解曉燕　吳春健

【摘 要】本文對目前使用的細(xì)菌生物膜去除方法進(jìn)行了梳理：堿性清洗劑通過減弱生物膜和物體表面黏合力作用可完全清除生物膜，去污能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通含酶清洗劑，可用于醫(yī)療器械的清洗。目前醫(yī)院多使用消毒劑清洗醫(yī)療器械，NaOCl與含銀納米粒子灌洗劑和氯己定相比是效果最好的。另外，某些藥物如氟喹諾酮類藥物，對乳膠鍍膜尿管形成生物膜的膜內(nèi)細(xì)菌的清除效果較好。蒲公英（PC）葉水提物（PCAE）和氫乙醇提取物（PCHE）等對細(xì)菌生物膜均有抑制作用，某些中藥對細(xì)菌生物膜有較強(qiáng)的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】細(xì)菌;生物膜;去除

中圖分類號： R187.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A文章編號： 2095-2457（2019）36-0256-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.36.121

細(xì)菌生物膜（Bacterial biofilm，BBF）指的是黏附于生物或非生物體表面的高度組織化、系統(tǒng)化的膜樣聚合物，是由細(xì)菌分泌的多糖基質(zhì)、纖維蛋白以及脂質(zhì)蛋白等物質(zhì)，將細(xì)菌包裹在內(nèi)而形成的[1]。因?yàn)锽BF有多重耐藥性及免疫逃逸能力，所以具有高致病、難治愈的特點(diǎn)，具有BBF的細(xì)菌往往具有非常強(qiáng)的耐藥性及抵抗機(jī)體免疫系統(tǒng)作用的能力，所以感染部位的細(xì)菌形成了生物膜或者生物材料上污染的細(xì)菌形成了生物膜，再使用正常的藥物劑量藥物劑量不易治愈，BBF現(xiàn)已成為臨床上難治性感染形成的重要原因之一[2]，如何去除BBF已然成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)。

1 清洗劑去除細(xì)菌生物膜

清洗是通過物理化學(xué)方法，除去被清洗物如醫(yī)療器械、物品表面上可見和不可見雜質(zhì)的過程。沈瑾[3]制備人工生物膜，將布滿細(xì)菌生物膜的玻片分別放入堿性電解水和ZEN多功能機(jī)用清洗液、ANIOSYME DD1、強(qiáng)效清洗劑、芭格美清洗劑及魯沃夫生物膜清洗液中，放置水浴箱將溫度調(diào)至40°C浸泡30分鐘后比較使用不同藥液對細(xì)菌生物膜去除的效果。結(jié)果顯示堿性電解水對細(xì)菌生物膜的去除效果明顯，相比于某些市售醫(yī)用清洗劑，其去除效果更好，可以用于醫(yī)療器械的清洗。堿性清洗劑是由堿以及表面活性劑等物質(zhì)構(gòu)成，表面活性劑是一類帶電荷并具有兩親性質(zhì)的化合物，可能與帶負(fù)電荷的細(xì)菌生物膜相互作用產(chǎn)生滅菌效果[4]。

2 消毒劑去除生物被膜

2.1 NaClO配合被動超聲對根管內(nèi)細(xì)菌生物膜

王瑋等[5]研究NaClO配合被動超聲（passive ultrasonic irrigation，PUI）對根管內(nèi)細(xì)菌生物膜的清除效果。掃描電鏡觀察示PUI能夠更有效清除表面細(xì)菌生物膜。低濃度NaClO輔助PUI能夠有效提高殺菌和清除生物膜效果;高濃度NaClO配合PUI并不能顯著提高其殺菌效果，但能更有效地清除成熟糞腸球菌生物膜。較低濃度NaClO聯(lián)合使用PUI可增強(qiáng)殺菌效果，但對于5.25% NaClO殺菌的協(xié)同作用并不顯著，但是配合使用PUI可以獲得更好的清理效果。

2.2 含銀納米粒子灌洗劑（AgNP）、次氯酸鈉（NaClO）和氯己定對生物膜的影響

Rodrigues等[6]研究：AgNP、NaClO和氯己定對糞腸球菌生物膜的抵抗作用以及對抗感染的牙本質(zhì)小管。AgNP解決方案淘汰細(xì)菌的較少，但能溶解更多細(xì)菌。AgNP溶液5min后對牙本質(zhì)小管中浮游細(xì)菌的清除效果更，但在30分鐘時，觀察到的活菌較少。其結(jié)論NaOCl相比較AgNP和氯己定而言是效果最好的，因?yàn)樗苡行У仄茐纳锬ひ约扒宄锬ず脱辣举|(zhì)小管中的細(xì)菌。

2.3 過氧乙酸消毒劑去除細(xì)菌生物膜

軟式內(nèi)鏡 （主要指消化內(nèi)鏡和呼吸內(nèi)鏡） 近年來普遍用于各醫(yī)療機(jī)構(gòu)，且數(shù)量持續(xù)增多，目前臨床有一種內(nèi)鏡專用過氧乙酸消毒劑對管腔生物膜清除效果是最佳的。通過細(xì)菌定量檢測方法，來評價某內(nèi)鏡專用過氧乙酸消毒劑對模擬內(nèi)鏡管腔生物膜清除效果，檢測結(jié)果顯示，臨床使用后的內(nèi)鏡在全自動清洗消毒機(jī)上用該過氧乙酸消毒劑完成清洗消毒后，均未檢出存活菌;而在相同條件下，戊二醛則只能使80%的內(nèi)鏡消毒合格。研究表明[7]，內(nèi)鏡專用過氧乙酸的消毒效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)戊二醛消毒方式，可有效清除內(nèi)鏡管腔內(nèi)生物膜。

3 藥物去除生物膜

3.1 雙功能抗生素- 轉(zhuǎn)運(yùn)體結(jié)合物去除生物膜

Antonoplis 等[8]研究合成萬古霉素-D-八精氨酸共軛物（V-R8），并調(diào)查其在解決抗生素不敏感細(xì)菌種群方面的有效性，研究表示VR8根除MRSA生物膜表現(xiàn)超過萬古霉素?cái)?shù)量級，該研究說明與萬古霉素相比，這種新的雙功能共軛物具有更強(qiáng)的細(xì)胞聚集和膜微擾，基于其快速而有力的抗生物膜而耐藥細(xì)胞V-R8是抗MRSA感染的一種很有前途的藥物。

3.2 抗菌肽，預(yù)防細(xì)菌的有效途徑生物膜血小板聚集形成

由于皮膚革蘭氏陽性菌的污染，血小板濃縮物（PC）的安全性是輸血醫(yī)學(xué)中的一個主要問題。主要污染物表皮葡萄球菌，在PC中形成細(xì)菌細(xì)胞聚集物（生物膜），對輸血患者構(gòu)成安全風(fēng)險(xiǎn)。Alabdullatif[9]等研究的用3種人工合成蛋白血小板衍生肽（Pd4）和精氨酸色氨酸重復(fù)序列（RW3和RW4）在添加葡萄糖的胰蛋白酶豆液（Tsbg）和PC中進(jìn)行了殺菌和抗生物膜試驗(yàn)。該研究說明時間消磨試驗(yàn)證明表皮葡萄球菌經(jīng)過24小時的三磷酸腺苷處理后，菌株被清除，同時觀察到生物膜形成的抑制作用。表皮葡萄球菌在TSBg和PC中，AMP處理只能有效地降低機(jī)械分離生物膜的細(xì)菌負(fù)荷。三種合成AMPs（PD4-RW3-RW4）的結(jié)合可以抑制生物膜的形成。

4 植物提取物抑制生物膜

4.1 植物乳桿菌對生物膜的抑制

呂欣然[10]等利用掃描電鏡發(fā)現(xiàn)：菌株XCT-1粗提物不僅能夠降低溫和氣單胞菌生物膜的生成量，而且使其生物膜結(jié)構(gòu)疏松。說明菌株XCT-1粗提物中的蛋白類物質(zhì)主要通過干擾溫和氣單胞群體感應(yīng)系統(tǒng)抑制其生物膜的形成。

4.2 蒲公英葉水提物和氫乙醇提取物的抗菌活性

Atreya等[11]研究，采用微量稀釋法測定最低抑菌濃度（MIC）和最低致死濃度（MLC），分析在浮游生物條件下對糞腸球菌、銅綠假單胞菌、放線菌和白色念珠菌的抑菌效果。結(jié)果表明，其MIC和MLC值在0.25～4mg/mL之間。除白色念珠菌外，PCHE獲得的MLC對所有供試菌株的生長均有100%的抑制作用。PCAE對糞腸球菌和銅綠假單胞菌有相同的作用。兩種PC提取物均能去除糞腸球菌生物膜，且僅能去除。PCHE陽性對照對MIC和MLC中所有被測菌株的生長均有抑制作用。研究說明：蒲公英（PC）葉水提物（PCAE）和氫乙醇提取物（PCHE）對細(xì)菌生物膜均有抑制作用。

4.3 敗醬草提取物抑制生物被膜

盧佳琨[12]研究證明，敗醬草提取物對金黃色葡萄球菌生物被膜的形成具有抑制作用，且抑制效果隨濃度的增大而增強(qiáng)，48h時加入濃度為8mg/mL敗醬草提取物，抑制效果最顯著。

4.4 連翹苷抑制生物被膜

王業(yè)梅，程惠娟[13]觀察連翹苷對銅綠假單胞菌黏附能力及生物被膜形成活性的影響時，發(fā)現(xiàn)連翹苷對銅綠假單胞菌MIC為512mg/L;連翹苷對銅綠假單胞菌SMIC50和SMIC80分別為256，1000mg/L;100、1000mg/L的連翹苷對銅綠假單胞菌早期黏附有抑制作用和生物被膜形態(tài)有顯著影響。研究說明：連翹苷對銅綠假單胞菌的黏附和生物被膜有較強(qiáng)的抑制作用。

4.5 五倍子醇提液抑制生物被膜

五倍子（Galla Chinensis）是一種具有良好抗菌活性的藥用植物。李蓉[14]等通過體外試驗(yàn)觀察五倍子醇提液對銅綠假單胞菌生物膜的影響，結(jié)果顯示在被膜形成的各個時期，抑制率隨藥物濃度升高而增加，呈劑量依賴性。在被膜形成的早期，藥物對白假絲酵母的抑制率較高，但隨著被膜的日趨成熟，藥物的抑制率越來越低。研究說明：五倍子鞣質(zhì)對白假絲酵母生物被膜的形成及成熟期生物被膜中白假絲酵母均具較強(qiáng)的抑制作用。

4.6 人參皂苷對生物被膜的抑制作用

人參，性微寒，屬于五加科人參屬植物。祖國傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，在治療感染性疾病時可加入人參，起到強(qiáng)身健體、提高抵抗力的作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)[15]，人參皂苷不直接影響金黃色葡萄球菌生長，而是通過減少細(xì)胞內(nèi)活菌數(shù)據(jù)，下調(diào)金黃色葡萄球菌黏附蛋白基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)不同濃度的人參皂苷對生物被膜的形成具有不同的抑制作用，抑制率隨著藥物濃度的增加而提高，對金黃色葡萄球菌生物被膜的形成具有抑制作用有增強(qiáng)趨勢。

隨著人們對生物膜研究的不斷深入，醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷改善，醫(yī)療器械的不斷增多，清洗消毒及滅菌技術(shù)有了新的挑戰(zhàn)，細(xì)菌生物膜也越來越受到廣泛關(guān)注。因此CSSD中心人員對待每一個環(huán)節(jié)都不應(yīng)小覷，稍有疏忽可能會帶來院內(nèi)感染的暴發(fā)。要從注重源頭、抓住細(xì)節(jié)、認(rèn)識新產(chǎn)品、掌握新技術(shù)中，不斷提高清洗效果，以保障后期的滅菌成功。在有效防止生物膜產(chǎn)生及清除生物膜的過程中，應(yīng)及時做好回收，預(yù)處理，選擇有效清洗劑及清洗方法，正確監(jiān)測清洗效果，定期檢測水路系統(tǒng)等環(huán)節(jié)。

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