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(河北省兒童醫(yī)院，河北 石家莊 050031)

先天性聽力損失的病因既包括遺傳因素，亦包括環(huán)境因素，其中新生兒耳聾病因中，因遺傳因素引起的患兒約為66%，而<4歲的患兒中遺傳因素則約為72%[1-2]。遺傳性耳聾既包括先天性聽力損失，亦包括遲發(fā)性聽力損失。多項新生兒聽力篩查研究發(fā)現(xiàn)，部分患兒出生時既被確診為聽力損失，而部分患兒會攜帶引起遲發(fā)性聽力損失的基因突變，包括SLC26A4、GJB3、GJB2、12SrRNA等基因突變[3-5]。該類患兒在出生時能夠通過聽力篩查，但伴隨著年齡的不斷增長，會導(dǎo)致遲發(fā)性聽力損失的發(fā)生。當前，常規(guī)的聽力篩查方法容易出現(xiàn)遲發(fā)性聽力損失患兒遺漏的情況，而同步行聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查，一方面能夠及時發(fā)現(xiàn)出生時就確診為聽力損失的患兒，另一方面亦能夠預(yù)測遲發(fā)性聽力損失患兒，進而能夠延遲或防止聽力損失的情況出現(xiàn)[6-7]。本研究對2 856例新生兒進行同步聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查，現(xiàn)對結(jié)果分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料

利用隨機數(shù)字表法，隨機選取2016年6月至2017年3月疑聽力損失在河北省兒童醫(yī)院就診的2 856例新生兒，進行同步聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查。其中出生后進入新生兒重癥監(jiān)護室(neonatal intensive care unit，NICU)者共224例。本研究內(nèi)容已獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過，且所有新生兒的監(jiān)護人均自愿參與本研究并簽署知情通知書。

1.2篩查方法

1.2.1聽力篩查

初篩時，針對母嬰同室的新生兒，采取瞬態(tài)誘發(fā)耳聲發(fā)射(transitory evoked otoacoustic emission，TEOAE)篩查方法，儀器為篩查型耳聲發(fā)射儀(產(chǎn)自美國VIASYS NEUROCARE公司，型號為GSI70)；對在NICU者進行TEOAE法聯(lián)合自動聽性腦干反應(yīng)(auto-auditory brainstem response，AABR)篩查方法，設(shè)備為客觀聽覺測試平臺(產(chǎn)自丹麥國際聽力設(shè)備公司，型號為Eclipse)。兩種方法均在<40dB(A)噪聲的環(huán)境下進行篩查。同時，針對未通過初篩的新生兒，于6周后進行第二次篩查操作，而復(fù)篩仍未通過的新生兒，則在3個月后進行聽力學(xué)診斷操作。

1.2.2基因篩查

采集新生兒出生第三天時的足跟血3滴，血斑直徑為6mm，并在室溫下進行放置，且經(jīng)過干燥后，通過基因芯片技術(shù)檢測新生兒4個常見耳聾基因。針對篩查后出現(xiàn)單雜合攜帶的新生兒，抽取其3mL靜脈血，并通過Sanger法進行SLC26A4、GJB3、GJB2及線粒體12SrRNA的全序列測序操作。

1.3聽力診斷與評估

針對聽力初篩、復(fù)篩未通過及攜帶耳聾基因的新生兒均進行聽力診斷處理。①基本情況：了解患兒母孕期疾病史、耳毒性藥物用藥史及耳聾家族遺傳史等情況。②聲導(dǎo)抗測試操作：儀器為美國診斷型聲阻抗分析儀(中耳分析儀)(產(chǎn)自美國VIASYS NEUROCARE公司，型號為GSI-TympStarⅡ)，針對年齡低于6個月的新生兒選擇1kHz進行探測音處理。③電生理檢查操作：檢查儀器為聽覺誘發(fā)電位儀(產(chǎn)自美國VIASYS NEUROCARE公司，型號為GSI Audera)，測試參數(shù)有短純音ABR、短聲ABR及多頻穩(wěn)態(tài)誘發(fā)電位等，均在<17dB(A)噪聲的環(huán)境下隔聲屏蔽室進行檢測，且于檢查前行皮膚脫脂處理，極間阻抗在5k及以下，參考電極則放于雙耳乳突后，而記錄電極處于前額正中處，地級則處于鼻根處。④影像學(xué)操作：針對診斷為感音神經(jīng)性聽力損失的新生兒，進行傳統(tǒng)顳骨CT檢查，并根據(jù)患兒情況必要時采取磁共振成像檢查。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

將全組新生兒的臨床相關(guān)數(shù)據(jù)錄入SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理分析，計數(shù)資料用百分率(%)表示并采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1全組新生兒聽力和耳聾基因篩查情況

全組中未通過聽力初篩者共315例(11.03%)，其中有31例(9.84%)新生兒攜帶耳聾基因突變，在2 541例通過聽力初篩的新生兒中，共有101例(3.97%)攜帶耳聾基因突變，未通過聽力初篩的新生兒耳聾基因突變攜帶率明顯高于通過初篩者(χ2=5.46，P=0.01)；全組總體耳聾基因攜帶率為4.62%(132/2 856)；母嬰同室新生兒與在NICU新生兒的耳聾基因突變攜帶率比較無顯著性差異(χ2=0.97，P=0.21)，見表1。

表1 全組新生兒聽力與耳聾基因篩查結(jié)果[n(%)]

2.2 132例耳聾基因攜帶者的基因分布情況

在132例耳聾基因攜帶者中，SLC26A4雜合突變34例，攜帶率為1.19%(34/2 856)；GJB2共85例，其中純合突變1例，復(fù)合雜合突變1例，雜合83例，攜帶率為2.98%(85/2 856)；線粒體12SrRNA突變5例，其中均質(zhì)突變4例，異質(zhì)性突變1例，攜帶率為0.18%(5/2 856)；GJB3雜合突變4例，攜帶率為0.14%(4/2 856)；GJB2合并SLC26A4突變4例，攜帶率為0.14%(4/2 856)，見表2。

表2 132例耳聾基因攜帶者聽力篩查情況(n)

注：攜帶率指的是新生兒耳聾攜帶者在全部2 856例新生兒中的比例。

2.3全組耳聾基因測序情況

在123例耳聾基因初篩雜合攜帶的新生兒中(34例SLC26A4，83例GJB2，4例GJB3，2例GJB2合并SLC26A4)，共有49例患兒家屬同意進行基因全序列測序操作，其中聽力損失患兒3例，初篩時均為235delC攜帶者；3例聽力損失患兒分別為1例極重度聽力損失，對其GJB2基因進行測序后發(fā)現(xiàn)另一致病位點131A>G，2例輕度聽力損失患兒測序時發(fā)現(xiàn)109G>A突變位點；其他46例新生兒聽力正常，均未發(fā)現(xiàn)致病突變。

2.4聽力學(xué)診斷情況

全組中共對185例新生兒進行聽力學(xué)診斷，其中27例聲導(dǎo)抗單耳或雙耳鼓室圖顯示B型曲線，聽力異常表現(xiàn)在輕度傳導(dǎo)性聽力損失，且均在9月齡時，聽力基本恢復(fù)正常；6例存在耳聾家族遺傳病史。最終5例患兒在3個月內(nèi)確診為感音神經(jīng)性聽力損失，且均為SLC26A4和GJB2基因突變，攜帶率為0.18%。5例感音神經(jīng)性聽力損失的檢測結(jié)果見表3。

表3 5例感音神經(jīng)性聽力損失患兒的檢測結(jié)果

Table 3 Screening results of 5 infants with sensorineural hearing loss

3討論

3.1新生兒耳聾基因的攜帶狀況

本研究發(fā)現(xiàn)，全組2 856例新生兒中有132例攜帶耳聾基因突變，攜帶率為4.62%。5例患兒在3個月內(nèi)確診為感音神經(jīng)性聽力損失，且均為SLC26A4和GJB2基因突變，攜帶率為0.18%。有研究報道指出，新生兒耳聾基因突變攜帶率為5.50%～6.83%，其中因SLC26A4與GJB2基因?qū)е碌穆犃p失攜帶率為0.60%～0.95%[8-9]?？梢姡@基因突變的攜帶率明顯較新生兒聽力損失發(fā)生率高，并且，SLC26A4與GJB2兩組基因突變是導(dǎo)致新生兒聽力損失的重要病因。本研究發(fā)現(xiàn)，在123例耳聾基因初篩雜合攜帶的新生兒中，聽力損失患兒3例，初篩時均為235delC攜帶者，結(jié)果提示235delC突變是耳聾基因較為常見的突變位點。本研究還發(fā)現(xiàn)，全組中未通過聽力初篩者共315例(11.03%)，其中有31例(9.84%)新生兒攜帶耳聾基因突變；而在2 541例通過聽力初篩的新生兒中，共有101例(3.97%)攜帶耳聾基因突變；未通過聽力初篩的新生兒耳聾基因突變攜帶率高于通過初篩者，結(jié)果提示可將聽力篩查未通過的人群視為耳聾基因篩查的重點研究對象，此類人群參與耳聾基因篩查顯得尤為必要。本研究同時發(fā)現(xiàn)，耳聾基因突變攜帶率在NICU新生兒與母嬰同室新生兒中并無明顯差異，結(jié)果表明遺傳因素對母嬰同室新生兒與NICU新生兒聽力的影響較為接近。

3.2新生兒耳聾基因的測序情況

本研究發(fā)現(xiàn)，在132例耳聾基因攜帶者中SLC26A4雜合突變34例，攜帶率為1.19%；GJB2共85例，攜帶率為2.98%；線粒體12SrRNA突變5例，攜帶率為0.18%；GJB3雜合突變4例，攜帶率為0.14%；GJB2合并SLC26A4突變4例，攜帶率為0.14%。其中，GJB2基因突變的表現(xiàn)包括非綜合征性隱性遺傳性聾，亦包括非綜合征性顯性遺傳性聾[10]。通常情況下，常染色體顯性遺傳性耳聾往往表現(xiàn)在遲發(fā)性聽力損失，其聽力損失程度較輕，而常染色體隱性遺傳性耳聾的發(fā)病時間較早，且癥狀較為嚴重[11-12]。本研究中5例聽力損失患兒，由于其攜帶多種基因位點，具有不同聽力學(xué)表型；其中1例患兒測序后結(jié)果為235delC/109G>A復(fù)合雜合突變。由于109G>A純合突變會導(dǎo)致離子通道功能出現(xiàn)異常，進而導(dǎo)致遺傳性耳聾。同時，109G>A突變攜帶率相對較高，而其臨床表型較輕。本研究5例感音神經(jīng)性聽力損失中，輕度聽力損失患兒2例，測序時發(fā)現(xiàn)109G>A突變位點。GJB2引起的聽力損失通常是非進行性的，而109G>A所引起的聽力損失會導(dǎo)致患者發(fā)生漸進性聽力下降[13]。GJB2純合突變與復(fù)合突變發(fā)病時間均較早，且聽力損失較為嚴重，甚至為極重度者。這可能與其攜帶的熱點突變位點密切相關(guān)，其中235delC是最為常見的突變位點，由于其是截斷突變之一，對聽力損失的影響較大，癥狀較重。本研究中無論是235delC純合突變患兒，亦或是235delC復(fù)合突變患兒，其聽力損失均較為嚴重。因GJB2基因突變所引起的病變以耳蝸為主，患者能夠保留較多的螺旋神經(jīng)纖維，且能夠維持聽覺通路的完整性[14]。

3.3同步行聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查的必要性及意義

耳聾基因篩查能夠及時篩查出致病的突變基因，可以有效延遲或避免遲發(fā)性聽力損失的出現(xiàn)，并且能夠發(fā)現(xiàn)聽力正常而攜帶耳聾基因的新生兒。有研究指出，攜帶耳聾基因的新生兒中約有82%能夠通過聽力篩查[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，在2 541例通過聽力初篩的新生兒中，有101例攜帶耳聾基因突變，攜帶率為3.97%?？梢?，若單一進行聽力篩查，容易遺漏攜帶耳聾基因突變的患兒。對此類高危人群進行聽力學(xué)診斷顯得尤為重要。本研究共有49例患兒家屬同意進行基因全序列測序操作，診斷為聽力損失的新生兒3例，且初篩時均為235delC攜帶者。3例聽力損失患兒分別為1例極重度聽力損失，對其GJB2基因進行測序后發(fā)現(xiàn)另一致病位點131A>G；對2例輕度聽力損失患兒測序時發(fā)現(xiàn)109G>A突變位點，結(jié)果提示有必要對235delC攜帶者進行基因測序，有助于及時發(fā)現(xiàn)其他致病突變。

本研究發(fā)現(xiàn)，全組中對185例新生兒進行了聽力學(xué)診斷，其中27例聲導(dǎo)抗單耳或雙耳鼓室圖顯示B型曲線，聽力異常表現(xiàn)在輕度傳導(dǎo)性聽力損失，且均在9月齡時，聽力基本恢復(fù)正常；6例存在耳聾家族遺傳病史。新生兒同步行聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查是及時發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性高危聽障患兒的重要方法。以往單一的聽力篩查方法僅對聽力篩查未通過的新生兒進行常規(guī)聽力檢測，而未對耳聾基因攜帶者做進一步評估。同步行聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查既能夠及時發(fā)現(xiàn)聽力篩查未通過的新生兒，亦能夠?qū)νㄟ^聽力篩查而攜帶耳聾基因突變的患兒做進一步聽力學(xué)診斷，最終提高診斷的準確性。

綜上所述，新生兒同步行聽力和耳聾基因聯(lián)合篩查可利用二者綜合篩查的作用，利于盡早發(fā)現(xiàn)聽力損失新生兒，特別是遲發(fā)性聽力損失者，具有顯著的臨床意義。