李巨燕 王秀芹 李巨臣

（1內(nèi)蒙古大興安嶺林業(yè)學(xué)校，內(nèi)蒙古牙克石022150；2內(nèi)蒙古大興安嶺林業(yè)科學(xué)技術(shù)研究所，內(nèi)蒙古牙克石022150）

杏鮑菇（Pleurotus eryngii）是層菌綱傘菌目側(cè)耳科真菌，別名為刺芹側(cè)耳。

目前食用菌栽培戶所用的菌種購(gòu)自菌種廠或者科研單位，為了保證足夠的接種量和避免意外情況發(fā)生，往往購(gòu)置母種量多于實(shí)際用種量，且多余菌種保存再用，而長(zhǎng)期保存的菌種會(huì)出現(xiàn)退化現(xiàn)象。因此長(zhǎng)期保存的菌種重新投入生產(chǎn)前，必須進(jìn)行提純復(fù)壯，才能保證菌種安全可靠。復(fù)壯培養(yǎng)基的選擇是菌種復(fù)壯關(guān)鍵。為此筆者進(jìn)行了杏鮑菇母種提純復(fù)壯培養(yǎng)基比較試驗(yàn)，以期篩選出最適合杏鮑菇菌種復(fù)壯的培養(yǎng)基。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株

杏鮑菇A-2，由遼寧省微生物研究院提供，經(jīng)恒溫冰箱保藏兩年，其間未進(jìn)行轉(zhuǎn)管。

1.1.2 試驗(yàn)原材料

配制培養(yǎng)基所需原料馬鈴薯、玉米粒、新鮮杏鮑菇，均由市場(chǎng)購(gòu)買。鋸木屑為內(nèi)蒙古大興安嶺林區(qū)的白樺等闊葉樹種，麩皮來自牙克石市勝利面粉廠。其他如葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂等為分析純。

1.2 培養(yǎng)基配方

①PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18～20 g，加水1000 mL；②綜合馬鈴薯培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，維生素B110 mg，瓊脂18～20 g，加水1000 mL；③馬鈴薯+玉米培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，新鮮玉米粒30～40 g，瓊脂18～20 g，加水1000 mL；④鮮菇培養(yǎng)基：新鮮杏鮑菇200 g，葡萄糖20 g，瓊脂16～18 g，加水1000 mL。培養(yǎng)料pH與當(dāng)?shù)厮|(zhì)的pH一致，不做調(diào)整。

鋸木屑培養(yǎng)基配方：風(fēng)干闊葉鋸木屑78%，新鮮麩皮20%，葡萄糖1%，石膏1%。料含水量125%～150%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 培養(yǎng)基配制方法

為保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，PDA培養(yǎng)基配制同常規(guī)，其他培養(yǎng)基參考PDA配制方法略有變化，具體如下：

馬鈴薯+玉米培養(yǎng)基需將新鮮玉米粒與馬鈴薯同時(shí)煮沸20～30 min，過濾取濾液。鮮菇培養(yǎng)基制作時(shí)將購(gòu)買的新鮮杏鮑菇切塊呈黃豆粒大小，稱取200 g放入容器中，加水1000 mL，加熱煮沸15～30 min，過濾，取濾液，加水補(bǔ)足1000 mL。在煮汁中加入瓊脂，小火加熱，不斷用玻璃棒攪拌，至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖稍煮幾分鐘，攪拌至溶化，防止糊底或溢出。分裝試管、滅菌、擺斜面，無菌檢查按常規(guī)方法。

鋸木屑培養(yǎng)基按常規(guī)方法配置，注意加水以后要靜置0.5～1 h，以保證鋸木屑吃透水分。裝瓶（250 mL），封口膜封口，于125℃高壓蒸汽滅菌2 h，利用高壓鍋余熱燜8 h以上，出鍋備用。滅菌后的鋸木屑培養(yǎng)基空白培養(yǎng)一周，觀察是否有菌落產(chǎn)生，用以檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。

1.3.2 接種與培養(yǎng)

將保存兩年的杏鮑菇母種試管外壁用75%酒精消毒，無菌水沖洗數(shù)次。接種時(shí)注意試管口用燃燒的酒精燈火焰封口。將母種切割成黃豆粒大小的菌塊，分別移接到裝有供試培養(yǎng)基試管中，每種培養(yǎng)基接種量不少于10支試管。

接種后的試管放置在室溫22～25℃，空氣相對(duì)濕度30%條件下無菌培養(yǎng)。觀察菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)，直至長(zhǎng)滿試管。

1.3.3 轉(zhuǎn)接二級(jí)種并觀察現(xiàn)蕾情況

將上述無菌培養(yǎng)的長(zhǎng)滿試管（一般16 d）的杏鮑菇母種分別接種在瓶裝鋸木屑培養(yǎng)基上，按照常規(guī)方法培養(yǎng)二級(jí)菌種。每種母種接種量不少于20瓶。觀察不同母種菌絲吃料及生長(zhǎng)情況。

菌絲滿瓶后觀察菌絲能否正常分化菇蕾，從而判斷菌絲的活力，進(jìn)而決定該菌種是否可以用于生產(chǎn)。正?，F(xiàn)蕾的二級(jí)菌種即可投入生產(chǎn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試培養(yǎng)基上杏鮑菇母種生長(zhǎng)情況

培養(yǎng)結(jié)果見表1、圖1-圖3。

表1 供試培養(yǎng)基上杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)情況

圖1 供試培養(yǎng)基接種2 d后菌種萌發(fā)情況

圖2 供試培養(yǎng)基上培養(yǎng)8 d菌種生長(zhǎng)情況

圖3 供試培養(yǎng)基上培養(yǎng)13 d菌種生長(zhǎng)情況

接種培養(yǎng)2 d后菌種塊開始萌發(fā)，其中馬鈴薯+玉米培養(yǎng)基上菌塊部位出現(xiàn)絨毛狀菌絲最明顯，鮮菇培養(yǎng)基其次，綜合馬鈴薯培養(yǎng)基上不明顯，PDA培養(yǎng)基上菌種未萌發(fā)（圖1）。菌種萌發(fā)早，搶先占領(lǐng)培養(yǎng)基表面，可降低雜菌污染率。由圖2可見，培養(yǎng)8 d，以玉米培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最為健壯，已生長(zhǎng)至斜面培養(yǎng)基長(zhǎng)度的1/2，鮮菇培養(yǎng)基上菌絲其次，PDA培養(yǎng)基上菌絲纖細(xì)稀疏，爬壁力弱；培養(yǎng)13 d（圖3），菌絲都基本長(zhǎng)滿斜面，但PDA培養(yǎng)基、綜合馬鈴薯培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)而纖細(xì)，鮮菇培養(yǎng)基和馬鈴薯+玉米培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)健壯，爬壁能力強(qiáng)。

2.2 二級(jí)種轉(zhuǎn)接培養(yǎng)及現(xiàn)蕾觀察結(jié)果

不同母種培養(yǎng)基培養(yǎng)杏鮑菇母種，轉(zhuǎn)接鋸木屑培養(yǎng)基。觀察結(jié)果，培養(yǎng)3～5 d，綜合馬鈴薯培養(yǎng)基的母種轉(zhuǎn)接二級(jí)種全部被污染，說明該母種培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌種生長(zhǎng)勢(shì)弱；PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種轉(zhuǎn)接后污染率達(dá)到60%以上，且菌絲吃料速度較慢，說明菌種活力弱；馬鈴薯+玉米培養(yǎng)基及鮮菇培養(yǎng)基培養(yǎng)的母種，轉(zhuǎn)接后菌絲生長(zhǎng)基本一致，吃料速度沒有明顯區(qū)別，且菌絲白、濃、密、粗壯，污染率低（分別為10%和5%），分別于50 d、48 d開始現(xiàn)蕾，而PDA培養(yǎng)母種轉(zhuǎn)接50 d以后才現(xiàn)蕾。

3 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，四種供試母種培養(yǎng)基對(duì)杏鮑菇母種的復(fù)壯效果以馬鈴薯+玉米、鮮菇（杏鮑菇）培養(yǎng)基為好，復(fù)壯菌種菌絲生長(zhǎng)最為健壯。建議對(duì)杏鮑菇菌種復(fù)壯時(shí)采用鮮菇（杏鮑菇）培養(yǎng)基或馬鈴薯+玉米培養(yǎng)基。