張琛，裴嘉博，郗篤雋，黃康康，劉輝

(杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院園藝研究所，浙江杭州 310024)

中國甜櫻桃(PrunusaviumL.)主栽區(qū)在遼寧省、山東省。南方地區(qū)春季升溫早、升溫快、果實(shí)成熟早，比北方露地栽培更早上市，就近供應(yīng)市場，減少流通環(huán)節(jié)，加長整個甜櫻桃的市場供應(yīng)期，因而南方地區(qū)發(fā)展甜櫻桃產(chǎn)業(yè)前景廣闊。但坐果率低一直是困擾南方地區(qū)甜櫻桃引種栽培的主要問題。花器官尤其是雌雄配子體的發(fā)育與坐果、果實(shí)品質(zhì)密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，花粉發(fā)育質(zhì)量低是造成南方甜櫻桃坐果率低的原因之一?；ǚ勖劝l(fā)率是研究花粉質(zhì)量的指標(biāo)之一，測定花粉萌發(fā)率時一般花粉需培養(yǎng)4～24小時，但培養(yǎng)時間過長會影響試驗(yàn)效率及結(jié)果。筆者以甜櫻桃品種薩米脫的花粉為試材，在篩選出適宜花粉萌發(fā)培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化該培養(yǎng)液中有利于花粉萌發(fā)的各因子配比，以找出省時高效的花粉萌發(fā)率測定方法，為生產(chǎn)上進(jìn)行人工授粉和相關(guān)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2017年5月進(jìn)行，以山東泰安紅旗櫻桃合作社提供的薩米脫甜櫻桃花粉為材料。于薩米脫花期采集鈴鐺花，用鑷子剝?nèi)∥撮_裂的花藥，攤在硫酸紙上置于25℃陰涼處干燥。干燥后裝入小瓶，置于-20℃冰箱保存。

1.2 花粉萌發(fā)率的測定

參照姜雪婷等[1]的方法，常規(guī)培養(yǎng)液為蒸餾水+10%蔗糖+0.01%硼酸，pH=6.0。采用雙凹型載玻片培養(yǎng)花粉，可以為試驗(yàn)提供一個近乎完全相同的對比小環(huán)境，操作簡便，減少操作誤差[2]。

花粉培養(yǎng)液組成成分配比優(yōu)化試驗(yàn)處理如下：①培養(yǎng)液中蔗糖濃度設(shè)置5個，分別為5%、10%、15%、20%、25%；②硼酸濃度設(shè)置5個，分別為0.01%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%；③pH值設(shè)置5個，分別為5、5.5、6.0、6.5、7.0。

試驗(yàn)時將培養(yǎng)液滴于具圓形凹槽的載玻片上，用樣品針蘸取適量花粉播于培養(yǎng)液中，將載玻片置于底部墊有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，于25℃培養(yǎng)4小時，利用光學(xué)顯微鏡觀察花粉萌發(fā)情況，每處理3個重復(fù)，每重復(fù)觀察不少于3個視野，每個視野花粉粒不少于30個，以花粉管長度大于花粉粒直徑視為萌發(fā)，花粉萌發(fā)率(%)=已萌發(fā)花粉數(shù)/花粉總數(shù)×100。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2007和DPS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用單因素方差分析和Duncan法比較不同處理間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 蔗糖濃度與甜櫻桃花粉萌發(fā)率的相關(guān)性

如表1所示，當(dāng)培養(yǎng)液中硼酸濃度0.01%和pH值6.0不變時，在一定范圍內(nèi)，蔗糖的濃度越高，甜櫻桃花粉萌發(fā)率越高，蔗糖濃度20%時，甜櫻桃花粉萌發(fā)率顯著高于其他蔗糖濃度下的萌發(fā)率，達(dá)32.77%。但蔗糖濃度過高則會抑制甜櫻桃花粉萌發(fā)，蔗糖濃度達(dá)25%時，甜櫻桃花粉萌發(fā)率降為12.95%。

2.2 硼酸濃度與甜櫻桃花粉萌發(fā)率的相關(guān)性

當(dāng)培養(yǎng)液中蔗糖濃度10%和pH值6.0不變時，隨著培養(yǎng)液中硼酸濃度升高，甜櫻桃花粉萌發(fā)率差異顯著，表現(xiàn)先升高后降低趨勢。硼酸濃度0.1%時，甜櫻桃花粉萌發(fā)率為24.33%，顯著高于其他濃度的，是常規(guī)培養(yǎng)液(培養(yǎng)液中硼酸濃度0.01%)花粉萌發(fā)率的3.84倍。但硼酸濃度超過0.1%，花粉萌發(fā)率大幅下降。

2.3 pH值與甜櫻桃花粉萌發(fā)率的相關(guān)性

當(dāng)培養(yǎng)液中蔗糖濃度10%和硼酸濃度0.01%不變時，隨培養(yǎng)液pH值升高，甜櫻桃花粉萌發(fā)率逐漸上升，pH值6.5時甜櫻桃花粉萌發(fā)率最高，為12.08%，是使用常規(guī)培養(yǎng)液(pH=6.0)萌發(fā)率的1.39倍。當(dāng)培養(yǎng)液中pH值達(dá)到7.0時，花粉萌發(fā)受到抑制，萌發(fā)率降低。

表1 不同培養(yǎng)條件對甜櫻桃花粉萌發(fā)率的影響

注：同行數(shù)字旁不同小寫字母表示5%水平差異顯著。

3 小結(jié)與討論

花粉萌發(fā)率的測定結(jié)果與花粉培養(yǎng)液的成分配比密切相關(guān)。蔗糖是重要的營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)液中適當(dāng)?shù)臐舛瓤梢源龠M(jìn)花粉萌發(fā)，但濃度過高會抑制花粉的萌發(fā)。因?yàn)檎崽菨舛冗^高打破了溶液與細(xì)胞間滲透平衡，花粉管破裂，質(zhì)壁分離，原生質(zhì)體脫水導(dǎo)致花粉無法萌發(fā)[3,4]。硼酸會提高糖的吸收、運(yùn)轉(zhuǎn)及代謝，促進(jìn)果膠物的合成，果膠物是花粉管壁的主要成分[5,6]在常規(guī)花粉萌發(fā)率測定中，一般硼酸濃度為0.01%，花粉萌發(fā)率較低。花粉被認(rèn)為能夠在廣泛pH范圍內(nèi)正常萌發(fā)，因其具有調(diào)節(jié)培養(yǎng)液中pH到最適合其萌發(fā)的能力[7]。但進(jìn)一步的研究表明，當(dāng)培養(yǎng)液中的pH超出花粉自身的調(diào)節(jié)范圍則不利于花粉萌發(fā)甚至抑制花粉萌發(fā)。當(dāng)花粉培養(yǎng)在緩沖液配制的培養(yǎng)液中，能夠萌發(fā)的pH范圍非常狹窄，蘋果屬植物的花粉僅能在pH為6.0的培養(yǎng)環(huán)境中正常萌發(fā)生長，這一現(xiàn)象在多種植物花粉萌發(fā)試驗(yàn)中得到證實(shí)，不同植物最適花粉萌發(fā)pH不同[7-9]?；ǚ勖劝l(fā)率測定時，花粉需培養(yǎng)4～24小時。本試驗(yàn)采用雙凹片法培養(yǎng)4小時花粉即可萌發(fā)，可較省時高效(圖1，圖2)。

圖1 花粉萌發(fā)培養(yǎng)0小時的狀態(tài)

圖2 花粉萌發(fā)培養(yǎng)4小時的狀態(tài)

在常規(guī)的植物花粉萌發(fā)率測定中，所用的花粉培養(yǎng)液配方為蒸餾水+10%蔗糖+0.01%硼酸，pH=6.0。本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上對甜櫻桃花粉培養(yǎng)液的成分配比進(jìn)行優(yōu)化，在培養(yǎng)液中硼酸濃度0.01%和pH值6.0不變，蔗糖濃度20%時，甜櫻桃花粉萌發(fā)率最高；培養(yǎng)液中蔗糖濃度10%和pH值6.0不變，硼酸濃度0.1%時，甜櫻桃花粉萌發(fā)率最高；培養(yǎng)液中蔗糖濃度10%和硼酸濃度0.01%不變，pH值6.5時甜櫻桃花粉萌發(fā)率最高。各優(yōu)化成分配比組合后的培養(yǎng)液對花粉萌發(fā)的影響，其他影響因素如培養(yǎng)液中添加Ca2+、培養(yǎng)介質(zhì)的形態(tài)、甜櫻桃品種以及多因素水平對花粉萌發(fā)的影響還有待于進(jìn)一步研究。本研究的試驗(yàn)花粉采自外地，經(jīng)過較長物流時間或低溫保存，會影響花粉萌發(fā)率，使花粉萌發(fā)率測定結(jié)果數(shù)值整體偏低。