陳建平，祝文彩，楊曙梅，叢 輝

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，江蘇226001）

消化道腫瘤是人類最常見的惡性腫瘤之一,好發(fā)年齡40～60歲,早期診斷、及早治療是改善患者預(yù)后、提高生存質(zhì)量的關(guān)鍵。糖類抗原50（CA50）是一種缺少巖藻糖殘基碳水化合物部分的獨特糖蛋白,在胰腺、肝臟、結(jié)直腸等消化道惡性腫瘤中有較高的檢出率,對惡性腫瘤的療效觀察、預(yù)后判斷具有一定的臨床意義[1-2]。糖類抗原242（CA242）是一種唾液酸化的鞘糖脂類抗原,主要用于胰腺癌、結(jié)直腸癌的輔助診斷,對腫瘤療效判斷、追蹤觀察具有重要意義[3-4]。

北京科美生物技術(shù)公司研制的CHEMCLIN 1500全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測感染性疾病標志物、腫瘤標志物,作為近年批準項目進入臨床實驗室應(yīng)用。本研究選擇CA50及CA242兩個腫瘤標志物,在CHEMCLIN 1500系統(tǒng)上評價檢測的精密度、正確度、檢出限和分析測量范圍,為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 北京科美生物技術(shù)有限公司CHEMCLIN 1500全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套的CA50、CA242試劑、校準品及質(zhì)控品。

1.2 檢測標本 南通大學(xué)附屬醫(yī)院確診的結(jié)直腸癌患者30例,靜脈采血3 mL,4 000 r/min離心10 min,分離血清備用。

1.3 方法學(xué)評價和實驗方法

1.3.1 精密度評價：參照NCCLS EP5-A2[5],常規(guī)IQC在控后按標本檢測程序進行檢測。選擇科美公司 CA50（批號 20140718）、CA242（批號 20131121）相應(yīng)的低、高兩個水平質(zhì)控品作為檢測標本,連續(xù)測定 20 次,計算批內(nèi)精密度均值（）、標準差（S）及變異系數(shù)（CV）；選取低、高兩個水平質(zhì)控品,連續(xù)測定20 天,計算批間精密度均值（）、標準差（S）及變異系數(shù)（CV）。

1.3.2 正確度評價：參照NCCLS EP15-A[6],按照檢測定值的參考物質(zhì)計算偏差進行驗證：分別選擇CA50（批號 20140926）、CA242（批號 20140910）的 4號（S3）及6號（S5）標準品,每天測定2次,連續(xù)測定5天,計算10次檢測結(jié)果均值,與靶值進行對比,計算檢測值與靶值的相對偏倚（%）。偏倚=[（測定值-靶值）/靶值]×100%。

1.3.3 檢出限評價：連續(xù)10次重復(fù)測定理論值為0的生理鹽水樣本,獲得空白值（Xb1）、標準差（S）,計算檢出限（XL）。XL=Xb1+kS,其中 k值為 3[7]。

1.3.4 線性范圍評價：參照NCCLS EP6-A[8],選取高值血清樣本（H）和低值血清樣本（L）各1份,按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L 的關(guān)系配置,形成6個系列濃度樣本,每份樣本測定3次,計算均值,計算回歸方程Y=aX+b和相關(guān)系數(shù)（r2）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析。

2 結(jié) 果

2.1 精密度評價 CA50低、高濃度批內(nèi)精密度（CV）分別為3.97%和2.86%,批間精密度（CV）分別為6.21%和3.05%；CA242低、高濃度批內(nèi)精密度（CV）分別為2.12%和1.38%,批間精密度（CV）分別為10.79%和8.38%。見表1。

表1 CA50、CA242批內(nèi)和批間精密度評價實驗

2.2 正確度評價 CA50、CA242的校準品正確度驗證結(jié)果見表2,CA50的S3、S5標準品相對偏倚分別為-1.08%、-2.04%,CA242的S3、S5標準品相對偏倚分別為2.64%、-2.14%,均低于廠家說明書的偏倚值（＜5%）,正確度滿足要求。見表2。

表2 CA50、CA242準確度評價實驗

2.3 檢出限評價 參照2013版醫(yī)院檢驗科建設(shè)管理規(guī)范[9],通過測定生理鹽水獲得CA50、CA242的檢出下限分別為0.68 U/mL、0.56 U/mL。

2.4 線性范圍評價 選取CA50高濃度（150.86 U/mL）、低濃度（19.43 U/mL）血清樣本,CA242高濃度（191.25 U/mL）、低濃度（15.86 U/mL）血清樣本,分別配置成系列濃度樣本,對測定值與理論值進行統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示CA50斜率a為0.970,r2為0.9895；CA242斜率a為0.9683,r2為0.9971,各稀釋度的檢測結(jié)果與理論值密切相關(guān)（r2＞0.950）,CA50濃度在19.43～131.55 U/mL、CA242 濃度在 15.86～191.25 U/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

圖1 CA50、CA242線性回歸曲線

3 討 論

為了保證臨床實驗室檢驗質(zhì)量,根據(jù)美國病理學(xué)家協(xié)會（CAP）對臨床實驗室質(zhì)量管理的要求[10]和臨床實驗室認可的要求[11],臨床實驗室在新的檢驗方法、新的檢測儀器正式投入使用之前,必須用實驗評價檢測系統(tǒng)的基本性能,以確保檢測結(jié)果能夠真實準確反映患者病情,協(xié)助臨床診治[12]。CHEMCLIN 1500檢測系統(tǒng)采用全自動化學(xué)發(fā)光技術(shù)、封閉檢測系統(tǒng),使用配套試劑、標準品及質(zhì)控品,但是由于各個實驗室在實驗環(huán)境、電壓穩(wěn)定性、工作人員素質(zhì)等方面存在差異,臨床實驗室需要根據(jù)自身條件對儀器檢測系統(tǒng)進行基本的性能驗證。美國國會頒布臨床實驗室修正案（CLIA′88）指出,臨床實驗室可以只對最重要的性能評價指標進行驗證,即精密度、準確度和線性范圍[13]。本實驗室在開展CA50、CA242檢測前,對廠家提供的主要分析性能進行了驗證。

精密度是多次重復(fù)測量同一量時各測量值之間彼此符合的程度,表示測量過程中隨機誤差的大小,是檢測系統(tǒng)重要的分析性能之一。參照NCCLS EP5-A2文件中評價定量測定方法和儀器精密度性能的要求,我們進行了一系列實驗。結(jié)果顯示,通過對低高兩個水平質(zhì)控品的檢測,CHEMCLIN 1500檢測系統(tǒng)檢測CA50批內(nèi)精密度CV分別為3.97%和2.86%,批間精密度CV分別為6.21%和3.05%；CA242批內(nèi)精密度CV分別為2.12%和1.38%,批間精密度CV分別為10.79%和8.38%。CA50、CA242批內(nèi)和批間精密度均低于廠家說明書相應(yīng)檢測性能聲明,表明CA50、CA242檢測結(jié)果能夠滿足實驗室的要求。

正確度表示測得值與真值之間的符合程度,正確度高,表明測定結(jié)果越接近真實值。在NCCLS EP9-A文件中,正確度驗證方法是使用臨床患者樣本進行方法學(xué)比較和偏倚估計,這種方法需要對照,對于實驗室新開展的檢測項目來說存在一定的困難。因此,本次實驗在進行CA50、CA242正確度評價時,參照NCCLS EP15-A文件的評價方案,采取使用有定值的參考物質(zhì)計算偏倚的方法進行檢測系統(tǒng)的正確度評價,判斷是否與廠家聲明的性能一致。實驗中分別連續(xù)重復(fù)測定廠商提供CA50和CA242校準品10次,結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)CA50和CA242檢測均值與標準品定值的相對偏倚均小于5.0%,偏倚水平低于廠家說明書的偏倚允許范圍,符合要求,說明本檢測系統(tǒng)對CA50和CA242濃度檢測的正確度高。

檢出限是指可以從樣本中檢測待測物質(zhì)的最小濃度。與精密度、正確度一樣,檢出限也是評價方法和儀器性能的重要指標之一,可以對檢測系統(tǒng)在低濃度水平的檢測能力進行評估。本實驗結(jié)果顯示,CHEMCLIN 1500分析系統(tǒng)CA50、CA242最低檢出限分別是0.68 U/mL、0.56 U/mL,表明該檢測系統(tǒng)有較好的靈敏度,為臨床檢測結(jié)果的解釋提供了一定的依據(jù)。

線性范圍即分析測量范圍,指定量檢測項目的線性檢測范圍,是檢測系統(tǒng)最終的輸出濃度與被測物濃度是否呈線性的性能。線性范圍的測量即測定濃度曲線接近直線的程度,反映整個檢測系統(tǒng)的輸出特性,有助于了解檢測結(jié)果的準確性和可靠性,是一項重要的儀器性能指標。根據(jù)NCCLS EP6-A文件,本次實驗采用6個系列濃度血清進行線性驗證。實驗顯示,該檢測系統(tǒng)CA50濃度在19.43～131.55 U/mL、CA242濃度在 15.86～191.25 U/mL 范圍內(nèi)線性良好,相關(guān)性好,符合臨床檢測要求。

CHEMCLIN 1500全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是科美公司最新研發(fā)生產(chǎn)的臨床檢測儀器,實行全自動操作,標準化程度高,大大降低人為因素的影響。通過本次實驗,發(fā)現(xiàn)CHEMCLIN 1500全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測CA50、CA242的精密度、準確度、檢出限、線性范圍與廠家聲稱值一致。CHEMCLIN 1500檢測系統(tǒng)具有精密度好、正確度高、良好的線性等優(yōu)點,能夠滿足臨床檢測的性能要求。