陶 春，楊慧丹,，黃愛文，陳珍珍,，張 倩，宋洪濤

(1.福建醫(yī)科大學(xué)?？偱R床醫(yī)學(xué)院(福州總醫(yī)院)藥學(xué)科，福建 福州 350025；2.福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350108)

痤瘡是一好發(fā)于面部、嚴(yán)重者可累及胸背部的毛囊皮脂腺慢性炎癥性疾病，多發(fā)于青少年，成人也有發(fā)生。其發(fā)病機(jī)制眾多，主要包括雄性激素分泌過多、皮脂成分改變、毛囊皮脂腺導(dǎo)管堵塞、細(xì)菌感染、炎癥因子誘發(fā)炎癥反應(yīng)、遺傳因素、飲食、環(huán)境(溫度、濕度、污染等)、生活方式等，且各種致病因素之間可發(fā)生相互影響，增加了痤瘡的治療難度[1-6]。

根據(jù)中國(guó)痤瘡治療指南，外用維A酸類藥物是治療輕度痤瘡的一線用藥，也是中度痤瘡聯(lián)合用藥的首選藥物。阿達(dá)帕林是第三代維A酸類藥物，普遍用于輕-中度痤瘡的治療，可調(diào)節(jié)組織細(xì)胞的分化，防止毛囊上皮細(xì)胞過度角化，同時(shí)，通過下調(diào)鳥氨酸脫羧酶的活性，抑制皮脂腺細(xì)胞增生及皮脂過度分泌，具有明確的抗炎作用[7]。

另外，莫匹羅星是一種新型的局部外用抗生素，是熒光假單胞菌的代謝產(chǎn)物，可用于耐藥金黃色葡萄球菌等細(xì)菌感染的治療。莫匹羅星具有耐藥率低且無交叉耐藥的優(yōu)勢(shì)[8-10]，原因在于莫匹羅星可與異亮氨酸的RNA合成酶特異性結(jié)合，從而阻斷合成蛋白質(zhì)所需的異亮氨酸，發(fā)揮抗菌作用[11]。

目前，上述兩種藥物的市售產(chǎn)品主要是阿達(dá)帕林凝膠和莫匹羅星軟膏，均為單方制劑，兩者交替使用較為不便，患者用藥依從性差。若將這兩種藥物制成復(fù)方制劑，可使患者用藥更加方便。因此，本研究擬制備阿達(dá)帕林和莫匹羅星的復(fù)方軟膏，并對(duì)藥物的穩(wěn)定性進(jìn)行考察和優(yōu)化。

1 試劑與儀器

阿達(dá)帕林對(duì)照品、莫匹羅星對(duì)照品、糠酸莫米松對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院)；阿達(dá)帕林原料藥(武漢東康源科技有限公司)，莫匹羅星原料藥(孝感深淵化工有限公司)；聚乙二醇400、聚乙二醇3350(中國(guó)醫(yī)藥對(duì)外貿(mào)易公司)，三乙醇胺(北京慧立達(dá)化工有限公司)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

高效液相色譜儀(Agilent1200，美國(guó)Agilent公司)，穩(wěn)定性試驗(yàn)箱(SHH-SDT，重慶永生實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC含量測(cè)定方法

色譜柱為Intersil ODS-3(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，柱溫為30℃，流速為1 ml/min，進(jìn)樣量為10 μl。兩種藥物分別測(cè)定：阿達(dá)帕林的流動(dòng)相為0.1%磷酸-乙腈(10∶90)，檢測(cè)波長(zhǎng)為321 nm；莫匹羅星的流動(dòng)相為0.1%磷酸-乙腈(62∶38)，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

專屬性考察發(fā)現(xiàn)，阿達(dá)帕林和莫匹羅星峰形良好，對(duì)照品與供試品的保留時(shí)間基本一致，在陰性對(duì)照溶液的色譜圖上，藥物出峰相應(yīng)位置未見色譜峰(圖1)。

以濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。阿達(dá)帕林的回歸方程為A=3 171C-1.548，r=0.999 9，在0.044 8～0.896 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。莫匹羅星的回歸方程為A=14 446C-0.053，r=0.999 9，在0.010 8～0.432 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。精密度的RSD<2%，且低、中、高濃度的平均回收率在95%～105%范圍內(nèi)，RSD<2%，表明精密度、回收率符合要求。

圖1 專屬性考察HPLC圖 A.阿達(dá)帕林對(duì)照品溶液；B.阿達(dá)帕林供試品溶液；C.阿達(dá)帕林陰性溶液；D.莫匹羅星對(duì)照品溶液；E.莫匹羅星供試品溶液；F.莫匹羅星陰性溶液；1.阿達(dá)帕林；2.莫匹羅星

2.2 原料藥考察

2.2.1溶解度

取過量的阿達(dá)帕林和莫匹羅星原料藥，分別加入水、磷酸鹽緩沖液(PBS，pH4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、無水乙醇、1,2-丙二醇及PEG400中，制成過飽和溶液，于37℃、100 r/min恒溫水浴搖床中振搖48 h后，將樣品以10 000 r/min離心20 min，上清液經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣，HPLC測(cè)定其中的藥物含量，并計(jì)算相應(yīng)的溶解度，結(jié)果如表1所示。

阿達(dá)帕林在水和不同pH PBS中未測(cè)得藥物，在無水乙醇和1,2-丙二醇中的溶解度也較小，不足1 mg/ml，在PEG400中溶解度最高，為(4.30±0.05)mg/ml。莫匹羅星在水中的溶解度較小，但伴隨pH增大，溶解度逐漸提高，在無水乙醇、1,2-丙二醇和PEG400中的溶解度顯著改善。

表1 不同介質(zhì)中阿達(dá)帕林和莫匹羅星的溶解度(mg/ml)

2.2.2pH穩(wěn)定性

取阿達(dá)帕林和莫匹羅星溶于PEG400溶液中，調(diào)節(jié)pH為4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0，在60℃條件下放置10 d，于0、5、10 d時(shí)取樣，HPLC測(cè)定藥物含量，并以0 d時(shí)的含量為100%計(jì)算。由圖2可見，在pH4.0～7.0范圍內(nèi)，放置時(shí)間越長(zhǎng)，阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量降低越顯著，而在pH7.0～8.0范圍內(nèi)，兩種藥物均保持了較高的含量。具體來說，在10 d時(shí)，莫匹羅星的含量隨pH的增大呈升高趨勢(shì)，且在pH7.5時(shí)達(dá)到最大值，為(97.56±0.56)%。對(duì)阿達(dá)帕林，當(dāng)pH<7時(shí)，含量變化不明顯，10 d時(shí)的含量均低于60%。pH7.5時(shí)，阿達(dá)帕林含量迅速增加，并達(dá)到最大值，為(99.20±0.56)%。

圖2 60℃條件下阿達(dá)帕林和莫匹羅星在PEG400溶液中的穩(wěn)定性 A.5 d；B.10 d

2.2.3影響因素試驗(yàn)

取阿達(dá)帕林、莫匹羅星或兩者的混合物(阿達(dá)帕林∶莫匹羅星=1∶20)置于潔凈的表面皿中，放入穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，分別在高溫(60℃)、高濕(相對(duì)濕度90%±5%)和強(qiáng)光照射試驗(yàn)(4 500 lx±500 lx)條件下放置10 d，于0、5、10 d時(shí)取樣，HPLC法測(cè)定藥物含量，并以0 d時(shí)的含量為100%計(jì)算。

60℃條件下，阿達(dá)帕林在5、10 d的含量分別為(98.11±1.27)%和(97.02±0.76)%，穩(wěn)定性良好(圖3A)。相同條件下，混合原料藥中阿達(dá)帕林仍保持了較高的藥物含量，均在95%以上。而莫匹羅星單獨(dú)放置或在混合原料藥中，其含量均顯著降低，5 d時(shí)樣品中莫匹羅星含量少于1%。

在高濕和強(qiáng)光照射條件下(圖3B、圖3C)，阿達(dá)帕林與莫匹羅星單獨(dú)或混合后放置，10 d時(shí)的含量均在97%以上，表明藥物在高濕和強(qiáng)光照射條件下穩(wěn)定性良好。

2.3 軟膏的制備與優(yōu)化

2.3.1軟膏的制備

阿達(dá)帕林和莫匹羅星在PEG400溶液中均有相對(duì)較高的溶解度，因此參考市售莫匹羅星軟膏(百多邦)的處方，采用PEG3350和PEG400為基質(zhì)制備軟膏。根據(jù)市售制劑的藥物劑量，確定阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量分別為0.1%和2%。

稱取PEG400，加入阿達(dá)帕林和莫匹羅星，40℃加熱至溶解，再加至已在70℃條件下熔化的PEG3350中，在40℃水浴條件下攪拌10 min，冷卻后即得。調(diào)整PEG400∶PEG3350為2∶1、3∶2、1∶1制備軟膏，觀察其外觀和涂展性能。所得軟膏呈白色，PEG400∶PEG3350為1∶1時(shí)，軟膏黏度較大，不易涂抹；而兩者比例為3∶1時(shí)，軟膏過??；當(dāng)比例為2∶1時(shí)，軟膏黏度適宜，易于涂抹，因此確定該比例用于軟膏的制備。

2.3.2軟膏的高溫穩(wěn)定性

以PEG400∶PEG3350=2∶1，阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量分別為0.1%和2%制備軟膏，并在穩(wěn)定性試驗(yàn)箱(60℃)中放置10 d，于0、5、10 d時(shí)取樣，HPLC法測(cè)定藥物含量。高溫穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，軟膏中的藥物含量均有顯著降低，5 d時(shí)阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量分別為(57.87±1.53)%和(97.10±0.31)%，10 d時(shí)分別為(9.33±2.87)%和(7.97±1.19)%。

2.3.3軟膏的pH調(diào)節(jié)

取含0.1%阿達(dá)帕林和2%莫匹羅星的PEG400溶液，測(cè)定pH，結(jié)果顯示PEG400的pH值為7.17，而含藥PEG400的pH明顯降低，pH值為6.32。因此，在原料藥pH穩(wěn)定性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，在軟膏中加入0.1%、0.2%和0.3%的三乙醇胺以調(diào)節(jié)pH，測(cè)定后發(fā)現(xiàn)pH值依次為(7.00±0.04)、(7.31±0.05)和(7.51±0.07)。

圖3 不同條件下阿達(dá)帕林和莫匹羅星原料藥的穩(wěn)定性 A.高溫(60℃)；B.高濕(相對(duì)濕度90%±5%)；C.強(qiáng)光照射(4 500 lx±500 lx)

將上述藥物溶液于60℃放置10 d，于0、5、10 d時(shí)取樣，HPLC法測(cè)定藥物含量，并以0 d時(shí)的含量為100%計(jì)算。結(jié)果如圖4所示，加入三乙醇胺后，阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量顯著提高。3種比例的三乙醇胺中，0.2%的三乙醇胺對(duì)阿達(dá)帕林和莫匹羅星的穩(wěn)定性有最佳的促進(jìn)作用，10 d時(shí)的含量均達(dá)到96%以上，與市售制劑接近。因此，確定在處方中加入0.2%的三乙醇胺。

圖4 60℃條件下含三乙醇胺的阿達(dá)帕林和莫匹羅星在PEG400溶液中的穩(wěn)定性 A.阿達(dá)帕林；B.莫匹羅星

2.4 優(yōu)選軟膏的穩(wěn)定性考察

2.4.1影響因素試驗(yàn)

制備3批含0.2%三乙醇胺的復(fù)方阿達(dá)帕林軟膏置于穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中，分別進(jìn)行高溫(60℃)、高濕(相對(duì)濕度90%±5%)和強(qiáng)光照射試驗(yàn)(4 500 lx±500 lx)，于0、5、10 d取樣進(jìn)行檢測(cè)，并以0 d時(shí)的含量為100%計(jì)算。如圖5所示，10 d時(shí)在高溫、高濕、強(qiáng)光照射下，軟膏中阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量均大于97%，表明軟膏中的藥物具有良好的穩(wěn)定性。

2.4.2加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)

制備3批含0.2%三乙醇胺的復(fù)方阿達(dá)帕林軟膏，裝入鋁塑管中，置穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中進(jìn)行加速試驗(yàn)，溫度為(30±2)℃，相對(duì)濕度為(65±5)%以及長(zhǎng)期試驗(yàn)，溫度為(25±2)℃，相對(duì)濕度為(60±10)%，放置6個(gè)月，定時(shí)取樣觀察軟膏外觀，同時(shí)測(cè)定阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量。在試驗(yàn)期間，軟膏顏色(白色)無變化，無酸敗、異臭、脹氣。如表2、表3所示，6個(gè)月內(nèi)，阿達(dá)帕林和莫匹羅星的含量均在95%以上。長(zhǎng)期試驗(yàn)仍在進(jìn)行中。

圖5 不同條件下含0.2%三乙醇胺復(fù)方阿達(dá)帕林軟膏中的藥物穩(wěn)定性 A.阿達(dá)帕林；B.莫匹羅星

批次時(shí)間(t/mon)阿達(dá)帕林含量(%)莫匹羅星含量(%)10100100199.78±1.7599.40±1.16299.38±0.5198.11±1.05399.23±0.9197.38±0.28696.96±0.5896.09±1.6920100100199.80±0.4899.47±0.75298.80±0.4698.21±0.61398.88±0.5497.56±0.92695.95±0.1696.05±1.2430100100198.23±0.8698.56±0.05298.04±1.3998.84±1.32397.02±1.4398.13±0.81695.19±0.6396.62±0.64

表3 復(fù)方阿達(dá)帕林軟膏長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本研究制備了阿達(dá)帕林和莫匹羅星的復(fù)方軟膏，提供一種用于輕-中度痤瘡治療的復(fù)方制劑，旨在解決單方制劑使用不便的問題。

莫匹羅星和阿達(dá)帕林的市售劑型分別為軟膏和凝膠。其中，市售莫匹羅星軟膏含莫匹羅星、PEG400和PEG3350，市售阿達(dá)帕林凝膠含阿達(dá)帕林、卡波姆、泊洛沙姆、乙二胺四乙酸二鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、丙二醇、氫氧化鈉和水等?？梢娨訮EG為基質(zhì)的軟膏成分簡(jiǎn)單，而凝膠成分復(fù)雜。另外，阿達(dá)帕林和莫匹羅星在PEG400溶液中均有相對(duì)良好的溶解度(表1)，因此本研究以PEG400和PEG3350為基質(zhì)進(jìn)行復(fù)方軟膏的制備。

研究發(fā)現(xiàn)，在高溫下軟膏中的兩種藥物含量快速降低，主要原因是受pH的影響。在酸性條件下，阿達(dá)帕林中的金剛烷基發(fā)生斷裂，導(dǎo)致藥物分解[12]。同時(shí)，莫匹羅星中的環(huán)氧乙烷基團(tuán)也易在酸性條件下發(fā)生開環(huán)而使藥物含量降低[13]。因此，本研究通過加入三乙醇胺調(diào)節(jié)pH，有效改善了軟膏中的藥物穩(wěn)定性。但筆者尚未開展軟膏的經(jīng)皮滲透研究，后期將考察處方中是否需要加入促滲劑。