驗(yàn)平臺上，兩端用黑色板壓住防止葉片上翹；光譜儀的視場角為25°，探頭距待測葉片0.50 m，垂直向下正對待測葉片的中部。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

1.3.1 數(shù)據(jù)預(yù)處理 SOC710VP可見-近紅外高光譜成像式地物光譜儀獲得的高光譜圖像立方數(shù)據(jù)是灰度值（DN值），灰度值是遙感影像像元亮度值，無單位，是一個整數(shù)值，值的大小與傳感器的輻射分辨率、地物反射率、大氣透過率和散射率等有關(guān)。為了便于計(jì)算和數(shù)據(jù)的分析處理，需將DN值轉(zhuǎn)換成反射率值，利用SOC710VP可見-近紅外高光譜成像式地物光譜儀自帶的分析軟件SRAnal710通過降噪、光譜標(biāo)定、黑場標(biāo)定及空間、光譜輻射標(biāo)定等一系列操作來實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)換。

1.3.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析及模型檢驗(yàn) 采用ENVI 4.7軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步處理，選取感興趣區(qū)，并計(jì)算得出每個波段所對應(yīng)的平均反射率值。采用OriginPro 8.5、SPSS 18.0和Matlab進(jìn)行一階函數(shù)求導(dǎo)、相關(guān)分析等處理。

利用皮爾遜相關(guān)系數(shù)（Pearson）表征葡萄葉片原始光譜反射率、原始光譜反射率一階導(dǎo)數(shù)與SPAD值的相關(guān)關(guān)系，Pearson相關(guān)系數(shù)的絕對值越大，相關(guān)性越強(qiáng)。

為檢驗(yàn)?zāi)Ｐ凸罍y的準(zhǔn)確性，采用決定系數(shù)（R2）對模型進(jìn)行測試和檢驗(yàn)，篩選出適合葡萄葉片葉綠素含量的最佳高光譜監(jiān)測模型。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄葉片的高光譜特征

從圖1可以看出，葡萄葉片的光譜反射率在紫光波段的373～418 nm處形成一個小的反射率峰，峰值出現(xiàn)在393 nm處；另一個較大的峰是在綠光和可見光區(qū)域的524～591 nm處，在從500 nm開始的綠波段，葉片的吸收減少，反射率增強(qiáng)，在555 nm處達(dá)到明顯的反射率峰值，其左側(cè)450 nm處為藍(lán)光波段吸收谷，右側(cè)675 nm處為紅光波段吸收谷；之后反射率陡升，在774～989 nm的近紅外波段形成一個較高的反射平臺，可能是由于葉片的多孔薄壁細(xì)胞組織對近紅外光強(qiáng)烈反射形成的；995 nm之后，葡萄葉片的光譜反射率開始下降。

2.2 紅邊位置的提取

紅邊是綠色植物在680～760 nm之間反射率增高最快的點(diǎn)，也是原始光譜一階導(dǎo)數(shù)在該區(qū)間的拐點(diǎn)。紅邊區(qū)域內(nèi)蘊(yùn)含著豐富的植被生長信息，與植物生理生化參數(shù)關(guān)系密切。本研究中葡萄葉片紅邊位置的提取采用對原始光譜數(shù)據(jù)求一階導(dǎo)數(shù)法，一階微分變化最大的波段即為紅邊區(qū)域。對原始光譜反射率求一階導(dǎo)數(shù)能達(dá)到減弱背景因素影響的目的，將植物光譜的變化特征較清晰地反映出來。從圖2 可以看出，在680～750 nm處有一個明顯的反射率峰，峰值位于720 nm波長處，即為本研究的紅邊位置。

2.3 葡萄葉片高光譜反射率及其一階導(dǎo)數(shù)與葉綠素含量的相關(guān)分析

利用SPSS對葡萄葉片原始光譜反射率與葉綠素含量進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果（圖3）顯示，在波段398～408、462～498、669～684、726～1 039 nm處，葡萄葉片的原始光譜反射率與葉綠素含量呈正相關(guān)，其余波段處為負(fù)相關(guān)，但均未達(dá)到顯著水平。

對葡萄葉片原始光譜反射率求一階導(dǎo)數(shù)，并分析其與葉綠素含量的相關(guān)性，結(jié)果表明，在524、529、575、601、689 nm處葡萄葉片光譜反射率的一階導(dǎo)數(shù)與葉綠素含量極顯著相關(guān)，皮爾遜相關(guān)系數(shù)依次為-0.81674、-0.8052、0.780865、0.899322、-0.84706；在498、509、514、519、534、570、580、596、606、695、790、795、995、1 000 nm處兩者間顯著相關(guān)，皮爾遜相關(guān)系數(shù)依次為-0.76241、-0.67871、-0.68596、-0.75786、-0.69367、0.762222、0.719671、0.69382、0.639712、-0.76306、0.764118、0.691367、-0.74011、-0.76345。

2.4 基于敏感波段的模型建立

根據(jù)以上分析，我們選取原始光譜反射率一階導(dǎo)數(shù)與葉綠素含量極顯著相關(guān)的5個波段（524、529、575、601、689 nm）、顯著相關(guān)中皮爾遜相關(guān)系數(shù)絕對值比較大的5個波段（498、570、695、790、1 000 nm）以及紅邊位置（720 nm），運(yùn)用SPSS軟件，建立SPAD值與敏感波段反射率一階微分的回歸模型，結(jié)果見表1。

可以看出，以601 nm處光譜反射率的一階微分作為變量確定的線性函數(shù)估測模型和二次多項(xiàng)式估測模型R2最大，均達(dá)到0.809；其次是以689 nm處光譜反射率的一階微分作為變量確定的冪函數(shù)、對數(shù)函數(shù)、二次多項(xiàng)式函數(shù)和線性函數(shù)估測模型，R2的值分別為0.726、0.720、0.719、0.718。因此，選擇601 nm波段的2個估測模型進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

2.5 模型驗(yàn)證

為了檢驗(yàn)估測模型的精確性和可靠性，選取同時期同一地點(diǎn)的20個樣本的葉片光譜反射率和SPAD數(shù)據(jù)，對篩選出的葡萄葉片SPAD值的估測模型進(jìn)行測試和驗(yàn)證，得到預(yù)測值與真實(shí)值的擬合方程，由表2可以看出，模型SPAD=59.352+44836.313R′601的檢驗(yàn)精度最高，對葡萄葉片葉綠素相對含量的擬合效果較好。

3 討論與結(jié)論

本研究采用高光譜技術(shù)建立了快速、準(zhǔn)確、無損估測葡萄葉片葉綠素含量的方法，得出如下結(jié)論：

（1）葡萄葉片光譜反射率在紫光波段、綠光和可見光區(qū)域出現(xiàn)兩個明顯的反射峰，峰值分別出現(xiàn)在393 nm和555 nm處。

（2）葡萄葉片光譜反射率的一階導(dǎo)數(shù)與葉綠素含量極顯著相關(guān)的波段出現(xiàn)在524、529、575、601、689 nm處。

（3）利用選出的敏感波段，建立了葡萄葉片葉綠素含量的高光譜監(jiān)測模型，經(jīng)過精度檢驗(yàn)比較，確定其最佳估測模型為SPAD=59.352+44836.313R′601。該模型為葡萄葉片葉綠素含量的估測提供了比較快捷的方法和途徑，并對葡萄的實(shí)時營養(yǎng)和長勢監(jiān)測具有一定的指導(dǎo)意義和參考價值。

本研究主要是對泰安基地6月8日采摘的葡萄葉片葉綠素含量進(jìn)行監(jiān)測研究，并用同一區(qū)域、同一時期的樣本數(shù)據(jù)對模型進(jìn)行了驗(yàn)證，但是對不同地區(qū)、不同樹齡、不同品種、不同生長期的葡萄葉片葉綠素含量監(jiān)測是否適用，還需要進(jìn)一步探索。今后的研究中可以增加樣本數(shù)量和種類，明確不同品種、不同樹齡、不同生長期對葡萄葉片光譜指標(biāo)模型的影響，以期建立預(yù)測性能高且可移植的模型，促進(jìn)該技術(shù)在作物長勢中的應(yīng)用。

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