李丹宇 周黎明

(四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，四川 成都 610041)

惡性腫瘤已成為全球僅次于心血管疾病的死亡原因，據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)研究估計(jì)，2018年，全球范圍內(nèi)將會(huì)有1810萬(wàn)癌癥新發(fā)病例和960萬(wàn)癌癥死亡病例。對(duì)于整體人群來(lái)講，肺癌是最常見(jiàn)的癌癥類(lèi)型(占整體的11.6%)，也是癌癥死亡的主要原因(占癌癥總死亡數(shù)的18.4%)[1]。其中，根據(jù)我國(guó)2014年登記數(shù)據(jù)，全國(guó)惡性腫瘤新發(fā)病例數(shù)380.4萬(wàn)例，死亡病例229.6萬(wàn)例。臨床上，部分患者癌癥在發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，其成為患者死亡的主要原因。肺是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移最高發(fā)的器官，全身組織器官的腫瘤基本都可以通過(guò)血行播散、淋巴道轉(zhuǎn)移或鄰近器官直接侵犯轉(zhuǎn)移到肺。由于目前腫瘤轉(zhuǎn)移確切機(jī)制尚不明確，針對(duì)其有效靶向防治手段的缺失，故建立理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，成為研究肺轉(zhuǎn)移瘤分子機(jī)制、防治方法等的重要部分。本文對(duì)現(xiàn)有的腫瘤肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型進(jìn)行綜述，從建模方法、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系、肺轉(zhuǎn)移率等方面分析比較五種建模方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并對(duì)其最新應(yīng)用進(jìn)行概述。

1 尾靜脈注射法

尾靜脈注射法即將腫瘤細(xì)胞懸液通過(guò)尾靜脈直接注入小鼠體內(nèi)，其為目前應(yīng)用最廣泛的建模方法。

1.1 乳腺癌

在對(duì)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移進(jìn)行研究時(shí)，給C3H小鼠(4～5周齡)尾靜脈注射C3H小鼠非自發(fā)性乳腺癌細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為2*106個(gè)/只，d15開(kāi)始，模型組小鼠的體重開(kāi)始呈下降趨勢(shì)，d30模型組小鼠未見(jiàn)死亡，肺轉(zhuǎn)移率87.5%，肉眼可見(jiàn)肺部清晰轉(zhuǎn)移灶[2,3]。龔宏霞[4]等用Balb/c裸鼠(雌性，6周齡)建模，同樣有較高肺轉(zhuǎn)移率(100%)。將小鼠乳腺癌4T1-luc細(xì)胞懸液1*105個(gè)/只，尾靜脈注入，21d后肺組織包埋切片，病理組織學(xué)診斷為浸潤(rùn)性癌。曹讓娟[5]等用SCID小鼠(雌性，4～6周齡)建模。因人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株形成的肺轉(zhuǎn)移為肺部彌散性浸潤(rùn)難以量化評(píng)價(jià)，故用其穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的細(xì)胞系：MDA-MB-231-GFP。以細(xì)胞數(shù)1.5*106個(gè)/只，將細(xì)胞懸液尾靜脈注入小鼠體內(nèi)。5周后，肺部的轉(zhuǎn)移灶在488 nm 激發(fā)光波長(zhǎng)下呈現(xiàn)綠色, 表明自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型成功建立。

1.2 肝癌

對(duì)于肝癌肺轉(zhuǎn)移模型，將小鼠肝癌H22細(xì)胞懸液1*106個(gè)/只，尾靜脈注入Balb/c小鼠(雄性，5～6周齡)。14d后小鼠存活率100%，肺轉(zhuǎn)移率100%，腫瘤轉(zhuǎn)移灶直徑在220μm左右，全肺平均轉(zhuǎn)移灶數(shù)為23個(gè)[6]。Ogawa[7]等用KSN裸鼠(雌性，8～10周齡)建模，他們分離出N1、L2、C2、C6、C1、C5F，6種小鼠肝癌細(xì)胞分別建模進(jìn)行優(yōu)劣對(duì)比，尾靜脈注射細(xì)胞懸液細(xì)胞量為1*106個(gè)/只，5～6周處死。其中N1細(xì)胞(100%，肺轉(zhuǎn)移灶48.8±43.7個(gè)/cm2)、L2細(xì)胞(100%，肺轉(zhuǎn)移灶15.3±4.0個(gè)/cm2)造模成功率最高，C2細(xì)胞(67%，肺轉(zhuǎn)移灶4.7±5.5個(gè)/cm2)、C6細(xì)胞(25%，肺轉(zhuǎn)移灶1.6±2.9個(gè)/cm2)次之，C1細(xì)胞、C5F細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移率為0。

1.3 黑色素瘤

李佳悅[8]等選用C57BL/6(6～7周齡，黑色)、KM(6～7周齡，白色)兩種品系的小鼠進(jìn)行小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移建模。分別給兩種小鼠尾靜脈注射小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞懸液1*106個(gè)/只。C57BL/6小鼠，12d出現(xiàn)死亡，15 d全部死亡，肺部結(jié)節(jié)直徑約0.3～3 mm，肺的顏色近乎黑。KM小鼠，22 d出現(xiàn)死亡，25 d全部死亡，局部瘤結(jié)節(jié)連接成線或密集成片。肺左葉上凸起直徑5mm的黑色腫瘤。B16細(xì)胞株在兩種小鼠均能穩(wěn)定建模，KM小鼠荷瘤時(shí)間更長(zhǎng)，顏色對(duì)于黑色素瘤的觀察更有利。孟星君[9]等也選用C57BL/6品系(6～8周齡)的小鼠選用不同量B16F10細(xì)胞懸液，通過(guò)腹腔注射、尾靜脈注射、皮下注射三種方式，飼養(yǎng)不同時(shí)間進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，尾靜脈注射實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移率可達(dá)100%，而腹腔注射及皮下注射的實(shí)驗(yàn)組未發(fā)生肺轉(zhuǎn)移。其中當(dāng)細(xì)胞量為1*106個(gè)/只。

1.4 涎腺腺樣囊性癌

涎腺腺樣囊性癌是發(fā)生于涎腺的一種非常常見(jiàn)的惡性腫瘤,其重要特質(zhì)是嗜神經(jīng)侵襲。關(guān)曉峰[10]等用Balb/c裸鼠(雄性，3周齡)建立人涎腺腺樣囊性癌肺轉(zhuǎn)移模型。將人涎腺腺樣囊性癌ACC-M細(xì)胞懸液1*106個(gè)/只尾靜脈注入裸鼠體內(nèi)，接種后3周內(nèi)，腫瘤細(xì)胞夾破血管，在肺間質(zhì)內(nèi)形成微小轉(zhuǎn)移瘤。接種后4 周肉眼可見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶。肉眼見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶呈灰白色，半球狀?？晌挥诜文は?，亦可位于肺實(shí)質(zhì)內(nèi)。

由于操作方便、肺轉(zhuǎn)移率高(85%～100%)，近幾年基于尾靜脈注射法建模，腫瘤肺轉(zhuǎn)移的防治方法的相關(guān)研究有了許多新突破。

2 皮下注射法

皮下注射法即將腫瘤細(xì)胞懸液注入小鼠背部皮下或腋下，臨床上多用于肝素鈉皮下注射抗凝。此法雖操作方便簡(jiǎn)單，但原位癌成瘤率低，故造模限制較多。

2.1 乳腺癌

在建造乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型時(shí)，以皮下注射法建立自發(fā)性轉(zhuǎn)移模型。Balb/c裸鼠于左前肢腋下接種1.5*106個(gè)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞，8w后，肺部的轉(zhuǎn)移灶在488nm激發(fā)光波長(zhǎng)下呈現(xiàn)綠色，說(shuō)明造模成功[5]。

2.2 黑色素瘤

選用C57BL/6品系(6～8周齡)的小鼠，通過(guò)皮下注射進(jìn)行黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移建模實(shí)驗(yàn)時(shí)，注入大量(3*106個(gè)/只)小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞懸液，肺轉(zhuǎn)移率仍為0[9]。

2.3 肝癌

對(duì)于肝癌肺轉(zhuǎn)移模型，Ogawa[7]等有一些新的發(fā)現(xiàn)。他們分離出的N1、L2、C2、C6、C1、C5F，6種小鼠肝癌細(xì)胞大量(5*106個(gè)/只)皮下注射法建模與尾靜脈注射法建模相比，各個(gè)細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移率及肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目都有了變化。首先，C1細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率67%，肺轉(zhuǎn)移灶17.5±27.7個(gè)/cm2)、C5F細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率89%，肺轉(zhuǎn)移灶46.1±56.5個(gè)/cm2)通過(guò)皮下注射法都成功建模，并且有不低的肺轉(zhuǎn)移率。其次，N1細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率64%，肺轉(zhuǎn)移灶4.2±5.9個(gè)/cm2)、L2細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率20%，肺轉(zhuǎn)移灶1.0±2.3個(gè)/cm2)肺轉(zhuǎn)移率明顯降低。最后，對(duì)比尾靜脈注射法，C2細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率33%，肺轉(zhuǎn)移灶0.5±0.9個(gè)/cm2)肺轉(zhuǎn)移率有所下降，但C6細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率50%，肺轉(zhuǎn)移灶1.4±2.2個(gè)/cm2)提高。

2.4 鼻咽癌

鼻咽癌是一種非常常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病快、病程短，研究其肺轉(zhuǎn)移模型也有一定的意義。選用BALB/c-nu 裸鼠(雌性，4～6周齡)，皮下注射人鼻咽癌SUNE-1細(xì)胞2*106個(gè)/只，成瘤時(shí)間約10天，瘤重約2.2g，肺轉(zhuǎn)移率70%，每只肺轉(zhuǎn)移灶約45個(gè)[13]。

3 原位注射法

原位注射法即將腫瘤細(xì)胞懸液注入小鼠原發(fā)部位。例如將小鼠麻醉后，切開(kāi)右側(cè)胸壁皮膚1cm，暴露第2對(duì)乳腺脂肪墊, 向其中注入細(xì)胞懸液[16]。此法雖操作困難，但由于腫瘤細(xì)胞能從原發(fā)癌灶侵入血循環(huán)到達(dá)肺組織，故許多研究選擇此法進(jìn)行腫瘤肺轉(zhuǎn)移模型建模。

3.1 腎癌

腎癌無(wú)明顯臨床癥狀，多數(shù)患者就診時(shí)已發(fā)生腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，肺為最常見(jiàn)轉(zhuǎn)移部位。Balb/c裸鼠(4～5周齡)為常選擇的建模動(dòng)物。曾四平[17]等在裸鼠麻醉后，右側(cè)腰背部縱切口, 裸露右側(cè)腎包膜及腎臟, 將人腎癌SN12-PM6細(xì)胞懸液1*106個(gè)/只，種入裸鼠右腎實(shí)質(zhì)。5周后肺轉(zhuǎn)移率50%，7周轉(zhuǎn)移率達(dá)到100%，但肺大體形態(tài)未見(jiàn)明顯改變，顯微鏡下可見(jiàn)肺部為轉(zhuǎn)移灶，與腎臟移植瘤細(xì)胞形態(tài)一致。將人腎癌RCC-949細(xì)胞懸液1*106個(gè)/只，注入裸鼠左側(cè)腎包膜內(nèi)，成瘤率40%，肺臟無(wú)轉(zhuǎn)移[18]。

3.2 骨肉瘤

骨肉瘤為死亡率和致殘率很高的原發(fā)性惡性骨腫瘤，初期癥狀不明顯，但晚期多會(huì)發(fā)生擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。建立具有人類(lèi)骨肉瘤特性的動(dòng)物模型，是研究和防治其的基礎(chǔ)。骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移模型多采用后肢脛骨結(jié)節(jié)處穿刺至骨髓腔注射細(xì)胞懸液的方法。選用SD大鼠(3周齡)骨髓腔注射大鼠骨肉瘤UMR106細(xì)胞2*106個(gè)/只。轉(zhuǎn)移率100%，成瘤時(shí)間約10d，瘤灶多呈栗粒樣遍布雙肺，小而密集[19]。姜珍[20]將人骨肉瘤MG63(1.5*106個(gè)/只)、HOS(2*106個(gè)/只)細(xì)胞懸液骨髓腔注入BALB/c-nu/nu 裸鼠(3～5周齡)。MG63細(xì)胞6周原位成瘤率為 100%，且肺轉(zhuǎn)移率100%。HOS細(xì)胞組未出現(xiàn)原位瘤及肺轉(zhuǎn)移。

3.3 結(jié)直腸癌

近年來(lái),隨著我國(guó)居民飲食結(jié)構(gòu)及飲食習(xí)慣改變 ,我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢(shì)。結(jié)直腸癌患者中10%～15%會(huì)出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移。選用BALB/c裸鼠(5周齡)，建造結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移模型。裸鼠被麻醉后，從右下腹開(kāi)腹，使盲腸完全暴露于腹腔外，將2*106個(gè)/只人結(jié)直腸癌HCT116-luc細(xì)胞注入盲腸壁的黏膜與基層間，30d后，成瘤率58.33%，肺轉(zhuǎn)移率65.71%[21]。

3.4 乳腺癌

乳墊注射是乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型建模時(shí)常選擇的建模方法。將人乳腺癌MDA-MB-435s細(xì)胞懸液2*105個(gè)/只，注射入SCID小鼠(雌性，16～20周齡)右側(cè)第二對(duì)脂肪墊內(nèi)。17周后小鼠存活率約為50%，轉(zhuǎn)移率100%，每只小鼠約有1～3個(gè)肺轉(zhuǎn)移灶, 直徑1～2mm[16]。Paschall[22]等選用Balb/c小鼠造模，他們同樣選擇給小鼠一側(cè)乳墊注射少量小鼠乳腺癌4T1-lu細(xì)胞懸液(1*104個(gè)/只)，30 d后，肺轉(zhuǎn)移率達(dá)100%。他們還提出一種準(zhǔn)確計(jì)算肺結(jié)節(jié)的方法：將荷瘤小鼠的肺用印度墨水填充膨脹，固定在費(fèi)克特溶液中，肺上的白點(diǎn)即為轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。

3.5 肝癌

異種移植肝癌轉(zhuǎn)移模型，即人肝癌種植于動(dòng)物體內(nèi)，觀察人肝癌在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的過(guò)程。我國(guó)建立了較多的人肝癌裸鼠模型，Tian J[23]等選用BALB/c-nu-nu裸鼠，肝內(nèi)接種人肝癌MHCC97細(xì)胞懸液>1*106個(gè)/只，接種35d后肺轉(zhuǎn)移率100%。Ogawa[7]等給 KSN裸鼠(雌性，8～10周齡)肝臟注射1*106個(gè)/只六種小鼠肝癌細(xì)胞懸液后(N1、L2、C2、C6、C1、C5F)，自然死亡或5周處死后，只有C6細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率50%，肺轉(zhuǎn)移灶1.2±1.7個(gè)/cm2)和C5F細(xì)胞(肺轉(zhuǎn)移率25%，肺轉(zhuǎn)移灶8.5±11.9個(gè)/cm2)造模成功。

原位注射法能很好的模擬人癌癥的轉(zhuǎn)移過(guò)程，故較多研究選擇此法建模。Suoyuan Li[24]等用Balb/c裸鼠骨髓腔內(nèi)注射細(xì)胞懸液，建立骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移模型，研究納米凝膠(STP-NG)增強(qiáng)紫草素(SHK)的細(xì)胞內(nèi)傳遞，用于發(fā)揮抗肺轉(zhuǎn)移的作用。研究發(fā)現(xiàn)STP-NG/SHK能有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，降低肺轉(zhuǎn)移。Hong Zhang[25]等在乳墊注射細(xì)胞懸液，以Balb/c小鼠建模，研究發(fā)現(xiàn)奇異變形桿菌可以有效抑制體內(nèi)自發(fā)性乳腺癌肺轉(zhuǎn)移，并且其安全性也同時(shí)得到驗(yàn)證。但此法也有操作困難、成瘤率及轉(zhuǎn)移率低、周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)限制其應(yīng)用。

4 組織原位移植法

應(yīng)用組織原位移植法建造肺轉(zhuǎn)移模型，即取肺部轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)，按常規(guī)制成2mm3小塊，移植于同系小鼠原發(fā)部位。與原位注射法相比，組織移植法成瘤時(shí)間更短，成瘤率更高，肺轉(zhuǎn)移率更高。

4.1 乳腺癌

孫慧[26]等建立乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型，取TA2小鼠自發(fā)肺部轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)，制成2mm3小塊，移植于同系(8周齡)小鼠左側(cè)下腹乳腺區(qū)域，每只2塊。移植成活率100%，潛伏期平均4.78±0.49d，小鼠平均存活約57.71±13.83d，自發(fā)肺轉(zhuǎn)移率約55.84%

4.2 肝癌

Quan Rao[27]等選擇C57BL/6野生型小鼠(6～8w齡)及Balb/c裸鼠(6～8w齡)，分別建模進(jìn)行比較。其取下皮下瘤后，從腫瘤中取出組織，切成1mm3碎片，植入小鼠肝左葉。C57BL6小鼠植入3～7周，局部生長(zhǎng)、局部浸潤(rùn)和肝臟自發(fā)轉(zhuǎn)移更加明顯，肺轉(zhuǎn)移率25%。裸鼠成瘤率88%，未發(fā)生肺轉(zhuǎn)移。這提示不同遺傳背景的受體小鼠可能會(huì)影響腫瘤的形成。

4.3 腎癌

張玉俠[18]等對(duì)比了用原位注射法及組織移植法建立腎癌肺轉(zhuǎn)移模型。他們選取生長(zhǎng)旺盛的皮下瘤組織, 剪成直徑約0.5 mm3的瘤塊, 將適量腫瘤組織移植于Balb/c裸鼠(4～5w齡)的腎包膜下。此法成瘤率為75%，肺轉(zhuǎn)移率為53.3%不論成瘤率還是轉(zhuǎn)移率，均高于原位注射法。

4.4 前列腺癌

外科原位移植技術(shù)建立的前列腺癌模型, 可以較好地保留了腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)習(xí)性。王元天[28]等建立人類(lèi)前列腺癌裸鼠原位腫瘤模型，其選擇Balb/c裸鼠(4～6w齡，雄性)，下腹切口，牽開(kāi)膀胱和精囊, 剪開(kāi)前列腺背側(cè)葉1 mm，將PC-3腫瘤組織塊放入被膜下。9～12w，該模型成瘤率90%，肺轉(zhuǎn)移率22.2%。肺轉(zhuǎn)移的大體標(biāo)本可見(jiàn)肺內(nèi)散在的腫瘤結(jié)節(jié), 鏡下可見(jiàn)小的癌巢。

此法建立模型原位癌成瘤率高，對(duì)周?chē)M織破壞強(qiáng)，但肺轉(zhuǎn)移率不高，且建模部位受限。故運(yùn)用此法時(shí)多有改良。Chen Y L[29]等采用生物膠糊技術(shù)原位移植構(gòu)建人胃癌轉(zhuǎn)移裸鼠模型。用胃癌SGC-7901細(xì)胞，構(gòu)建移植的胃癌組織塊，用OB生物膠貼在BALB/C裸鼠胃壁上。將此創(chuàng)新方法與傳統(tǒng)胃囊法進(jìn)行比較。此法原位移植成功率(100%)及肺轉(zhuǎn)移率(62.5%)更高。有效證實(shí)了此法更容易建立胃癌轉(zhuǎn)移模型，代表了臨床轉(zhuǎn)移過(guò)程。

5 PDX

PDX模型是一種將腫瘤患者的腫瘤組織移植至免疫缺陷型小鼠體內(nèi)，并使腫瘤組織在小鼠體內(nèi)生長(zhǎng)而構(gòu)建成的一種腫瘤模型。其建模方法為將10-20 mm3的患者來(lái)源的腫瘤組織碎塊移植到免疫缺陷小鼠皮下或體內(nèi)腫瘤原發(fā)部位，大多選擇NOD-SCID小鼠構(gòu)建模型。PDX模型建模時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)(2～16個(gè)月)，且原代移植成功率較低。但其移植的腫瘤組織并沒(méi)有經(jīng)過(guò)任何人工培養(yǎng),所以其生物學(xué)特性保持的更加完整,從而與臨床相似度更高,是現(xiàn)階段最理想的腫瘤動(dòng)物模型。

肖凱[30]等構(gòu)建了一種肺癌PDX標(biāo)準(zhǔn)化模型庫(kù)。其步驟大致如下：(1)將中國(guó)患者新鮮腫瘤組著標(biāo)本分為三個(gè)部分(a.快速液氮冷凍，用于提取DNA/RNA；b.福爾馬林固定，石蠟包埋，用于病理學(xué)檢查；c.無(wú)菌條件下切成10～20mm3腫瘤組織塊，通過(guò)套管針皮下植入到免疫缺陷小鼠)；(2)使用生長(zhǎng)因子輔助免疫缺陷小鼠腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)，待腫瘤長(zhǎng)至一定體積(500～1500 mm3)，對(duì)移植腫瘤進(jìn)行體內(nèi)傳代；(3)腫瘤組織病理學(xué)鑒定；(4)基因分子遺傳學(xué)鑒定。該法腫瘤體積與移植時(shí)間呈正比，第45d平均約為1000mm3。

為了預(yù)測(cè)肺癌有效的肝素化治療，Amit Katz[31]等構(gòu)建非小細(xì)胞肺癌(腺癌及鱗癌)PDX模型。手術(shù)樣本(3h內(nèi))切割為2～3mm小片，經(jīng)皮下植入小鼠側(cè)腹。觸診當(dāng)腫瘤直徑達(dá)到1～1.5cm，切除腫瘤，切割為2～3mm小片，重新植入二代小鼠皮下。10～20d后腫瘤可觸及。其中，建模成功率鱗癌(85%)顯著高于腺癌(37%)。

Fichtner[32]等研究發(fā)現(xiàn)，在靶向治療中，患者源性非小細(xì)胞肺癌異種移植模型可以作為預(yù)測(cè)性分層生物標(biāo)志物。其腫瘤組織標(biāo)本來(lái)源于非小細(xì)胞癌患者(鱗癌、腺癌及多表型癌)。手術(shù)腫瘤標(biāo)本切成3-4mm的碎片，根據(jù)患者性別選擇小鼠，在30分鐘內(nèi)移植于NOD-SCID小鼠皮下。觀察小鼠生長(zhǎng)情況，當(dāng)腫瘤體積達(dá)到1cm3時(shí)切除腫瘤，傳代至裸鼠。總移植率25%，其中腺癌占24%，鱗癌占48%，其余為多表型癌。此研究建立了廣泛的病人源性非小細(xì)胞肺癌異種移植物模型，為臨床前新藥測(cè)試提供了適當(dāng)模型。

對(duì)于肺癌患者來(lái)說(shuō)，最初化療方案的選擇至關(guān)重要。為了給患者提供有效的個(gè)性化治療，現(xiàn)需要可靠及可快速反應(yīng)的模型工具。Xin Dong[33]等建立了患者源性第一代非小細(xì)胞肺癌異種移植模型。將新鮮腫瘤組織切成1*3*3 mm3小塊，腎包膜移植于NOD-SCID小鼠(6～8周齡)，28d后分組用藥，8周后評(píng)估藥物作用，發(fā)現(xiàn)不同藥物應(yīng)答率有差別，總體移植成功率為90%。此模型適用于快速評(píng)估(6-8周)患者癌癥的藥物化學(xué)敏感性，有望應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌患者的個(gè)性化化療。

6 結(jié)語(yǔ)與展望

腫瘤肺轉(zhuǎn)移模型是進(jìn)行腫瘤科學(xué)研究的重要手段和平臺(tái)，根據(jù)腫瘤本身特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的建模方法，對(duì)腫瘤肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生特點(diǎn)、轉(zhuǎn)移機(jī)制、診斷及治療的研究具有十分重要的意義。對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移的研究以及抗轉(zhuǎn)移治療，可將模型建造與其他技術(shù)手段結(jié)合起來(lái)，為其研究創(chuàng)建更好的平臺(tái)。例如運(yùn)用活體成像技術(shù)來(lái)監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Masaki[34]等應(yīng)用熒光素酶標(biāo)記癌細(xì)胞，實(shí)時(shí)在體外及非手術(shù)條件下監(jiān)測(cè)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)試驗(yàn)方法的不足?；虻臋z測(cè)和篩選是研究轉(zhuǎn)移癌的機(jī)制必不可少的手段。Shi Zhongju[35]等分析骨肉瘤原發(fā)性腫瘤和肺轉(zhuǎn)移瘤中的高通量基因表達(dá)獲得了差異表達(dá)基因。建立蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，分析鑒定出2493個(gè)差異表達(dá)基因及骨肉瘤轉(zhuǎn)移十大核心基因，核心基因?qū)ο乱徊津?yàn)證骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移相關(guān)通路有重要意義。