蘇 怡，白 晶，張 雷，任啟智

細菌性痢疾（菌?。┦怯芍举R菌引起的一種急性腸道傳染病，是我國法定乙類傳染病。該病發(fā)病率高，主要傳染源為患者和病菌攜帶者，主要傳播途徑是糞-口傳播，人群普遍易感。為掌握我省細菌性痢疾發(fā)病情況，了解發(fā)病的主要特征、病原菌的菌型分布、流行菌株的變遷和耐藥譜的變化，我中心自2005年起，根據(jù)《全國細菌性痢疾監(jiān)測方案》要求，結(jié)合我省實際，開展痢疾監(jiān)測工作?，F(xiàn)對2010—2015年在哈爾濱市兒童醫(yī)院、佳木斯市中心醫(yī)院、佳木斯大學附屬第一醫(yī)院3個哨點醫(yī)院采集的4182份疑似痢疾樣本進行分析，將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本 采自2010—2015年哨點醫(yī)院（哈爾濱市兒童醫(yī)院、佳木斯市中心醫(yī)院、佳木斯大學附屬第一醫(yī)院）腸道門診就診患者。

1.2 方法

1.2.1 填寫病例個案調(diào)查表 主要內(nèi)容包括病例一般情況、發(fā)病情況、臨床癥狀、診斷依據(jù)、流行病學調(diào)查（發(fā)病前1周內(nèi)）等。

1.2.2 標本采集 采集腹瀉病例標準：大便次數(shù)每日≥3次，糞便的性狀異常者；疑似病例，有膿血便或粘液便或水樣便或稀便，或伴有里急后重癥狀，并除外其他原因腹瀉病例。采用肛拭或便盒留便，2 h內(nèi)送到實驗室進行檢驗。

1.2.3 分離培養(yǎng)及鑒定 用接種環(huán)多點沾取樣本，直接劃線分離于SS、EMB（或HE、麥康凱）瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24～48 h，觀察挑選形態(tài)為無色、半透明、圓形、濕潤、光滑、突起、直徑大小為1～2 mm可疑菌落，轉(zhuǎn)種于克氏雙糖鐵斜面和葡萄糖半固體培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)18～ 24 h后，采用法國生物梅里埃腸道菌試劑鑒定條API 20E進行鑒定，并用志賀菌免疫血清進行凝集分型鑒定。

1.2.4 藥物敏感試驗 根據(jù)臨床與實驗室標準化協(xié)會推薦的K-B瓊脂法進行實驗。將含有定量抗菌藥物的紙片貼在覆蓋測試菌的瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16～18 h后取出。紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周圍擴散，形成遞減的濃度梯度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測定菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即抑菌圈。用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數(shù)毫米數(shù)并記錄，抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的藥物敏感（藥敏）性。每次藥敏試驗須用ATCC 25922大腸桿菌做質(zhì)控。只有當質(zhì)控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內(nèi)測試菌株的結(jié)果才可以報告。

1.2.5 材料與試劑 實驗所使用的培養(yǎng)基及藥敏試驗MH平板由北京陸橋技術股份有限公司提供；志賀菌免疫血清由寧波天潤生物藥業(yè)有限公司提供；藥敏紙片由賽默飛世爾科技（中國）有限公司提供；標準質(zhì)控菌株大腸埃希菌ATCC 25922由中國生物制品檢定所提供。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用描述性流行病學分析方法，計算相應的頻數(shù)或者率。

2 結(jié) 果

2.1 疑似痢疾樣本采集時間、人群分布 病例全年散發(fā)，各月均有病例發(fā)生，有明顯的季節(jié)高峰，每年5月開始發(fā)病人數(shù)明顯上升，在6—9月達到高峰，占總病例數(shù)的56.67%，分離得到的志賀菌均集中在此期間。10月后逐步下降，次年1—2 月達到最低點。

2.2 菌株檢出情況 從采集的4182份樣本中，共分離到32株志賀菌，分離率為0.77%。其中福氏志賀菌21株，宋內(nèi)志賀菌11株。血清學分型與生化反應鑒定結(jié)果一致。菌株分離得到的時間集中在每年的5—10月，其中8—9月最多，共計20株，占62.5%。病例多發(fā)于0～10歲兒童，共計28例，占87.5%；29～40歲有3株，75歲1株。見表1。

2.3 藥敏結(jié)果 對監(jiān)測方案要求的10種抗生素進行藥敏檢測。分離得到的32株志賀菌對頭孢噻吩、頭孢噻肟、慶大霉素及環(huán)丙沙星敏感，敏感率分別為71.7%、75.5%、84.7%及71.4%；對利福平、萘啶酸、氨芐西林、四環(huán)素及復方新諾明耐藥，耐藥率分別為100%、80.5%、82.4%、90.3%及95.1%。見表2。

表1 2010—2015年黑龍江省3個哨點醫(yī)院志賀菌株分離情況（株）Table 1 Isolates of Shigella in 3 sentinel hospitals in Heilongjiang Province from 2010 to 2015 (strains)

3 討 論

細菌性痢疾仍是全球性的公共衛(wèi)生問題，全球每年發(fā)病人次達1165億，死亡約110萬例。本研究對2010—2015年在我省3個哨點醫(yī)院采集的4182份疑似痢疾樣本進行分析，共分離志賀菌32株，其中以福氏志賀菌為主（21株），宋內(nèi)氏志賀菌次之（11株），與全國大多數(shù)省份國家級監(jiān)測點得到的數(shù)據(jù)一致[2，4]。

細菌性痢疾具有明顯的季節(jié)性，6—9 月達到高峰，研究中志賀菌分離時間均集中在5—10月，其中8—9月最多，共計20株，占62.5%。與當?shù)卦摃r間段氣溫高、居民對生冷的果蔬和飲料進食量增大、蒼蠅密度增高等因素有關。

0～10歲兒童多發(fā)為人群流行特征。本研究中0～10歲兒童28例，占檢出菌株者中的87.5%。其原因與幼兒胃腸道菌群和免疫系統(tǒng)功能尚未健全，家庭食品加工、喂食過程中的不良衛(wèi)生條件和飲食習慣有關。

抗生素的廣泛使用，使志賀菌的耐藥菌株逐年增加。將分離的32株志賀菌進行10種抗生素藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，對利福平、萘啶酸、氨芐西林、四環(huán)素及復方新諾明耐藥，對頭孢噻吩、頭孢噻肟、慶大霉素及環(huán)丙沙星敏感，與國內(nèi)相關文獻報道大體吻合[4-5，13]。

本研究中檢出2010—2015年志賀菌32株，陽性檢出率低于全國檢出率，可能受以下因素影響：①我省地處東北地區(qū)，適合病原菌生存的氣候條件如溫度、濕度、降雨等夏季高溫天氣時間較短，病例和疫情的發(fā)生相比我國西南省份及東南沿海地域要低很多。②隨著人們生活理念的變化，到醫(yī)院就診的腹瀉病人已經(jīng)有逐年減少的趨勢，而即使去醫(yī)院，多數(shù)病例在就診前也已自主服用過抗生素，因此嚴重干擾采集樣本的實驗室檢驗結(jié)果。③由于資金人員等因素匱乏，監(jiān)測點的設置很有局限性，覆蓋面較小，同時不同地市病例報告的準確性又存在誤差。④在對病例樣本采集、保存運送等環(huán)節(jié)也存在不及時不規(guī)范等問題，從而影響病例樣本的陽性檢出率。

表2 32株志賀菌株藥敏試驗結(jié)果（株）Table 2 Results of drug sensitive test of 32 strains of Shigella (strains)