邵素珍

摘要：目的 分析體外條件下，白木香種子在抗氧化方面的能力。方法 對白木香的種子進(jìn)行預(yù)處理，并從中提取出黃酮類成分，并采取銅離子還原法來對其抗氧化能力進(jìn)行測定，并同抗壞血酸（即VC）來對照。測定后計(jì)算它的相對總清除率或還原百分率，將相對總清除率或者還原百分率作為縱坐標(biāo)，將樣品液濃度作為圖的橫坐標(biāo)來作線性回歸。并通過回歸曲線置信限制，計(jì)算其半抑制濃度。結(jié)果 在本研究中所得到的數(shù)據(jù)，用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析后，得出白木香種子黃酮類提取物對銅離子的還原力的IC50為0.09815 mg/mL。在該考察的總體范圍當(dāng)中，白木香種子在抗氧化能力方面盡管弱于VC的抗氧化能力，但其卻隨著濃度的升高而增強(qiáng)。結(jié)論 中藥白木香種子具備較強(qiáng)抗氧化能力，可以給中藥制劑以及保健品的進(jìn)一步開發(fā)提供參考依據(jù)，其藥用價(jià)值需更進(jìn)一步的研究。

關(guān)鍵詞：白木香種子;體外抗氧化;銅離子還原

中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）08-0073-03

所謂白木香種子，即白木香之附屬產(chǎn)物，其盡管具有很高的藥用價(jià)值，不過其真正的資源卻未能被人展開有效的開發(fā)和利用。隨著人類各項(xiàng)組織損傷等疾病均同人體內(nèi)部氧化反應(yīng)有著很大的關(guān)聯(lián)，所以，當(dāng)下已然有越來越多的學(xué)者參與到對抗氧化藥物的研究中來。不過，人們對于白木香種子體外抗氧化能力的研究卻較為稀少，有限的研究也僅局限在DPPH法，從而極大的限制了人們對白木香種子抗氧化能力的了解和認(rèn)識[1]。為了將白木香種子抗氧化的能力進(jìn)行細(xì)致的分析，在本文中，筆者將使用對銅離子的還原能力測定這一體外抗氧化方法來對白木香種子的抗氧化能力及抗菌能力進(jìn)行研究，以期對白木香種子的開發(fā)和利用帶來一定的啟發(fā)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料與試劑 白木香種子（茂名市君元沉香種植發(fā)展有限公司提供）;蘆?。╮utin）標(biāo)準(zhǔn)品（北京化學(xué)試劑有限公司），鄰苯三酚，F(xiàn)eSO·7H2O;新亞銅：天津市福晨化學(xué)試劑廠;鹽酸，過氧化氫，無水乙醇，Tris，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉，乙醚等試劑均為市售國產(chǎn)分析純。

1.1.2 儀器 紫外分光光度計(jì)（UV-910O，北京瑞利公司），250 mL索氏提取器：鄭州興華玻璃儀器廠電子天平（sartorius BS 110S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），電熱恒溫水浴鍋（DK-98—1型，天津泰斯特儀器有限公司），高速萬能粉碎機(jī)（Fw80型，天津泰斯特儀器有限公司）

1.2 方法

1.2.1 提取黃酮類成分 選取1000 g成熟飽滿的白木香種子，并將其放于60度左右的干燥箱中，烘干4 h后，加以研磨至能過60目。稱取200 g的白木香種子粉末，采用無水乙醚為抽提液，80攝氏度條件下，以索氏抽提法將其脫脂及除脂溶性色素。抽提液變?yōu)闆]有顏色時(shí)，將石油醚揮盡后在用正丁醇、乙酸乙酯溶液重復(fù)前過程。最后，使用體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇浸提，并回流3次提取黃酮類成分[2]。所有浸提料液的比例為1∶5，每次浸提的時(shí)間為2 h，溫度是100度，浸提6次至提取液沒有顏色為止。將所得浸提液合并之后實(shí)施減壓濃縮到恒溫后獲取浸膏。

1.2.2 黃酮類成分樣品濃度測定。

1.2.2.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在120 ℃干燥至恒重后稱取10 mg，用70%乙醇溶解并定容至100 mL，得到濃度是100 g/mL的蘆丁溶液。然后將其用70%乙醇進(jìn)一步稀釋成0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL，各取1 mL于試管中，加70%乙醇1 mL，加NaNO2溶液（5%）0.3 mL，搖勻后靜置10 min，然后加10%Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻，靜置10 min，再加4%的NaOH溶液2 mL，搖勻后靜置15 min后，510 nm波長處測定吸光度A。然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法，以吸光值（A，510 nm）為縱坐標(biāo)（y為吸光度），濃度（C，g/mL）為橫坐標(biāo)（x為白木香種子黃酮類化合物樣品濃度（μg/mL），進(jìn)行線性回歸并求回歸方程。

1.2.2.2 白木香種子黃酮類化合物樣品含量的測定 分別吸取1 mL樣品于10 mL容量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度。分別取1 mL稀釋液于試管中，加70%乙醇1 mL，依次加入5% NaNO2 0.3 mL，混勻后靜置6 min，加10%Al（NO3）3 0.3 mL，搖勻后靜置6 min，加4%NaOH溶液2 mL，搖勻后靜置10 min，同時(shí)以70%乙醇代替樣品液配制空白試劑。510 nm波長處測定吸光度A。

1.2.3 配置抗氧化研究樣品溶液 稱取10 mg浸膏，將其置于無水乙醇中，配置出1 mg/mL濃度白木香種子的樣品液。

1.2.4 測定還原能力 分別提取濃度不同的5 mL樣品液，并加入7.5 mmol/L的新亞銅試劑及0.01 mmol/L的硫酸銅溶液各1.25 mL，將其混合后再添加ph值為7.0，濃度為0.2 mL每升的NH4Ac溶液，將三樣液體混合至10 mL的體積，然后搖勻取1.0 mL。將該溶液搖勻后放置半個(gè)小時(shí)后，放置其在450 nm的波長中對其吸光度的數(shù)值進(jìn)行測量[3]。在這段時(shí)間內(nèi)，溶劑作為其空白對照，而VC作為其陽性對照。相對總還原的百分率等于A減去A0再除以Amax減去A0。其中，A0是該樣品的濃度是0時(shí)的最大值，Amax是測量一次后所得吸光度值的最大數(shù)，而A則是該樣品的A450nm數(shù)值。

1.3 觀察指標(biāo)和評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 在本次研究中，以氧化劑被阻礙至一半的時(shí)候，還原劑（抑制劑）的濃度作為其觀察指標(biāo)。按上文中所提計(jì)算方法展開計(jì)算，以相對總還原率作為其縱坐標(biāo)，樣品液濃度作橫坐標(biāo)。若一物質(zhì)IC50低于10 mg/mL，則表示擁有抗氧化的能力[4].。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 在本研究中所收獲的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行線性回歸及統(tǒng)計(jì)分析（一致以SPSS 19.0計(jì)學(xué)軟件及Microsoft Office2010）。通過可見-紫外分光光度計(jì)，將各樣品濃度吸光值讀取出來，測量數(shù)不可以低于3次，并取各次所得數(shù)據(jù)的平均值。通過上文的計(jì)算公式計(jì)算出相對總清除率和還原率。以相對總清除率（還原率）的百分率作為其縱坐標(biāo)，以樣品液濃度作為數(shù)據(jù)的橫坐標(biāo)并作線性回歸，通過線性回歸置信限制，將氧化劑被阻礙至一半時(shí)還原劑（抑制劑）的濃度數(shù)值計(jì)算出來[5]。

2 結(jié)果

2.1 樣品濃度 根據(jù)實(shí)驗(yàn)而得到標(biāo)準(zhǔn)回歸方程y=0.002627x-0.01309（r=0.9992）

測得白木香種子黃酮類提取物樣品吸光度為y=180，由此可得其濃度為x=73.50μg/mL

2.2 對銅離子還原的能力 在濃度為0.02至0.12 mg/mL的范圍之內(nèi)，VC和白木香種子對銅離子還原的能力具有線性關(guān)系，通過對回歸線的擬合得到氧化劑被阻礙至一半時(shí)還原劑（抑制劑）的濃度數(shù)值分別為0.01725 mg/mL以及0.09815 mg/mL。具體見圖1及圖2。

圖1 白木香種子的銅離子還原能力

注：橫坐標(biāo)表示白木香種子的濃度（mg/mL），縱坐標(biāo)表示相對總還原百分率。

圖2 VC的銅離子的還原能力

注：橫坐標(biāo)表示VC濃度（mg/mL），縱坐標(biāo)表示相對總還原百分率。

3 討論

從結(jié)果上能夠知道，在可以檢測的范圍之內(nèi)，白木香種子在抗氧化方面是隨著本身的濃度升高而增強(qiáng)的。從上述討論得知，白木香種子對銅離子的還原能力的IC50為0.09775 mg/mL，VC對銅離子的還原能力的IC50分別為0.017 mg/mL，從中筆者可以看到，白木香種子相較于VC而言，其抗氧化的能力明顯不如，而國內(nèi)的學(xué)者認(rèn)為，如果某一種藥物的IC50值不高于10 mg/mL，則表示其具備抗氧化的能力[6]。因此筆者可以初步認(rèn)為，白木香種子具有較為顯著的抗氧化能力。據(jù)學(xué)者段周等在對白木香葉提取黃酮類化合物所實(shí)施的體外抗氧化能力的研究中，也較為明確的證明了該提取物的清除DPPH·能力[7]。而自由基其實(shí)是人類機(jī)體所維持生命各種活動(dòng)的過程中所衍生出來的某一活性分子，如果人體內(nèi)產(chǎn)生過多的自由基，便會(huì)致使組織器或者細(xì)胞產(chǎn)生損傷，進(jìn)而引發(fā)各類型的疾病，從而加快人體的衰老速度。而抗氧化劑因?yàn)槠渥陨淼目寡趸芰Γ虼丝梢詫ψ杂苫纳僧a(chǎn)生一定程度的抑制作用，甚至可以將自由基徹底的清除。

所謂白木香，其實(shí)就是沉香這味藥材的最重要來源之一。沉香，眾所周知的珍貴藥材。當(dāng)前，盡管沉香已然在廣東、海南等地開展了大規(guī)模的種植栽培，但我國的沉香需求也正在以一定速度的擴(kuò)大，因此其往往供不應(yīng)求。為了生態(tài)的平衡，尋找能有替代沉香的藥物便顯得極為重要[8]。而白木香種子因?yàn)槠漭^高的產(chǎn)量以及很實(shí)惠的價(jià)格，因此，其可以說是代替沉香的首選。在本研究中，筆者通過銅離子還原法這一體外抗氧化方法對白木香種子的抗氧化能力進(jìn)行了研究和測定，其結(jié)果表明，盡管白木香種子在還原銅離子的能力上較VC弱，可是隨著白木香種子濃度的升高，其抗氧化能力也隨之而升高，且其IC50值不高于10 mg/mL，具有較為顯著的抗氧化能力。此可以說是對白木香種子以及精油關(guān)于抗氧化能力的探究帶來的一定參考。

上述研究表明明，在抗氧化方面，白木香種子有著很高的能力，此外在筆者研究相關(guān)文獻(xiàn)時(shí)也發(fā)現(xiàn)，白木香種子種含有各種營養(yǎng)成分以及揮發(fā)油。所以，對白木香種子的研究需要專業(yè)人士作進(jìn)一步的藥理學(xué)分析研究，以期給今后的開發(fā)和利用帶來更為準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（收稿日期：2018-05-08）