孫萍，周麗莉，張瑞麗，張乃方，許青霞

(鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州450008)

腦膠質(zhì)瘤的病情持續(xù)性進(jìn)展，能夠?qū)е禄颊卟∷缆实娘@著上升。流行病學(xué)研究顯示，腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率可達(dá)323～556/10萬人左右[1]。腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)率較高，治療后的病情緩解率較低，整體臨床預(yù)后不佳[2]。不同的生物學(xué)因子的改變，能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤、增殖或者凋亡等病理過程的改變，進(jìn)而參與到腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程中。X連鎖凋亡抑制蛋白 （X linked apoptosis suppressor protein，XIAP）的高表達(dá)，不僅能夠抑制癌細(xì)胞凋亡，提高癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖的風(fēng)險，同時還能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞的分化障礙，增加低分化的風(fēng)險[3，4]；窯蛋白 1（Caveolin－1）的異常表達(dá)，能夠提高癌細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，促進(jìn)腫瘤相關(guān)蛋白myc的上游轉(zhuǎn)錄因子的激活，參與到腦膠質(zhì)瘤的擴(kuò)散及病情復(fù)發(fā)過程中[5]。部分研究已經(jīng)探討了XIAP在腦膠質(zhì)瘤患者中的高表達(dá)表現(xiàn)，認(rèn)為XIAP的高表達(dá)是促進(jìn)患者癌細(xì)胞的異型性、病理分級等進(jìn)展的重要原因，但對于XIAP與腦膠質(zhì)瘤臨床預(yù)后的關(guān)系研究不足。為了進(jìn)一步探討XIAP、Caveolin－1蛋白與腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系，從而為臨床上患者的病情評估提供參考，本研究選取2013年1月至2015年12月我院保存的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本59例，探討了相關(guān)蛋白的差異性表達(dá)情況，報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2013年1月至2015年12月我院保存的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本59例，其中男性32例，女性27例；年齡29～62歲，中位年齡49歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均為初治治療患者；⑵在我院接受手術(shù)治療，術(shù)后病理證實為腦膠質(zhì)瘤；⑶臨床隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴術(shù)前接受過放化療等治療；⑵合并有其他惡性腫瘤；⑶臨床隨訪資料不完整。同時選取瘤旁組織（距腫瘤組織＞2cm）作為對照組。

1．2 檢測方法 采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入XIAP和Caveolin－1蛋白抗體（鼠來源，ABCUM公司），37℃孵育2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體（購自abcum公司），37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1．3 結(jié)果判斷 XIAP蛋白陽性表達(dá)于細(xì)胞漿中，Caveolin－1蛋白陽性表達(dá)于細(xì)胞核；隨機(jī)選取5個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，對染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分，染色強(qiáng)度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞比例≤10%為1分，11%～25%為2分，26%～50%為3分，＞50%為4分。最終得分為染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例得分之積，分?jǐn)?shù)≤4分為陰性表達(dá)，＞4分為陽性表達(dá)。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS 19．0軟件，計數(shù)資料比較使用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。生存曲線采用Kaplan－Meier法描繪，比較采用Log－rank法。以P＜0．05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 腦膠質(zhì)瘤和瘤旁組織XIAP和Caveolin－1表達(dá) 腦膠質(zhì)瘤組織XIAP和Caveolin－1蛋白陽性表達(dá)率分明顯高于瘤旁組織，差異比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。見表 1。

表1 腦膠質(zhì)瘤和瘤旁組織XIAP和Caveolin-1表達(dá)

2．2 XIAP表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征關(guān)系XIAP表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者年齡、性別、腫瘤類型和腫瘤直徑無關(guān) （P＞0．05）， 與病理分級有關(guān) （P＜0．05）。見表 2。

表2 XIAP表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征關(guān)系

2．3 Caveolin－1表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征關(guān)系 Caveolin－1表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者年齡、性別、腫瘤類型、病理分級和腫瘤直徑無關(guān)（P＞0．05），見表3。

2．4 XIAP和Caveolin－1表達(dá)相關(guān)性分析 腦膠質(zhì)瘤XIAP蛋白表達(dá)與Caveolin－1蛋白表達(dá)無相關(guān)性（P＞0．05），見表 4。

2．5 XIAP和 Caveolin－1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系截止2018年1月，XIAP蛋白陽性表達(dá)患者中位總生存時間為21個月，明顯短于陰性表達(dá)患者的33個月（χ2=8．916，P＜0．05），Caveolin－1 蛋白陽性表達(dá)患者中位總生存時間為20個月，明顯短于陰性表達(dá)患者的 34 個月（χ2=31．972，P＜0．05）。 見圖 1。

表3 Caveolin-1表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征關(guān)系

表4 XIAP和Caveolin-1表達(dá)相關(guān)性分析

圖1 生存曲線圖

3 討論

家族遺傳性因素、表觀遺傳學(xué)的改變等，均可以促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生。腦膠質(zhì)瘤治療后的病情復(fù)發(fā)率較高，治療后的五年生存率或者中位生存時間等生存指標(biāo)的改善效果較為局限[6]。包括多中心隨機(jī)或者臨床對照研究顯示，腦膠質(zhì)瘤治療后的無瘤生存期不足24個月，治療后的病死率持續(xù)性維持在15%～25%左右[7，8]。而通過對腦膠質(zhì)瘤的基礎(chǔ)領(lǐng)域方面的研究，能夠為疾病的早期診斷及臨床預(yù)后評估提供參考，特別是可以為腫瘤免疫靶向治療或者生物學(xué)治療提供新的作用靶點。

XIAP不僅是重要的凋亡抑制因子，其能夠通過修飾染色體末端端粒結(jié)構(gòu)，從而抑制癌細(xì)胞的程序性凋亡，同時近年來相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究也顯示，XIAP表達(dá)濃度的改變對于細(xì)胞形變能力同樣具有一定的影響，可以提高癌細(xì)胞早期發(fā)生過程中浸潤臨近正常腦組織的風(fēng)險，導(dǎo)致癌細(xì)胞浸潤周期組織深度的改變，XIAP還能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞局部偽足的形成，提高癌細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移能力[9]；Caveolin－1不僅能夠參與到惡性腫瘤早期發(fā)生過程中免疫逃逸及免疫紊亂的發(fā)生，同時還能夠影響癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄上游因子如cyc或者啟動子的激活，增加癌細(xì)胞的DNA擴(kuò)增風(fēng)險[10]。近年來基礎(chǔ)方面的理論認(rèn)為，XIAP在消化系統(tǒng)或者生殖系統(tǒng)等惡性腫瘤的病情進(jìn)展過程中具有重要的促進(jìn)作用，其能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞異型性的改變，導(dǎo)致細(xì)胞分化成熟障礙[11，12]。 但對于Caveolin－1的分析研究不足，同時本次研究探討了Caveolin－1等與腦膠質(zhì)瘤患者的生存預(yù)后的關(guān)系。

本研究通過相關(guān)免疫組化分析研究發(fā)現(xiàn)，XIAP、Caveolin－1蛋白在腦膠質(zhì)瘤患者病灶組織中存在顯著的異常高表達(dá)趨勢，提示XIAP、Caveolin－1蛋白均參與到了腦膠質(zhì)瘤的病情進(jìn)展過程中，XIAP、Caveolin－1蛋白的高表達(dá)能夠通過加劇腫瘤細(xì)胞DNA的擴(kuò)增、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡比例等，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[13]：⑴XIAP蛋白的異常高表達(dá)能夠提高腫瘤細(xì)胞的粘附能力，促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)基因的突變風(fēng)險；⑵Caveolin－1蛋白的高表達(dá)能夠?qū)е履X膠質(zhì)瘤細(xì)胞的基因錯配修復(fù)作用的下降，提高腫瘤的復(fù)發(fā)風(fēng)險。李世武等[14]研究者在探討了XIAP等腫瘤相關(guān)蛋白在腦膠質(zhì)瘤患者病灶組織中的異常表達(dá)時發(fā)現(xiàn)，XIAP蛋白的陽性表達(dá)率可平均上升25%以上，同時腦膠質(zhì)瘤患者的病死率越高，放化療治療后的病情緩解率越低，XIAP蛋白的高表達(dá)趨勢越為明顯。但在探討相關(guān)蛋白與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征關(guān)系的過程中發(fā)現(xiàn)，Caveolin－1蛋白與腦膠質(zhì)瘤患者的臨床病理特征并無顯著的關(guān)聯(lián)，提示Caveolin－1蛋白可能主要參與到了腦膠質(zhì)瘤的早期發(fā)生過程中，而對于疾病的后續(xù)臨床進(jìn)展、臨床分期、腫瘤細(xì)胞分化等可能并無明顯的影響。XIAP蛋白與腦膠質(zhì)瘤患者的腫瘤細(xì)胞分級密切相關(guān)，XIAP對于腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理分級的影響主要考慮與XIAP影響到了腦膠質(zhì)瘤患者的神經(jīng)元細(xì)胞的核異型性、核質(zhì)比及侵襲能力等有關(guān)[15]。最后，本研究發(fā)現(xiàn)XIAP和Caveolin-1表達(dá)與患者的生存預(yù)后具有一定相關(guān)性，XIAP和Caveolin-1高表達(dá)的患者，其中位生存時間明顯縮短，這主要由于相關(guān)蛋白的表達(dá)影響到了腦膠質(zhì)瘤的治療敏感性有關(guān)，同時高表達(dá)的患者腫瘤惡性程度較高，生存時間較短。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤組織XIAP、Caveolin-1蛋白表達(dá)明顯升高，同時XIAP和Caveolin-1蛋白的表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者的生存預(yù)后具有一定相關(guān)性。