謝英華 章明敏

濕疹是由多種內(nèi)外致病因素引起的一種具有滲出傾向的皮膚炎癥反應(yīng)［1］。濕疹屬于中醫(yī)“濕瘡”范疇, 是皮膚科常見難治性疾?。?］。中藥治療濕疹不但毒副作用小, 且可以從多途徑抗炎、抑菌、消腫、止癢, 調(diào)節(jié)免疫失衡?？笋ツz囊由三七、黃連、黃芩等多味中藥組成, 具有清熱解毒、化瘀散結(jié)的功效。故因新擬定適應(yīng)證設(shè)計(jì)了對小鼠急性濕疹模型的影響試驗(yàn), 目的為考察克癀膠囊新的適應(yīng)證, 初步評價(jià)對急性濕疹是否具有治療作用, 以研究克癀膠囊新的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 供試藥：克癀膠囊(深圳市同安藥業(yè)有限公司, 國藥準(zhǔn)字Z10960065)；陽性對照藥1：皮敏消膠囊(沈陽澳華制藥股份有限公司, 國藥準(zhǔn)字Z10950057)；陽性對照藥2：復(fù)方甘草酸苷膠囊(濰坊中獅制藥有限公司, 國藥準(zhǔn)字H20080677)；2, 4-二硝基氯苯(DNCB)(廣州市丹安儀器儀表有限公司, 批號201604191)；丙酮(衡陽市凱信化工試劑股份有限公司, 批號2016011400)。

1.2 儀器 電子天平［德國賽多利斯公司(Sartorius), 型號BP211D］。電子天平［賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司,型號GL224-1SCN］。電子天平［上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司, 型號MP12001］。普通冰箱［青島海爾股份有限公司,型號BCD-290W］。

1.3 動(dòng)物 檢疫合格SPF級KM小鼠79只, 雄性45只, 雌性34只,體重19.9～28.2 g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號No.44007200046862。生產(chǎn)單位：廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK(粵)2013-0002。動(dòng)物接收后進(jìn)行檢疫及適應(yīng)性觀察,1次/d, 連續(xù)觀察4 d, 內(nèi)容包括一般精神狀態(tài)、皮毛、活動(dòng)情況等。

1.4 動(dòng)物模型制作 取10只小鼠為正常對照組。其余69只小鼠試驗(yàn)前1 d于小鼠背部選2 cm×2 cm大小區(qū)域用剃毛刀去毛。第1天, 以7% DNCB 100 μl外涂小鼠去毛背部致敏；第2天, 同法強(qiáng)化涂抹1次, 再次致敏；第7天, 在小鼠右耳雙側(cè)用移液槍外涂1% DNCB 20 μl激發(fā)。激發(fā)后肉眼觀察小鼠右耳明顯腫脹, 局部毛細(xì)血管擴(kuò)張, 或有少許滲出物,提示急性濕疹模型成功建立。

1.5 分組及給藥 造模動(dòng)物因體重、造模制作成功程度淘汰9只小鼠, 其余造模成功的動(dòng)物按體重分層隨機(jī)法隨機(jī)分為6組, 每組10只, 分別為模型對照組、皮敏消膠囊組(0.96 g/kg)、復(fù)方甘草酸苷膠囊組(0.045 g/kg)、克癀膠囊高劑量組(2.90 g/kg)、克癀膠囊中劑量組(1.45 g/kg)、克癀膠囊低劑量組(0.73 g/kg), 克癀膠囊高、中、低劑量分別相當(dāng)于臨床等效劑量的2、1、0.5倍。激發(fā)后24 h, 各組小鼠每日分別灌胃給予相應(yīng)藥物0.1 ml/10 g, 連續(xù)給藥3 d, 1次/d, 正常對照組和模型對照組給予純化水, 給藥期間用正常飼料喂養(yǎng)。給藥方案見表1。

表1 各組小鼠急性濕疹模型給藥方案

1.6 觀察指標(biāo) 試驗(yàn)期間, 觀察每組小鼠背部皮膚的濕疹情況(皮膚上明顯的紅腫、斑疹、糜爛和滲出), 每3天測量一次體重。末次給藥后24 h, 用游標(biāo)卡尺測量雙耳厚度(取3個(gè)點(diǎn)測量后取均值), 計(jì)算厚度差；小鼠脫頸椎處死, 剪下雙耳, 用6 mm打孔器打下左右耳相同部位, 稱雙耳片重, 計(jì)算兩耳片重量之差。計(jì)算厚度差=右耳厚度-左耳厚度, 重量差=右耳重量-左耳重量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差()表示, 多組比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA), 兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

模型對照組小鼠造模側(cè)耳部發(fā)紅、腫脹, 正常對照組小鼠兩耳色澤及厚度相近, 其余各給藥組右耳紅腫程度狀況不一。模型對照組小鼠左右耳厚度差大于正常對照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 說明KM小鼠急性濕疹模型成立?？笋ツz囊高劑量組、皮敏消膠囊組、復(fù)方甘草酸苷膠囊組小鼠左右耳厚度差低于模型對照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型對照組小鼠的左右耳重量差大于正常對照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 說明KM小鼠急性濕疹模型成立?？笋ツz囊高劑量組、皮敏消膠囊組、復(fù)方甘草酸苷膠囊組小鼠的左右耳厚度差低于模型對照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。注：與正常對照組比較,aP＜0.05；與模型對照組比較,bP＜0.05

表2 各組小鼠左右耳厚度差和左右耳重量差比較( )

表2 各組小鼠左右耳厚度差和左右耳重量差比較( )

組別 只數(shù) 左右耳厚度差(mm) 左右耳重量差(mg)正常對照組 10 0.004±0.010 0.152±0.397模型對照組 10 0.059±0.011a 1.290±0.372a克癀膠囊高劑量組 10 0.045±0.019b 0.825±0.459b克癀膠囊中劑量組 10 0.051±0.014 0.908±0.515克癀膠囊低劑量組 10 0.056±0.014 1.016±0.727皮敏消膠囊組 10 0.017±0.011b 0.576±0.427b復(fù)方甘草酸苷膠囊組 10 0.022±0.011b 0.673±0.452b

3 討論

濕疹屬于中醫(yī)的“濕瘡”或“浸淫瘡”等范疇, 目前多認(rèn)為是由于內(nèi)外因素相互作用引起的炎癥反應(yīng), 類似于變應(yīng)性接觸性皮炎, 屬于Ⅳ型超敏反應(yīng)［3,4］。Ⅳ型超敏反應(yīng)是由T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答, 效應(yīng)Th1細(xì)胞識別抗原后活化, 釋放多種細(xì)胞因子和趨化因子。其中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和淋巴毒素α(LTα)使局部血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)增加, 促進(jìn)單個(gè)核細(xì)胞至抗原存在部位聚集, 引起組織損傷；γ-干擾素(IFN-γ)和TNF-α可使巨噬細(xì)胞活化, 進(jìn)一步釋放促炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-1和IL-6等加重炎癥反應(yīng)［5］。

克癀膠囊由三七、黃芩、人工牛黃、人工麝香等多種中藥組成。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)三七總皂苷(PNS)可抑制INF-γ的分泌, 抑制TNF-α、IL-1β的表達(dá), 并減少其信號傳遞［6］, 促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子IL-4的分泌, 對Th1/Th2型細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡狀態(tài)有一定的調(diào)節(jié)作用［7］, 能緩和緩激肽、組胺、5-羥色胺等導(dǎo)致的血管通透性增加等癥狀［8,9］。黃芩中黃芩苷能抑制TNF-α和IL-6的表達(dá)［10］, 能夠抑制體內(nèi)熱源物質(zhì)生成［11］, 提高細(xì)胞膜通透性, 增加膜的穩(wěn)定性, 對肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜有保護(hù)作用, 從而阻止其脫顆粒, 減輕過敏反應(yīng)［12］。因此, 克癀膠囊可能是通過以上機(jī)制來調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng), 促進(jìn)炎癥的轉(zhuǎn)歸。

傳統(tǒng)中醫(yī)將急性和亞急性濕疹一般辨證為濕熱蘊(yùn)結(jié)型和脾虛濕蘊(yùn)型［2］?？笋ツz囊由多種中藥配方組成, 適用于濕、熱、瘀所致各種疾病, 其中三七等功能活血化瘀, 黃芩、黃連、黃柏等功能清熱燥濕, 紅曲等功能健脾祛濕。目前使用抗組胺藥和皮質(zhì)激素類藥物治療濕疹療效不令人滿意, 治療濕疹優(yōu)效的制劑較缺乏［13］?？笋ツz囊高、中、低劑量組(2.90、1.45、0.73 g/kg)對小鼠急性濕疹模型引起的耳廓腫脹均有不同程度的改善作用, 其中以克癀膠囊高劑量組表現(xiàn)最好。本研究初步提示克癀膠囊對小鼠急性濕疹有一定的藥效學(xué)基礎(chǔ), 實(shí)際對濕疹患者治療效果有待進(jìn)一步臨床驗(yàn)證。