白春杰

(內(nèi)蒙古通遼市食品藥品檢驗(yàn)所, 內(nèi)蒙古 通遼 028000)

玉日力-13是由木香、梔子、石榴、綠絨蒿、瞿麥、香青蘭、信筒子、雕糞、丹參、蓽茇、高良姜、芫荽果、山奈等13味中藥粉碎后制成的水丸。其功效為提陽健胃，消積化痰。本試驗(yàn)對(duì)玉日力-13中木香所含的藥用成分木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯利用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果，測(cè)定準(zhǔn)確，方法可靠，可作為玉日力-13的質(zhì)量控制方法。

1 材料

1.1 儀器 Waters 2695-2998型高效液相色譜儀(美國(guó)科學(xué)儀器公司)，Empower 2色譜工作站；色譜柱：Alltima C18柱 (250×4.6mm，粒度5μm)；XS3DU 型電子天平(百萬分之一，梅特勒托利多)，AL204-IC 型電子天平(梅特勒托利多)；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 試藥與試劑 甲醇(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；水為試驗(yàn)用高純水。其它試劑為分析純。木香烴內(nèi)酯對(duì)照品(純度：98.42%，編號(hào)：CSL-112723，產(chǎn)地：Standford Analyical Chemicals Inc U.S.A)；去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品(純度：99.94%，編號(hào)：DDS-260960，產(chǎn)地：Standford Analyical Chemicals Inc U.S.A)，供試品由新疆博爾坦拉蒙古族自治州蒙醫(yī)醫(yī)院提供，批號(hào)為：20161017、20170220、20160817，陰性樣品(自制)。

2 方法學(xué)考察

2.1 色譜條件 流動(dòng)相：以甲醇-水(65：35)為流動(dòng)相，流速為0.8mL/min[1]；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；進(jìn)樣量：10μL[2]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品7.69mg和去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品8.06mg置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含木香烴內(nèi)酯對(duì)照品76.9μg和去氫木香烴內(nèi)酯80.6μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品，研成細(xì)粉，精密稱取約1 g置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25mL，稱重，密塞，搖勻，放置過夜，超聲處理30min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密量取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液5、10、20、30、40μL分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖及峰面積值，以峰面積值(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(W:μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯在0.1922～1.5380μg和0.2015～1.6120μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程分別為：Y=2102214.5X-28969和Y=1741599.2X-44604.2，r分別為0.9998和0.9996。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密量取同一批供試品溶液(20160817)10μL，連續(xù)進(jìn)5次，測(cè)定峰面積值，結(jié)果木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯峰面積平均值分別為1572400和1470572，RSD分別為0.6%和1.1%，精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一批供試品溶液(20170220)每間隔3h進(jìn)樣，于0、3、6、9、12、15、18h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積值，結(jié)果木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯峰面積平均值分別為1565051和1458110，RSD分別為0.5%和1.6%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)(20161017)供試品溶液5份，研細(xì)，精密稱取各約1g，按上述色譜條件測(cè)定每份樣品峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯平均含量分別為1.7642 mg/g和 2.1375mg/g，RSD分別為0.6%和0.5%，表明本試驗(yàn)重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯含量分別為1.77mg/g和2.15mg/g的供試品5份，各約0.5g，置具塞三角瓶中，精密加入2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液12mL，再精密加入甲醇13mL，按2.2.2項(xiàng)下的方法操作并按上述色譜條件及方法測(cè)定每份供試品含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1和表2。

表1 木香烴內(nèi)酯加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 去氫木香烴內(nèi)酯加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3 樣品含量測(cè)定

樣品含量測(cè)定 取3批供試品(批號(hào)為20161017、20170220、20160817)按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理并測(cè)定，按外標(biāo)法分別計(jì)算含量，3批樣品的測(cè)定結(jié)果見表3、表4。該條件下木香內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯的保留時(shí)間分別為29.09min和34.93min。

表3 樣品中木香烴內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果

表4 樣品中去氫木香烴內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果

4 陰性對(duì)照試驗(yàn)

取按處方比例及制備方法制備不含木香的陰性樣品，同供試品操作，制備陰性樣品溶液，與樣品同法測(cè)定，測(cè)得結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜圖中在與對(duì)照品色譜圖對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)玉日力-13中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的測(cè)定無干擾，對(duì)照品、樣品和陰性樣品色譜圖見圖1。

5 討論

5.1 本方中木香為主藥，而木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯為木香中的主要有效成分[3]，具有行氣止痛，健脾消食等功效[4]。本試驗(yàn)以木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯為指標(biāo)，建立含量測(cè)定方法，經(jīng)驗(yàn)證表明，該方法重復(fù)性與穩(wěn)定性良好，精密度較高，回收率符合要求，可進(jìn)一步提升該品種的可控性。

5.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 用紫外分光光度計(jì)測(cè)定木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的吸收光譜，其最大吸收波長(zhǎng)在225±2nm，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為225nm。

5.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的理論塔板數(shù)均大于3000(N≥3000)，拖尾因子分別為0.98和0.95。木香烴內(nèi)酯與相鄰陰性對(duì)照峰的分離度為1.93>1.5[2]，木香烴內(nèi)酯與去氫木香烴內(nèi)酯的分離度為5.49，分離度符合要求。

5.4 樣品測(cè)定試驗(yàn) 樣品測(cè)定試驗(yàn)中，由于木香烴內(nèi)酯與相鄰陰性對(duì)照峰保留時(shí)間較接近，故選擇流速為0.8mL/min，達(dá)到很好分離，分離度為1.93。

5.5 本檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，故認(rèn)為可作控制玉日力-13的檢測(cè)方法。