張明鏡，邱 鳳，姜力源，蹇文靜，廖豪嬌，丁顯平

(1.重慶市潼南區(qū)婦幼保健計劃生育服務(wù)中心，重慶 402660;2.四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳醫(yī)學(xué)研究所/特色生物資源研究與利用川渝共建重點實驗室，成都 610064)

珠蛋白生成障礙性貧血原名地中海貧血，又稱海洋性貧血(簡稱地貧)，由于遺傳基因的缺失或突變造成血紅蛋白中珠蛋白鏈合成障礙，從而產(chǎn)生貧血或病理狀態(tài)。其中以α-地中海貧血(簡稱α-地貧)和β-地中海貧血(簡稱β-地貧)兩種類型較為常見[1-2]。為探討潼南區(qū)地貧的分布情況，以潼南區(qū)婦幼保健計劃生育服務(wù)中心近3年的地貧篩查數(shù)據(jù)為研究對象，結(jié)合臨床地貧的基因診斷與血液常規(guī)分析的檢測結(jié)果，研究血液常規(guī)檢測和地貧基因診斷結(jié)果在妊娠女性中的臨床價值，防止因漏篩而出現(xiàn)不可挽回的損失?，F(xiàn)特將重慶市潼南區(qū)婦幼保健計劃生育服務(wù)中心近3年篩查的妊娠女性地貧基因攜帶情況統(tǒng)計分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015-2017年，在本院婦產(chǎn)科門診做地貧篩查的妊娠女性，共計5 172例，年齡16～44歲，其中小于20歲223例，占篩查總數(shù)的4.31%；20～35歲4 730例，占篩查總數(shù)的91.45%；大于35歲219例，占篩查總數(shù)的4.24%；并對篩查出的地貧基因異常攜帶者相應(yīng)血液學(xué)常規(guī)檢測結(jié)果進(jìn)行比較分析。

1.2儀器與試劑 深圳邁瑞B(yǎng)C-5600全自動血細(xì)胞分析儀(用于血液常規(guī)的檢測)；美國BIO-RAD公司生產(chǎn)的S1000基因擴(kuò)增儀(用于α、β-地貧基因的分型)，POWER 300凝膠電泳系統(tǒng)，Gel DocTM2000型凝膠成像系統(tǒng)；德國EPPENDORF公司生產(chǎn)的5415D高速離心機；韓國FINEMOULD公司生產(chǎn)的Combi-D24雙層雜交箱。血常規(guī)分析均采用邁瑞原廠生產(chǎn)試劑，校準(zhǔn)品與質(zhì)控品為邁瑞原廠產(chǎn)品，儀器按使用要求定期校準(zhǔn)維護(hù)和常規(guī)質(zhì)控監(jiān)測；地貧基因檢測均采集標(biāo)本后統(tǒng)一送至重慶醫(yī)學(xué)檢驗中心實驗室檢測。

1.3方法 按無菌操作抽取妊娠女性靜脈血2.0 mL至含有乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝劑的真空管中，并于30 min內(nèi)完成全血細(xì)胞計數(shù)檢測；同時抽取3.0 mL靜脈血至含有枸櫞酸鈉抗凝劑的真空管中，充分混勻后，密封送檢；由實驗室采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對標(biāo)本進(jìn)行地貧基因的分析檢測。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12015-2017年地貧基因檢出情況 通過對近3年的檢測數(shù)據(jù)的分析，發(fā)現(xiàn)在本院就診的妊娠女性地貧基因異常的攜帶率為7.48%(387/5 172)，見表1。

2.2α-地貧和β-地貧基因檢出結(jié)果情況 α1-地貧基因檢出例數(shù)總計111例，占總分析人群的2.15%(111/5 172)。α2-地貧基因檢出例數(shù)總計82例，占總分析人群的1.59%(82/5 172)；其中2015年僅檢出有9例，檢出比例為0.69%(9/1 298)；2016年僅檢出有5例，檢出比例為0.40%(5/1 239)；而2017年則共檢出68例，檢出比例為2.58%(68/2 635)，見表2。β-地貧異?；蚪Y(jié)果共194例，占總分析人群的3.75%(194/5 172)，見表3。

表1 地貧基因檢出情況

表2 α-地貧基因檢出情況

表3 β-地貧基因檢出情況

2.3α-地貧和β-地貧基因同時缺失或突變的檢出情況 8例患者同時出現(xiàn)2種地貧基因缺失或突變的情況，占總分析人群的0.15%(8/5 172)，其具體缺失或突變類型見表4。

2.4α-地貧和β-地貧基因缺失或突變情況的平均紅細(xì)胞體積(MCV)分析 通過對地貧基因異常攜帶者血常規(guī)結(jié)果的分析，發(fā)現(xiàn)MCV≤80 fL的α1-地貧基因，占相應(yīng)型別的比例為86.49%(96/111)；MCV≤80 fL的α2-地貧基因，占相應(yīng)型別的比例為17.07%(14/82)；MCV≤80 fL的β-地貧基因分型(17種突變)，占相應(yīng)型別的比例為81.44%(96/194)。又通過對3種地貧基因類型相應(yīng)的MCV進(jìn)行χ2檢驗，發(fā)現(xiàn)3組數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=133.87，P=0.001)，見表5。

2.5α-地貧和β-地貧基因缺失或突變情況的平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)分析 MCH≤27 pg的α1-地貧基因，占相應(yīng)型別的比例為90.09%(100/111)；MCH≤27 pg的α2-地貧基因，占相應(yīng)型別的比例為52.44%(43/82)；MCH≤27 pg的β-地貧基因分型(17種突變)，占相應(yīng)型別的比例為88.66%(172/194)。又通過對3種地貧基因類型相應(yīng)的MCH進(jìn)行χ2檢驗，發(fā)現(xiàn)3組數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=57.70，P=0.001)。見表6。

表4 α-和β-地貧基因同時缺失或突變的檢出情況

注：2017年出現(xiàn)了2種同時缺失或突變的情況有3種

表5 α-和β-地貧基因缺失或突變情況的MCV分析

表6 α-和β-地貧基因缺失或突變情況的MCH分析

3 討 論

地貧在全世界廣泛分布，也是累積人數(shù)最多的常染色體隱性單基因遺傳病[3]。我國地貧患者主要以華南和西南地區(qū)較為多見，包括廣東、廣西、海南、四川、云南、貴州等地，其中海南和兩廣是地貧的高發(fā)區(qū)[4]。而β-地貧在我國也具有較高的發(fā)病率，其中在兩廣和西南地區(qū)的發(fā)病率可高達(dá)2%，潼南區(qū)地處祖國西南，也處于該病高發(fā)地區(qū)之內(nèi)[5]。對于目前地貧流行情況的了解，對患者的治療顯得尤為重要?；驒z測技術(shù)可以精準(zhǔn)地診斷地貧基因的缺失和突變情況，是目前診斷地貧唯一的金標(biāo)準(zhǔn)。無論是地貧的臨床確診還是產(chǎn)前診斷，基因檢測都發(fā)揮著極其重要的作用[6]。

地貧是一種遺傳性慢性溶血性疾病，不僅威脅到患者生命，還可能影響下一代的生命[7]。由于珠蛋白基因的缺失或點的突變，肽鏈合成障礙導(dǎo)致本病的發(fā)生。正常情況下，子女是從父母雙方分別繼承2個α-珠蛋白基因合成正常的α-珠蛋白鏈(αα/αα)；又從父母雙方分別繼承1個β-珠蛋白基因合成正常的β-珠蛋白鏈。由于基因缺陷的復(fù)雜性與多樣性，導(dǎo)致缺乏的珠蛋白鏈類型、數(shù)量及臨床癥狀變異性也較大[8]。地貧主要分為α-地貧和β-地貧兩大類別，再往下又可分為許多亞型，臨床也多見α-地貧和β-地貧兩種類型[9]。本研究中對5 127例檢測對象的篩查，也僅檢出了α-地貧和β-型地貧兩種類型，其總體攜帶率為7.48%(387/5 172)；其中α1-地貧的攜帶率為2.15%(111/5 172)，α2-地貧的攜帶率為1.59%(82/5 172)，β-地貧的攜帶率為3.75%(194/5 172)；共檢出8例同時存在2種地貧基因缺失或突變的患者，占總分析人群的0.15%(8/5 172)。

醫(yī)生一般通過臨床表現(xiàn)和實驗室檢測，結(jié)合家族史對地貧作出診斷。但輸血治療后的血液檢查會與實際結(jié)果有所不同，而對于正常血液學(xué)檢測結(jié)果也應(yīng)多加注意，只有遺傳學(xué)和分子生物學(xué)檢查才能確定為純合子、雜合子及雙重雜合子等情況，僅根據(jù)臨床特點和血常規(guī)分析結(jié)果是無法確診的，甚至?xí)斐陕z、漏診情況出現(xiàn)。又因為基因遺傳的復(fù)雜性，即使相同的基因類型也可能出現(xiàn)不同的臨床特點，導(dǎo)致臨床表現(xiàn)不同[10]，這和本研究中MCV與MCH的數(shù)據(jù)是一致的。α1-地貧和β-地貧的血液學(xué)結(jié)果中MCV≤80 fL的情況占總研究人群的86.49%(96/111)、81.44%(158/194)，而α2-地貧則僅有17.07%(14/82)；α1-地貧和β-地貧的血液學(xué)結(jié)果中MCH≤27 pg的情況占總研究人群的90.09%(100/111)、88.66%(172/194)，但α2-地貧則占52.44%(43/82)。即在α2-地貧時，約有80%的攜帶者紅細(xì)胞MCV>80 fL，約有50%的攜帶者紅細(xì)胞MCH>27 pg。所以在根據(jù)血常規(guī)的分析結(jié)果進(jìn)行選擇性地貧篩查時，很容易造成80%左右的α2-地貧漏篩，這也是2015、2016年α2-地貧檢出率偏低的問題所在[11-12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，2015、2016年由于對地貧基因的檢測臨床多針對MCV 和MCH異常者，對血液學(xué)檢測結(jié)果正常人群則較少檢測，因而α2-地貧的檢出率分別為0.69%(9/1 298)和0.40%(5/1 239)，導(dǎo)致其檢出率偏低；而2017年對正常血液學(xué)檢測結(jié)果者進(jìn)行了地貧的篩查，發(fā)現(xiàn)α2-地貧的檢出率上升到2.58%(68/2 635)，檢出率驟然上升5倍；而對α1-地貧和β-地貧的檢出則恰好相反，2015、2016分別為2.54%(33/1 298)、2.66%(33/1 239)和4.70%(61/1 298)、4.60%(57/1 239)，發(fā)現(xiàn)α1-地貧和β-地貧的檢出率分別下降為1.71%(45/2 635)和2.88%(76/2 635)，檢出率下降了35%左右，這就是因為在血常規(guī)正常結(jié)果的人群中存在著部分地貧基因異常攜帶者。

對于地貧，目前臨床上沒有行之有效的治療方法。只有通過產(chǎn)前篩查，對篩查出的高風(fēng)險胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷，減少重型地貧患兒的出生。當(dāng)夫婦一方是地貧基因攜帶者時，會有50%概率引起下一代攜帶地貧基因；當(dāng)夫婦都是地貧基因攜帶者時，則下一代仍有50%的概率會攜帶其中一方的地貧基因，25%的概率會攜帶雙方的地貧基因，也有25%的概率不會攜帶地貧基因；當(dāng)夫婦都是同一類型地貧基因攜帶者時，則可能加大出現(xiàn)重型地貧患兒的概率，即通常所說的血紅蛋白Bart′s胎兒水腫癥，若未終止妊娠，胎兒也可能會在母體中死亡，即使正常生產(chǎn)，胎兒一般也會在3個月內(nèi)發(fā)病而最終導(dǎo)致死亡[13]。雖然過了危險期，治療胎兒地貧的癥狀也只能采取長期輸血維持，巨大的經(jīng)濟(jì)開銷給普通家庭造成嚴(yán)重影響，且重型地貧治療效果不佳，最終也無法避免患兒的死亡[14-15]。對于地貧雜合子間的婚配也應(yīng)進(jìn)行地貧高危胎兒的產(chǎn)前診斷，有效預(yù)防和控制新生兒出生缺陷[16]。

綜上所述，地貧對妊娠女性有較大影響，將其納入常規(guī)的孕期篩查項目非常有必要；僅憑著血常規(guī)的分析結(jié)果，而選擇性地篩查地貧，造成α2-地貧的大部分漏診，這也給臨床帶來了很大的潛在風(fēng)險。因而地貧基因檢測在妊娠女性中有較高的臨床應(yīng)用價值，對臨床預(yù)防和控制新生兒出生缺陷具有極其重要的意義。