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采用HPLC法檢測三子養(yǎng)親湯水煎液中主要成分含量

2018-12-04 03:19金典劉佳玲王麗娟張博達李俊玲陳思敏
中藥與臨床 2018年4期
關(guān)鍵詞:養(yǎng)親白芥子硫氰酸

金典,劉佳玲,王麗娟,張博達,李俊玲,陳思敏

三子養(yǎng)親湯是臨床常用方,主要用于治療慢性支氣管炎、咳嗽、小兒喘息性肺炎等[1]。該方劑由白芥子、萊菔子和紫蘇子三味藥按一定比例組方。藥典中規(guī)定紫蘇子中迷迭香酸含量為質(zhì)量評價的重要指標(biāo),白芥子和萊菔子質(zhì)量評價指標(biāo)為芥子堿硫氰酸鹽。研究表明復(fù)方三子養(yǎng)親湯中鎮(zhèn)咳、平喘的有效部位集中在低極性,即石油醚提取物和乙醇提取物,而祛痰部位主要集中在高極性,即水提物[2]。臨床常用劑型為水煎液,沿用藥典中規(guī)定質(zhì)控指標(biāo)是否合理,有待驗證。因此,本課題組采用HPLC法對三子養(yǎng)親湯中紫蘇子的迷迭香酸和白芥子及萊菔子的芥子堿硫氰酸鹽分別進行含量檢測,并用相同方法對其復(fù)方制劑水煎液中相應(yīng)成分也進行測定。該實驗一方面可對三子養(yǎng)親湯水煎劑的療效物質(zhì)基礎(chǔ)進行初步探索,另一方面也為三子養(yǎng)親湯復(fù)方質(zhì)量控制相關(guān)指標(biāo)的擬定提供初步的實驗依據(jù)。

1 儀器與藥品

1.1 儀器及試劑

Agilent Technologies高效液相色譜儀、ULTRASONIC CLEANER 潔拓超聲波機械超聲波清洗機、優(yōu)普純水制造系統(tǒng)(上海優(yōu)普實業(yè)有限公司)遠紅外可控調(diào)溫電爐(四川成都市聚森電器廠)、電子天平(深圳市無限量衡器有限公司);

芥子堿硫氰酸鹽(成都曼斯特生物科技有限公司,批號:MUST-HPLC)、迷迭香酸(成都曼斯特生物科技有限公司,批號:MUST-16040512)。

1.2 樣品制備

萊菔子(吉安康藥業(yè)有限公司生產(chǎn))、白芥子(四川博仁藥業(yè)有限公司生產(chǎn))、紫蘇子(四川恒康源藥業(yè)有限公司生產(chǎn))均購買于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。

白芥子:按藥典方法將白芥子打粉過篩后,進行甲醇提取后超聲處理,相同方法提取三次,合并濾液,減壓回收溶劑,殘渣加入乙腈-0.08 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(10:90)溶解,過濾后轉(zhuǎn)移定容后備用[3]。

萊菔子:按藥典規(guī)定方法將萊菔子進行打粉過篩,取萊菔子粉末加入70%甲醇進行超聲處理,補足損失甲醇重量,搖勻,濾過雜質(zhì)后,取續(xù)濾液,置于棕色容量瓶內(nèi)保存[4]。

紫蘇子:按藥典規(guī)定方法將紫蘇子進行打粉后過篩,紫蘇子粉末加入到80%甲醇中加熱回流2 h,冷卻至室溫,加一定80%甲醇補足損失重量,搖勻,濾過雜質(zhì),取續(xù)濾液,即得[5]。

三子養(yǎng)親湯:將紫蘇子、萊菔子、白芥子三味藥按1:1:1混合后,炒爆,取混勻炒爆后的三子,進行打粉,過篩后去一定混合粉末加入70%甲醇中,蓋緊塞子,連同錐形瓶和塞子一同稱定重量,進行超聲處理(條件:功率250 w,頻率50 KHz,時間30分鐘),冷卻至室溫后,再次連同錐形瓶及塞子稱定重量,用70%甲醇補足減少的重量后,搖勻,濾過雜質(zhì)后,取續(xù)濾液,即得。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品制備

取迷迭香酸對照品適量,精密稱定,加甲醇制成80 μg·mL-1的溶液;取芥子堿硫氰酸鹽對照品適量,精密稱定,加甲醇制成0.2 mg·mL-1的溶液。備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 采用HPLC對三子養(yǎng)親湯中紫蘇子、白芥子、萊菔子中質(zhì)控物質(zhì)進行含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱:C18柱(4.6×250 mm,5μm),流動相:甲醇-0.1%甲酸(40:60),流速:1 mL·min-1,檢測波長:330 nm,柱溫:29 °C。

按照藥典規(guī)定實驗方法,用上述條件對紫蘇子、白芥子、萊菔子及三子養(yǎng)親湯中相應(yīng)成分進行含量測定。

2.1.2 結(jié)果

圖1 迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品圖

圖2 紫蘇子供試品溶液

如圖1圖2所示,紫蘇子供試品與迷迭香酸供試品均在保留時間為7.6 min左右出峰,計算得到紫蘇子供試品溶液中迷迭香酸含量為0.423%。根據(jù)藥典記載,所含迷迭香酸不得少于0.25%,所以該紫蘇子的質(zhì)量符合規(guī)定。

圖3 芥子堿硫氰酸鹽含量

圖4 萊菔子供試品溶液

如圖3圖4所示,萊菔子供試品溶液與芥子堿硫氰酸鹽均在保留時間為3.4 min左右出峰,計算萊菔子供試品溶液中芥子堿硫氰酸鹽含量為0.344%。

圖5 白芥子供試品溶液

如圖3圖5可見,白芥子供試品溶液與芥子堿硫氰酸鹽均在保留時間為3.4 min左右出現(xiàn)了一個明顯的峰,計算可得白芥子供試品溶液中芥子堿硫氰酸鹽含量為0.169%。

含量%迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品 7.668 472.21954 29.41734 100紫蘇子供試品 7.569 6244.33350 425.87372 98.0447 0.423芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 3.432 6960.88818 809.21729 92.7584萊菔子供試品 3.401 2996.05933 410.16104 85.7029 0.344白芥子供試品 3.474 2951.71094 377.72601 87.9106 0.169保留時間min峰面積mAU*s峰高mAU峰面積%

2.2 采用HPLC對復(fù)方三子養(yǎng)親湯中迷迭香酸、芥子堿硫氰酸鹽進行含量測定

2.2.1 色譜條件:同2.1下色譜條件

2.2.2 結(jié)果

圖6 復(fù)方三子養(yǎng)親湯甲醇提取物供試品溶液

如圖6在保留時間為3.8 min左右出現(xiàn)明顯的峰,計算得芥子堿硫氰酸鹽含量為0.333%。復(fù)方三子養(yǎng)親湯中未檢測出迷迭香酸的峰。

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3 討論

三子養(yǎng)親湯在臨床上大量用于治療咳嗽、哮喘等癥狀研究白芥子在不同溶媒提取下提取物的鎮(zhèn)咳祛痰平喘藥理作用時發(fā)現(xiàn)鎮(zhèn)咳成分極性偏小,祛痰成分極性偏大,水溶性大;平喘成分的極性小,脂溶性大[6]。因此推斷在三子養(yǎng)親湯水煎液中,白芥子水提物的成分中祛痰作用大于鎮(zhèn)咳和平喘作用。張巍峨等人研究萊菔子提取物的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用,結(jié)果表明炒萊菔子醚提取物和生萊菔子醇提取物大劑量組具有較強的鎮(zhèn)咳、祛痰作用[7]。當(dāng)病癥側(cè)重不同時,我們可以選取君藥,分食積重君萊菔子;痰阻重君白芥子;氣逆重君紫蘇子。合而用之可使氣順而痰消,食積得化,咳喘得平。本實驗用藥典的方法進行單味藥的含量測定,結(jié)果顯示單味藥的有效成分含量在藥典所規(guī)定的范圍內(nèi),即單味藥物的質(zhì)量符合藥典規(guī)定。而配伍水煎煮后,迷迭香酸未能經(jīng)過高效液相法檢測出來,而芥子堿硫氰酸鹽的含量也隨著水煎煮方法下降。說明配伍并不只是簡單的化學(xué)成分加和作用,而是復(fù)雜的物理化學(xué)變化。因此要針對不同模型給藥時,就要從多方面因素來考慮紫蘇子、萊菔子和白芥子的配伍量效關(guān)系。

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