李 梅

(浦城縣投資開發(fā)公司,福建 浦城 353400)

納他霉素是一種無臭、無味、低劑量且安全性高的食品防腐劑。既可以廣泛有效的抑制各種霉菌，酵母菌的生長(zhǎng)，又能抑制真菌毒素的產(chǎn)生，可廣泛用于食品防腐保鮮以及抗真菌治療[1-2]。

在納他霉素產(chǎn)生菌的菌種選育中，需要建立一種對(duì)納他霉素組分和含量的快速檢測(cè)方法。由于干擾納他霉素分析的因素較多，本文主要選擇生物分析法和色譜分析法。

1 納他霉素生產(chǎn)菌種搖瓶液的制備

(1)搖瓶種子瓶配方：玉米淀粉2%,G糖0.8%,黃豆餅粉1%；酵母粉0.8%,蛋白胨0.5%,碳酸鈣0.2%。

(2)搖瓶發(fā)酵瓶配方：玉米淀粉6%,G糖0.75%,黃豆餅粉1.7%；酵母粉1.0%,碳酸鈣0.2%。

(3)納他霉素生產(chǎn)斜面菌種接種入種子瓶培養(yǎng)16h至搖瓶液無染菌種子液顏色變黃，有掛壁菌絲后，轉(zhuǎn)接入搖瓶發(fā)酵瓶培養(yǎng)2天下?lián)u床進(jìn)行檢測(cè)。

2 納他霉素生產(chǎn)菌種搖瓶液生物分析法和色譜分析法

2.1 納他霉素效價(jià)的生物檢測(cè)法

2..1.1 含有搖瓶液的瓊脂培養(yǎng)基制備

吸取不同的菌號(hào)的1mL搖瓶液到瓊脂培養(yǎng)基中倒平皿備用。每個(gè)菌號(hào)3～5個(gè)重復(fù)。

2.1.2 制備酵母菌肉湯培養(yǎng)液

2g的酵母粉倒入25mL的肉湯培養(yǎng)液中40℃培養(yǎng)30min，肉眼可看肉湯培養(yǎng)中產(chǎn)生大量的氣泡，肉湯變渾濁。

2.1.3 將制備好的酵母菌肉湯培養(yǎng)液倒入含有搖瓶液的瓊脂培養(yǎng)基平皿中28℃培養(yǎng)24h。

2.1.4 觀察抑菌圈的大小

用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的大小，同一菌號(hào)的抑菌圈加和取平均值。選擇抑菌圈大的菌株進(jìn)行重復(fù)上搖瓶。

生物分析法利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基中的擴(kuò)散滲透作用，將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和未知濃度的樣品在含有敏感性搖瓶液的瓊脂表面進(jìn)行擴(kuò)散滲透，由于對(duì)被試菌的抑制作用而產(chǎn)生抑菌圈，抑菌圈的大小和抗生素的濃度之間有一定的比例關(guān)系。生物分析法利用抗生素抑制敏感菌的特點(diǎn)，適用于生產(chǎn)菌種的選育的實(shí)際情況。

2.2 納他霉素效價(jià)的高效液相色譜法(HPLC)

納他霉素效價(jià)的高效液相色譜法(HPLC)具有操作簡(jiǎn)單、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于檢測(cè)納他霉素效價(jià)。大部份采用C18反相柱，納他霉素在303nm左右有最大吸收峰，故檢測(cè)器采用UV檢測(cè)器。

2.2.1 搖瓶液的前處理

把搖瓶液稀釋100倍。

2.2.2 進(jìn)高壓液相色譜儀

吸取0.1UL的搖瓶液入高壓液相色譜儀，每個(gè)菌號(hào)做3～5個(gè)重復(fù)，直接測(cè)定讀數(shù)。求平均值選擇效價(jià)高的菌株進(jìn)行進(jìn)行重復(fù)上搖瓶

3 結(jié)語

納他霉素分析干擾因素較多，生物分析法較為直觀，操作不復(fù)雜，較適用于生產(chǎn)菌種大批量的篩選；高壓液相色譜法測(cè)定的結(jié)果較為準(zhǔn)確，一次性設(shè)備投資較大。