謝有發(fā) 馬曉娟 熊艷霞 楊凌宇 呂毅斌

摘 要：采用高效液相色譜法對(duì)兩個(gè)不同廠家的藍(lán)莓提取物和新鮮藍(lán)莓中花青素的含量和種類進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示，A藍(lán)莓提取物的花色苷種類單一，以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷為主，花青素含量40.96%；B藍(lán)莓提取物的花色苷種類豐富，花青素含量43.15%；新鮮藍(lán)莓花青素含量4.45mg/g。雖然兩個(gè)樣品均達(dá)到了產(chǎn)品規(guī)格（花青素含量≥25%），但A藍(lán)莓提取物的色譜圖與新鮮藍(lán)莓果的的色譜圖不符，該方法能明顯對(duì)比出不同廠家藍(lán)莓提取物的差異。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓提取物 花青素差異

藍(lán)莓因富含豐富的花青素，對(duì)保護(hù)視力、緩解眼睛疲勞等具有良好效果，被譽(yù)為“美瞳之果”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，花青素具有抗氧化、抗腫瘤、防治心腦血管疾病、促進(jìn)視力等作用[1]，在臨床上廣泛應(yīng)用于治療高血壓性視網(wǎng)膜病變等疾病，是眼科藥物的主要活性成分[2]。藍(lán)莓提取物是一種略帶酸味的深紫色粉末，其由新鮮或冷凍的藍(lán)莓果經(jīng)提取精制而成。目前，藍(lán)莓提取物在歐洲作為藥物使用，在美國(guó)和日本則作為保健食品使用。

藍(lán)莓果實(shí)中存在的花青素種類主要有5種——矢車菊素（Cy）、飛燕草素（Dp）、芍藥素（Pn）、牽牛花素（Pt）和錦葵素（Mv），他們以單糖苷形式（阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖）存在[3]，其中3-糖苷在自然界中最豐富，而高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定花青素以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷為對(duì)照品居多。

隨著人們生活水平的提高和對(duì)視力保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，藍(lán)莓提取物日益受到消費(fèi)者的關(guān)注和青睞，也引起了不少生產(chǎn)企業(yè)的聚焦。本研究采用高效液相色譜法，以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷作為對(duì)照品，對(duì)兩個(gè)不同廠家的藍(lán)莓提取物與藍(lán)莓鮮果中花青素的含量和種類進(jìn)行了對(duì)比研究，為選購(gòu)藍(lán)莓提取物提供了有力的質(zhì)量依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮藍(lán)莓：貴州麻江產(chǎn)地；藍(lán)莓提取物：廠家提供（分別編號(hào)A、B）；矢車菊素-3-O-葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品（≥99%）：成都曼思特生物科技有限公司；甲醇：國(guó)產(chǎn)色譜純；甲酸、鹽酸等為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

A g i l e n t 1 2 6 0型高效液相色譜儀：A g i l e n t公司；H H - 2型數(shù)顯恒溫水浴鍋：國(guó)華電器有限公司；A B 2 0 4 - N型電子天平：M E T T L E R T O L E D O公司；3 2 0 p H計(jì)：M e t e r M E T T L E R T O L E D O公司；超聲清洗器：南昌科昌達(dá)超聲波設(shè)備廠；離心機(jī)：長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；超純水儀：H e a l F o r c e D e v e l o p m e n t L t d。

1.3 供試品溶液的制備

1.3.1藍(lán)莓供試品溶液制備

精確稱取新鮮藍(lán)莓6 . 1 9 2 4 g，研碎，加入5 0 m L 2 %的鹽酸甲醇溶液（V/ V），常溫超聲提取1 h，4 0 0 0 r/ m i n離心1 5 m i n后取上清液，加2 %的鹽酸甲醇溶液（V/ V）定容至1 0 0 m L，用0 . 4 5μm濾膜過濾即得藍(lán)莓樣品。

1.3.2藍(lán)莓提取物供試品溶液制備

分別精確稱取兩種提取物樣品各1 0 . 0 m g，加3 %的甲酸水溶液（V/ V）定容至1 0 m L，用0 . 4 5μm濾膜過濾，即得藍(lán)莓提取物樣品。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

取矢車菊素- 3 - O -葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定，加2 %的鹽酸甲醇溶液（V/ V）制成濃度為0 . 0 4 9 m g / m L標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用0 . 4 5μm濾膜過濾，即得標(biāo)準(zhǔn)品樣品。

1.4 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18 5μm 250×4.6mm；檢測(cè)波長(zhǎng)：525nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL，梯度條件見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 矢車菊素-3-O-葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定結(jié)果（見圖1）

2.2 藍(lán)莓提取物樣品A、B與藍(lán)莓的測(cè)定結(jié)果（見圖2、圖3、圖4）

由圖2、圖3、圖4可知，樣品A的花色苷種類單一，同圖1標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜類似，矢車菊素的峰面積明顯較大，使其他小峰面積均可忽略不計(jì)；樣品B的花色苷種類相對(duì)豐富，其中含有矢車菊素的峰。天然藍(lán)莓果的花青素圖譜是由多個(gè)峰組成，矢車菊素只占其中一部分。

2.3藍(lán)莓、樣品A、樣品B的花色苷種類及含量對(duì)比（見圖5、表2）

表2的結(jié)果表明，按總峰面積計(jì)算花青素含量，樣品A的總峰面積主要來源于矢車菊素，含量40.96%雖已達(dá)到了所謂的規(guī)格（花青素≥25%），但來源不真實(shí)。樣品B的花青素含量結(jié)果則是多個(gè)峰面積的總和，同樣達(dá)到了產(chǎn)品規(guī)格。藍(lán)莓果的花青素含量0.445%，即4.45mg /g，符合一般藍(lán)莓果花青素的含量范圍[4-8]。

圖5的結(jié)果表明，與天然、新鮮的藍(lán)莓果相比較，樣品A花色苷種類單一，以矢車菊素-3-O-葡萄糖為主，樣品B與鮮藍(lán)莓原料中花色苷種類較一致。因樣品A花色苷種類只有矢車菊素一個(gè)大峰，不符合天然藍(lán)莓提取物的特點(diǎn)，不建議購(gòu)買使用。

3 結(jié)論

藍(lán)莓提取物被廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品和保健產(chǎn)品等領(lǐng)域，具有巨大的市場(chǎng)潛力。正因其產(chǎn)品附加值高，利潤(rùn)空間相當(dāng)巨大，多家企業(yè)都在生產(chǎn)、銷售藍(lán)莓提取物，其安全性和真實(shí)性成為人們，以及相關(guān)企業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)之一。本研究為鑒別藍(lán)莓提取物提供了研究思路和方法，采用高效液相色譜法測(cè)定更準(zhǔn)確、高效，但其分析方法尚需進(jìn)一步優(yōu)化、完善。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉學(xué)銘，廖森泰，肖更生，等.花青素的吸收與代謝研究進(jìn)展[J].中草藥，2007，38（6）：953-956.

[2] 劉春民，王抗美，鄒玲.花青素對(duì)近視青少年視疲勞癥狀及視力的影響[J].中國(guó)實(shí)用眼科雜志，2005，23（6）：607-609.

[3] Alejandro. Purification and identification of Capulinanthocyanins[J].FoodChemistry，1999，65：201-206.

[4]田密霞， 李亞東，胡文忠等.60種藍(lán)莓花青素的含量及抗氧化性的比較研究[J].食品研究與開發(fā)，2014，35（21）：1-5.

[5]王兆雨，徐美玲，朱蓓薇.藍(lán)莓花青素的提取工藝條件[J].大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué) 報(bào)，2007，26（3）：196-198.

[6]李路寧，陳 威，趙立儀等.藍(lán)莓花青素的?；捌淇寡趸栽u(píng)價(jià)[J]食品工業(yè)科技.2016.35（6）：102-106.

[7]孫倩怡，魯寶君，張晶.藍(lán)莓花青素的研究進(jìn)展[J]食品工業(yè)科技.2016.20（37）：381-390.

[8]嚴(yán)紅光，張文華，丁之恩.兔眼藍(lán)莓花青素穩(wěn)定性研究[J]食品工業(yè)科技.2013.13（34）：119-123.