大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南 大理 671000

川續(xù)斷科植物包括12屬約300種，我國(guó)共有川續(xù)斷屬、刺續(xù)斷屬、藍(lán)盆花屬、翼首花屬、雙參屬等5屬[1]。雙參(Triplostegiaglandulifera)為川續(xù)斷科雙參屬植物，產(chǎn)于云南、西藏、四川、陜西南部、湖北西部、甘肅南部及臺(tái)灣玉山，生于海拔1500～4000m的林下、溪旁、山坡草地、草甸及林緣路旁[2]。因其具有益氣健脾、調(diào)經(jīng)活血的功效，云南民間常用于久病體虛的治療；并且在長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用及藥理實(shí)驗(yàn)中表明高海拔地區(qū)產(chǎn)雙參具有較好的降血糖作用[3]。雙參屬植物中主要含有三萜皂苷、環(huán)烯醚萜、生物堿等類型的化合物。但到目前為止，關(guān)于該種植物的化學(xué)成分研究還鮮有報(bào)道。實(shí)驗(yàn)在本課題組前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)對(duì)雙參提取物進(jìn)行純化，鑒定了7個(gè)化合物，分別為馬錢苷元(1)、馬錢子苷(2)、馬錢苷酸(3)、6’-O-β-吡喃葡萄糖馬錢苷(4)、大花雙參苷A(5)、3’-O-β-D-glucopyranosylsweroside(6)、secologanol(7)?；衔锝Y(jié)構(gòu)如圖1所示。

1 儀器與材料

1.1 藥材 實(shí)驗(yàn)用植物于2017年10月采自于云南省大理州云龍縣五寶山，經(jīng)大理大學(xué)段寶忠副教授鑒定為川續(xù)斷科雙參屬植物雙參(TriplostegiaglanduliferaWall.exDC)的地下根，植物樣本(編號(hào):WFS-20171017)存放于大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院王福生教授課題組。

1.2 儀器 核磁共振儀(Bruker AM-400M)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52AA(上海亞榮生化儀器廠)。

1.3 材料 薄層硅膠GF254與柱色譜硅膠(青島海洋化工廠分廠)；Sephadex LH-20；ODS；AB-8型大孔吸附樹(shù)脂；石油醚(Petroleum ether)、氯仿(chloroform)、乙酸乙酯(ethyl acetate)、甲醇(methanol)、乙醇(ethanol)等溶劑需重蒸后使用。

2 提取與分離

取雙參地下干燥根3 kg，粉碎、用95%乙醇提取3次，每次24 h，濃縮成浸膏。將浸膏207 g溶解至水中，通過(guò)AB-8型大孔吸附樹(shù)脂(水-甲醇系統(tǒng))洗脫，得到A～H 8個(gè)組分。Fr.D經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇系統(tǒng))、凝膠柱層析和ODS柱層析多次純化，得到化合物1(43 mg)、化合物2(29 mg)、化合物3(19 mg)、化合物4(15 mg)。Fr.E經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇系統(tǒng)和石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng))、凝膠柱層析純化得化合物5(12 mg)、化合物6(17 mg)、化合物7(9 mg)。

3 結(jié)果

化合物1 白色粉末。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：4.87(d,J=5.9 Hz 1H, H-1), 7.43(d,J=1.4 Hz, 1H, H-3), 3.12(m, 1H, H-5), 2.27(ddd,J= 13.6, 7.3, 1.6 Hz, 1H, H-6a), 1.50(ddd,J=13.9, 9.4, 4.7 Hz, 1H, H-6b), 4.05(ddd,J=6.3,3.1,1.3Hz,1H,H-7), 1.87(m,1H,H-8),1.81(m,1H,H-9),1.12(d,J=6.8Hz,3H,-CH3), 3.70(s,3H,-OCH3);13CNMR(100MHz,MeOD)δ:97.24(C-1), 153.50(C-3), 112.41(C-4), 33.14(C-5), 43.47(C-6), 74.85(C-7), 42.95(C-8), 47.83(C-9), 14.00(-CH3), 169.80(C=O), 51.61(-OCH3)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物1為馬錢苷元。

化合物2 無(wú)色透明晶體。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：5.25(d,J=4.5 Hz, 1H,H-1), 7.36(d,J=1.2 Hz, 1H, H-3), 3.08(m, 1H, H-5), 2.20(ddd,J= 14.1, 7.9, 1.6 Hz, 1H, H-6a), 1.59(ddd,J=14.0, 7.7, 5.0 Hz, 1H, H-6b), 4.01(td,J=4.8, 1.4 Hz, 1H, H-7), 1.84(ddd,J= 9.5, 6.9, 4.6 Hz, 1H, H-8), 2.00(td,J=9.2, 4.5 Hz, 1H, H-9), 1.07(d,J=6.9 Hz, 3H, -CH3), 3.66(s, 3H, -OCH3), 4.62(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′), 3.17(dd,J=9.2, 7.9 Hz, 1H, H-2′), 3.33(m, 1H, H-3′), 3.27(m 1H, H-4′), 3.26(m, 1H, H-5′), 3.63(m, 1H, H-6′a), 3.87(dd,J=11.9, 1.9 Hz, 1H, H-6′b)；13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：97.67(C-1), 152.10(C-3), 114.00(C-4), 32.16(C-5), 42.69(C-6), 75.05(C-7), 42.16(C-8), 46.45(C-9),169.50(C=O), 13.44(-CH3), 51.63(-OCH3), 100.01(C-1′), 74.70(C-2′), 77.99(C-3′), 71.56(C-4′), 78.35(C-5′), 62.74(C-6′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物2為馬錢子苷。

化合物3 無(wú)色透明晶體。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：5.29(d,J=4.4 Hz, 1H,H-1), 7.41(d,J=1.3 Hz, 1H, H-3), 3.11(m, 1H, H-5), 2.26(ddd,J= 14.1, 7.8, 1.7 Hz, 1H, H-6a), 1.67(ddd,J=14.0, 7.5, 5.0 Hz, 1H, H-6b), 4.06(m, 1H, H-7), 1.89(m, 1H, H-8), 2.05(td,J=9.2, 4.4 Hz, 1H, H-9), 1.11(d,J=6.9 Hz, 3H, -CH3), 4.68(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′), 3.22(dd,J=9.1, 7.9 Hz, 1H, H-2′), 3.38(m, 1H, H-3′), 3.33(m 1H, H-4′), 3.32(m, 1H, H-5′), 3.69(m, 1H, H-6′a), 3.91(dd,J=11.9, 1.8 Hz, 1H, H-6′b)；13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：96.27(C-1), 150.75(C-3), 112.75(C-4), 30.73(C-5), 41.30(C-6), 73.71(C-7), 40.74(C-8), 45.16(C-9), 169.50(C=O), 12.06(-CH3), 98.65(C-1′), 73.34(C-2′), 76.91(C-3′), 70.20(C-4′), 76.62(C-5′), 61.38(C-6′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物3為馬錢苷酸。

化合物4 白色粉末。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：5.34(d,J=4.3 Hz, 1H,H-1), 7.46(d,J=1.2 Hz, 1H, H-3), 3.18(m, 1H, H-5), 2.30(ddd,J= 14.0, 7.8, 1.7 Hz, 1H, H-6a), 1.69(ddd,J=14.1, 7.6, 5.1 Hz, 1H, H-6b), 4.11(td,J=4.9, 2.5 Hz, 1H, H-7), 1.94(ddd,J= 9.5, 7.0, 4.6 Hz, 1H, H-8), 2.11(td,J=9.1, 4.4 Hz, 1H, H-9), 1.17(d,J=6.8 Hz, 3H, -CH3), 3.77(s, 3H, -OCH3), 4.79(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′glu), 4.65(d,J=7.8 Hz, 1H, H-1′′glu)；13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：97.77(C-1), 152.05(C-3), 114.01(C-4), 32.07(C-5), 42.65(C-6), 74.99(C-7), 42.08(C-8), 46.46(C-9), 169.48(C=O),13.04(-CH3), 51.67(-OCH3), 99.71(C-1′), 74.03(C-2′), 78.07(C-3′), 71.48(C-4′), 77.72(C-5′), 69.98(C-6′)，105.12(C-1′′), 75.42(C-2′′), 78.09(C-3′′), 71.48(C-4′′), 77.92(C-5′′), 62.60(C-6′′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物4為6′-O-β-吡喃葡萄糖馬錢苷。

化合物5 白色粉末。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：unit A 5.59(d,J=5.5 Hz,1H，H-1), 7.51(s, 1H, H-3), 3.27(m, 1H, H-5), 2.14(m 1H, H-6a), 1.73(m, 1H, H-6b), 4.59(m, 1H, H-7), 5.82(m, 1H, H-8), 2.99(m, 1H, H-9), 5.34(m, 2H, H-10), 3.76(m, 6H, 2×-OCH3), 5.39(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′glu)；unit B 5.27(d,J=4.9 Hz, 1H,H-1), 7.49(s, 1H, H-3), 3.27(m, 1H, H-5), 2.38(m, 1H, H-6a), 1.82(m, 1H, H-6b), 5.33(m, 1H, H-7), 2.14(m, 1H, H-8), 2.19(m, 1H, H-9), 1.14(d,J=6.1 Hz, 3H, -CH3), 3.43(m, 3H, -OCH3), 5.31(d,J=8.0Hz, 1H, H-1′glu)；13C NMR (100 MHz, MeOD) δ：unit A 97.90(C-1), 153.23(C-3), 112.07(C-4), 29.53(C-5), 33.34(C-6), 104.33(C-7), 135.85(C-8), 45.42(C-9),119.76(C-10),169.35(C=O), 53.64(-OCH3), 52.82(-OCH3), 100.14(C-1′), 74.76(C-2′), 78.39(C-3′), 71.57(C-4′), 78.05(C-5′), 62.79(C-6′)；unit B 97.50(C-1), 152.48(C-3), 113.30(C-4), 32.54(C-5), 40.30(C-6), 78.33(C-7),41.00(C-8),47.15(C-9),13.77(-CH3),168.28(C=O),51.72(-OCH3),100.23(C-1′),74.65(C-2′),78.38(C-3′), 71.63(C-4′), 78.03(C-5′), 62.78(C-6′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物5為大花雙參苷A。

化合物6 無(wú)色透明晶體。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ：5.61(d,J=7.1 Hz, 1H, H-1), 7.66(d,J=2.5 Hz,1H, H-3), 3.18(m, 1H, H-5), 1.81(m, 2H, H-6), 4.43(m, 1H,H-7a), 4.51(m, 1H, H-7b), 5.61(m, 1H, H-8),2.77(ddd,J=9.7, 5.4, 1.7 Hz, 1H, H-9), 5.36(m, 2H, H-10), 4.80(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′glu), 4.63(d,J=7.8 Hz, 1H, H-1′′glu)；13C NMR (100 MHz, MeOD) δ：98.09(C-1), 153.95(C-3), 105.16(C-4), 28.45(C-5), 25.90(C-6), 69.69(C-7), 133.27(C-8), 43.79(C-9), 120.86(C-10), 168.45(C-11), 99.46(C-1′), 74.08(C-2′), 87.37(C-3′),69.69(C-4′), 77.80(C-5′), 62.55(C-6′), 105.97(C-1′′), 75.47(C-2′′), 78.02(C-3′′),71.54(C-4′′), 78.15(C-5′′), 62.61(C-6′′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物6為3′-O-β-D-glucopyranosylsweroside。

化合物7 無(wú)色透明晶體。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ：5.56(d,J=6.7Hz, 1H,H-1), 7.52(s, 1H, H-3), 2.84(m, 1H, H-5), 1.70(m 1H, H-6a), 1.88(dt,J= 13.8, 6.9Hz, 1H, H-6b), 3.60(m, 2H, H-7), 5.81(ddd,J=17.3, 10.4, 8.5Hz, 1H, H-8), 2.65(m, 1H, H-9), 5.28(m, 2H, H-10), 3.69(m, 3H, -OCH3), 4.72(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′), 3.22(dd,J=9.2, 7.9 Hz, 1H, H-2′), 3.40(m, 1H, H-3′), 3.30(m 1H, H-4′), 3.33(m, 1H, H-5′), 3.69(dd,J=11.9, 5.6 Hz, 1H, H-6′a), 3.92(dd,J=11.9, 2.0 Hz, 1H, H-6′b)；13C NMR (100 MHz, MeOD) δ：97.72(C-1), 153.68(C-3), 111.72(C-4),31.05(C-5),33.91(C-6),61.17(C-7),135.98(C-8),45.46(C-9),119.13(C-10),171.02(C=O),49.85(-OCH3),100.13(C-1′),74.66(C-2′),77.97(C-3′),71.58(C-4′),78.36(C-5′), 62.78(C-6′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本相同，故鑒定化合物7為secologanol。

4 小結(jié)

糖尿病作為一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝障礙性疾病，其發(fā)病的主要原因是胰島素B細(xì)胞受損而引起胰島素分泌不足或因細(xì)胞膜上胰島素受體缺陷導(dǎo)致胰島素不敏感，不能發(fā)揮作用，進(jìn)而造成糖代謝紊亂。藥理研究表明雙參提取物能使外源性葡萄糖、腎上腺素所致的高血糖小鼠的血糖水平明顯下降，改善小鼠對(duì)高血糖的耐受能力，而對(duì)正常小鼠的血糖水平無(wú)明顯影響，從而在一定程度上緩解臨床癥狀[11-13]。雙參作為云南民間用藥，因其具有補(bǔ)腎健脾、益氣活血的功效，用于治療久病體虛，并能補(bǔ)氣補(bǔ)血。但是到目前為止，對(duì)其降血糖的生物活性成分的研究還少有報(bào)道。該實(shí)驗(yàn)在課題組前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)對(duì)雙參提取物進(jìn)行分離純化，希望進(jìn)一步深化對(duì)雙參降血糖生物活性成分的認(rèn)識(shí)，為該植物的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。