陳海燕 湯 玲 肖承悰

北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院婦科，北京 100700

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）為臨床多見的內(nèi)分泌失調(diào)性疾病，一般是由于代謝、內(nèi)分泌與神經(jīng)系統(tǒng)及卵巢局部調(diào)控因素不平衡所造成的病理性內(nèi)分泌紊亂，其主要證候特征為高胰島素血癥、連續(xù)無排卵、高雄激素血癥和卵巢多囊樣變化等，其病理生理所涉及的范圍比較廣[1-2]。Burghen在1980年提出PCOS發(fā)病中有胰島素抵抗（IR）參加，相關(guān)研究也已經(jīng)驗(yàn)證了PCOS和IR間聯(lián)系緊密，胰島素傳導(dǎo)路徑內(nèi)任何環(huán)節(jié)的損傷都會(huì)造成IR。當(dāng)前PCOS伴隨IR已是內(nèi)分泌和婦科研究的重點(diǎn)，并引起相關(guān)學(xué)者廣泛關(guān)注[3-4]。

肖承悰教授，為京城四大名醫(yī)之首蕭龍友先生的嫡孫女及學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)傳承人，燕京流派主要傳承人，北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院（以下簡稱“我院”）首席教授、博士生導(dǎo)師、博士后傳承導(dǎo)師，第四批、第六批國家級(jí)名老中醫(yī)藥傳承指導(dǎo)老師。肖教授臨床經(jīng)驗(yàn)豐富，對(duì)各種婦科疑難雜癥都有獨(dú)到認(rèn)識(shí)[5-7]，其所獨(dú)創(chuàng)的“七子益腎理沖湯”廣泛應(yīng)用于臨床PCOS IR患者，均取得較好效果。

因此，本研究通過分析七子益腎理沖湯對(duì)PCOS IR大鼠卵巢上皮細(xì)胞炎性因子及IR狀態(tài)的影響，為臨床患者治療提供一些實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取SPF級(jí)Wistar雄性大鼠60只，23日齡，購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司（合格證號(hào)SCXK 20060009），體重 40～60 g，平均（51.06±4.82）g。 常規(guī)飼養(yǎng) 2 d 后開始實(shí)驗(yàn)，大鼠分籠飼養(yǎng)，每個(gè)籠內(nèi)5只，室溫22～26℃，相對(duì)濕度55%～65%，晝夜循環(huán)，保持12 h光照，大鼠灌胃、添加飼料及換水等都有專人進(jìn)行，大鼠飲用水為滅菌純水，普通飼料購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司。

1.2 藥物及試劑

藥物：七子益腎理沖湯（女貞子15 g、菟絲子15 g、枸杞子 15 g、巴戟天15 g、覆盆子15 g、沙苑子 15 g、桑寄生 15 g、川斷 15 g、白芍 15 g、香附 12 g、黃芪 15 g），制成顆粒劑（來自我院），依據(jù)人鼠體重進(jìn)行換算，制成濃度為0.295 g/mL的溶液，以6 mL/kg灌胃。

試劑：黃體生成素（LH）試劑盒（批號(hào)：2400543）；睪酮（T）試劑盒（國藥準(zhǔn)字：S20050106）；卵泡刺激素（FSH）試劑盒（批號(hào)：3401125）；空腹胰島素（FINS）試劑盒（批號(hào)：3400637）；色素上皮衍生因子（PEDF）試劑盒（貨號(hào)：CSB-E08819r）；內(nèi)脂素（Visfatin）試劑盒（貨號(hào)：CSB-E08941r）；白細(xì)胞介素（IL-6）試劑盒（貨號(hào)：CSB-E04640r）；以上試劑均購自武漢華美科技公司。

1.3 方法

1.3.1 模型制備 采用高脂高卡飼料（蔗糖30%、雞蛋2%、豬油20%、奶粉4%、普通飼料44%）喂養(yǎng)80 d，并從第60天起由頸部向大鼠注射9 mg硫酸普拉睪酮鈉稀釋液，每天1次，連續(xù)注射20 d，注射的第21天采集大鼠靜脈血，檢測(cè)血清T、空腹血糖（FBG）、LH及FINS含量，算出胰島素敏感指數(shù)（ISI），剔除不符合IR型的PCOS模型，共計(jì)入選大鼠54只。

1.3.2 分組及給藥 按照隨機(jī)數(shù)字表法將PCOS IR模型大鼠分成觀察組（27只）和對(duì)照組（27只），觀察組采用劑量為6 mL/kg七子益腎理沖湯灌胃，對(duì)照組采用等劑量蒸餾水灌胃，每天1次，持續(xù)灌胃20 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 大鼠血清性激素含量 大鼠末次給藥以后，禁止飲食、飲水24 h，腹腔注射0.3 mL 2%戊巴比妥鈉麻醉，采集腹主動(dòng)脈血5 mL，3000 r/min離心（有效離心半徑10 cm）8 min后取上清液，化學(xué)免疫發(fā)光法檢測(cè)血清FSH、LH及T含量，計(jì)算LH/FSH值。

1.4.2 大鼠血糖含量、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及ISI放射免疫法檢測(cè)血清FINS及FBG含量，葡萄糖氧化酶法檢測(cè)胃管給葡萄糖后2 h血糖（OGTT-2 h BG）含量，采用李光偉等[8]提出的方法計(jì)算HOMA-IR和ISI，HOMA-IR=FINS×FBG/22.5，ISI=1/FINS×FBG。

1.4.3 大鼠上皮細(xì)胞炎性因子含量 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)卵巢上皮細(xì)胞內(nèi)炎性因子PEDF、Visfatin及IL-6含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠血清性激素含量比較

觀察組大鼠血清LH、T含量及LH/FSH均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組大鼠血清性激素含量比較（±s）

表1 兩組大鼠血清性激素含量比較（±s）

注： LH：黃體生成素；T：睪酮；FSH：卵泡刺激素

組別 只數(shù) LH（mU/mL） T（ng/mL） FSH（mU/mL） LH/FSH觀察組對(duì)照組t值P值27 27 4.48±0.49 5.80±0.52 9.637＜0.05 9.64±1.38 16.79±1.47 7.522＜0.05 2.02±0.26 1.75±0.24 1.053＞0.05 2.27±0.72 3.83±0.75 9.476＜0.05

2.2 兩組大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比較

觀察組大鼠血清FBG、FINS、OGTT-2 h BG含量及HOMA-IR均低于對(duì)照組，ISI高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比較（±s）

表2 兩組大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比較（±s）

注：HOMA-IR：胰島素抵抗指數(shù)；FBG：空腹血糖；ISI：胰島素敏感指數(shù)；FINS：空腹胰島素；OGTT-2 h BG：胃管給葡萄糖后2 h血糖

組別 只數(shù)HOMA-IR FBG（mmol/L） ISI FINS（g/L）OGTT-2 h BG（mmol/L）觀察組對(duì)照組27 27 t值 P值3.62±0.38 5.63±0.40 8.074＜0.05 3.96±0.52 5.65±0.57 9.376＜0.05 0.28±0.04 0.24±0.06 7.052＜0.05 16.83±0.17 22.31±0.19 8.552＜0.05 6.74±0.55 9.23±0.58 9.267＜0.05

2.3 兩組大鼠上皮細(xì)胞炎性因子含量比較

觀察組大鼠上皮細(xì)胞PEDF、Visfatin及IL-6含量均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組大鼠上皮細(xì)胞炎性因子含量比較（±s）

表3 兩組大鼠上皮細(xì)胞炎性因子含量比較（±s）

注：PEDF：色素上皮衍生因子；Visfatin：內(nèi)脂素；IL-6：白細(xì)胞介素-6

組別 只數(shù) PEDF（ng/mL） Visfatin（ng/mL） IL-6（pg/mL）觀察組對(duì)照組27 27 t值 P值18.84±0.63 32.90±0.68 10.074＜0.05 2.48±0.37 4.71±0.39 7.895＜0.05 22.61±1.56 32.09±1.59 8.339＜0.05

3 討論

PCOS的臨床特征、病理變化、卵巢形態(tài)學(xué)改變均具有顯著的種族和個(gè)體差異[9]，且PCOS患者多伴有IR，分泌過多的胰島素會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)雄激素水平升高并促進(jìn)其發(fā)揮生物學(xué)作用[10]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為PCOS是本虛標(biāo)實(shí)之證，本質(zhì)為脾腎兩虛，標(biāo)是痰瘀阻滯胞宮而形成。一方面，水濕不化、脾失健運(yùn)而造成痰濕內(nèi)生，進(jìn)而痰濕阻滯產(chǎn)生血瘀，體內(nèi)痰瘀互結(jié)，對(duì)沖任胞宮阻滯，長時(shí)間蘊(yùn)而化毒，產(chǎn)生了病理狀況[11-12]；另一方面，機(jī)體脾腎兩虛，造成運(yùn)化無力，精微之物無法梳布全身，長時(shí)間化熱傷津，呈現(xiàn)出陰虛內(nèi)火瘀毒表象。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究顯示，體內(nèi)IR時(shí)多余的游離脂肪、胰島素和葡萄糖使機(jī)體陰陽平衡損壞，進(jìn)而引發(fā)疾病[13]。另外，由于腎陽虧虛，機(jī)體溫煦推動(dòng)力降低，造成身體功能下降，胰島素受體抵抗時(shí)表征是受體結(jié)構(gòu)與功能異常，胰島素受體的數(shù)量和親和力降低造成胰島素結(jié)合量降低，受體喪失部分功能，受體結(jié)合胰島素后向細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)信號(hào)導(dǎo)致代謝過程異常[14-17]。

“七子益腎理沖湯”是肖教授多年來臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的臨床驗(yàn)方，從沖脈入手，重視腎、沖脈在女性生理病理中的重要地位，結(jié)合辨證，凡辨證為肝腎不足、沖脈失調(diào)的疾病均可應(yīng)用。方中以女貞子、菟絲子、枸杞子、沙苑子益腎氣、滋腎陰，巴戟天、覆盆子補(bǔ)腎陽，桑寄生、川斷補(bǔ)腎氣而不滯始，顯“益腎理沖”之意，白芍、香附養(yǎng)肝疏肝，柔疏結(jié)合，沖脈得理，黃芪補(bǔ)氣健脾，氣行則沖血條達(dá)，全方共奏益腎養(yǎng)肝、調(diào)理沖脈之功[18-20]。肖教授運(yùn)用“七子益腎理沖”湯治療PCOS IR患者，效果極佳。

本研究顯示，觀察組大鼠卵巢組織內(nèi)血清FINS、LH及T含量下降，使大鼠多囊化病理狀況得以改善。一方面通過升高PCOS大鼠ISI，降低HOMA-IR，使血清內(nèi)FINS含量降低，雄激素產(chǎn)生路徑被阻斷，血清內(nèi)雄激素含量下降，卵巢功能恢復(fù)，排卵情況得以改善；另一方面改善LH形成亢進(jìn)，并使雄激素水平下降來誘發(fā)排卵。IL-6為多效能細(xì)胞因子，相關(guān)研究顯示IR及2型糖尿病與IL-6有緊密聯(lián)系，在2型糖尿病患者與肥胖者中，胰島素敏感性降低、糖耐量下降及血糖上升均與IL-6含量升高有關(guān)。Visfatin為一種新型的內(nèi)臟脂肪細(xì)胞慢性炎性因子，有類胰島素活性，同時(shí)可加速脂肪積聚、合成與分化，抑制肝細(xì)胞葡萄糖釋放。PEDF為新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，在IR和脂代謝內(nèi)有重要影響[21-24]。本研究顯示，觀察組大鼠上皮細(xì)胞PEDF、Visfatin及IL-6含量均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示七子益腎理沖湯通過降低炎癥毒性和脂毒性，使葡萄糖轉(zhuǎn)化障礙降低，糖原合成量提升，IR得以糾正，高胰島素血癥下降。

綜上所述，七子益腎理沖湯可降低PCOS胰島素抵抗大鼠卵巢上皮細(xì)胞炎性因子含量，調(diào)節(jié)LH/FSH比值，改善高胰島素血癥與高雄激素血癥，使糖代謝紊亂得以調(diào)整。