黃志強(qiáng)，吳娜梅，唐明明，孫漢巨，李延紅，何述棟，劉和平，郜四羊

（1.合肥工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，安徽合肥 230009；2.安徽四平食品開發(fā)有限責(zé)任公司，安徽銅陵 244000）

芹菜素，又叫芹黃素，是天然存在的一種黃酮類化合物，有“植物雌激素”之稱，廣泛存在于多種水果、蔬菜、豆類和茶葉中，其中芹菜含量最高。芹菜素的化學(xué)名稱為5,7,4'-三羥基黃酮（5,7,4'-trihydroxyflavone），其4'，5，7位置的3個(gè)羥基和C2，C3之間的雙鍵決定了其獨(dú)特的生理學(xué)效應(yīng)和生物學(xué)特性。芹菜素的分子式為C15H10O6，分子量為270，不溶于水，易溶于乙醇、二甲基亞砜（DMSO）。純品呈淺黃或黃綠色，是天然的抗氧化劑，有降血壓和舒張血管、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、抑制腫瘤等作用[1]。

水芹（Oenanthe javanica），為傘形科草本植物，又名水英、野芹菜等[2]。其營(yíng)養(yǎng)豐富，含有多種人體不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如黃酮、多糖、礦物質(zhì)及揮發(fā)油類，具有良好的食用價(jià)值[3]。同時(shí)，水芹在臨床對(duì)高血壓病、高脂血癥、心腦血管疾病、乙型肝炎具有防治作用。有研究報(bào)道，水芹中黃酮含量很高，但有關(guān)水芹中芹菜素的報(bào)道較少。試驗(yàn)對(duì)水芹黃酮的提取進(jìn)行了優(yōu)化研究，并對(duì)芹菜素的提取純化、鑒定及其抗氧化性進(jìn)行了初步研究，旨在為水芹功能成分分析和深加工提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

水芹，桐城市牯牛背農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司提供；無水乙醇（分析純）、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉（粉狀）、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、X-5型大孔吸附樹脂、AB-8型大孔吸附樹脂、HP-20型大孔吸附樹脂、磷酸（優(yōu)級(jí)純）、甲醇（色譜純）；芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品，上海源葉生物科技有限公司提供；濃鹽酸、去離子水。

1.2 儀器及設(shè)備

722E型分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司產(chǎn)品；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋，江蘇金壇市榮華儀器制造有限公司產(chǎn)品；FA2004型電子分析天平，上海精科天平有限公司產(chǎn)品；BT-100型恒流泵，上海滬西分析儀器廠有限公司產(chǎn)品；85-2型恒溫磁力攪拌器，金壇市城東新瑞儀器廠產(chǎn)品；DHG-9070A型電熱恒溫干燥箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；SHZ-D型循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；LGJ-12型冷凍干燥機(jī)，北京松源華興科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品；SQW-40DⅡ型超微粉碎機(jī)，山東三清易辰有限公司產(chǎn)品；層析柱，上海廈美生化科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品；E2695型制備液相色譜儀，美國WATERS有限公司產(chǎn)品；質(zhì)譜儀，美國WATERS有限公司產(chǎn)品。

1.3 芹菜素的提取及純化

1.3.1 工藝流程

水芹→清洗→切碎→冷凍干燥→超微粉碎→水浴提取→樹脂吸附→乙醇洗脫→旋蒸→冷凍干燥→制備液相分離。

1.3.2 操作要點(diǎn)

（1）清洗。用蒸餾水清洗水芹的葉和莖，除去水芹葉、莖中肉眼可見的雜質(zhì)。

（2）切碎。用潔凈的刀將水芹葉、莖切成指甲大小的碎片。

（3） 冷凍干燥。在-60℃，3～10 Pa條件下，將水芹葉、莖碎片進(jìn)行冷凍干燥，使水分含量≤0.5%。

（4）超微粉碎。采用偏振式超微粉碎機(jī)對(duì)干燥后的水芹進(jìn)行超微粉碎，粉碎時(shí)間15 min。

（5）水浴提取。用乙醇溶液浸提，選用不同梯度的料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度和提取時(shí)間進(jìn)行浸提。

（6）樹脂吸附。按吸附及洗脫操作條件，將提取液加入層析柱中，吸附流速2.5 mL/min，平衡時(shí)間3 h。因黃酮被AB-8型大孔樹脂吸附，而其他糖類、蛋白等成分不被樹脂吸附，采用去離子水洗脫樹脂，至流出液完全透明為止。

（7）乙醇洗脫。用90%乙醇溶液洗脫大孔樹脂，至流出液為無色為止，收集洗脫液。

（8） 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。在溫度40℃，真空度≥4 kPa條件下，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，將洗脫液進(jìn)行真空濃縮，至液體至原體積的1/3為止。

（9） 冷凍干燥。在-60℃，3～10 MPa條件下，將濃縮液進(jìn)一步冷凍干燥，使水分含量≤0.5%，得到黃酮粉末。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 水芹中粗黃酮含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定及其含量測(cè)定

粗黃酮含量的測(cè)定采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品在510.0 nm處進(jìn)行比色測(cè)定，然后，以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為[4-5]：

式中：X——蘆丁質(zhì)量濃度，mg/mL；

Y——吸光度A。

水芹粗黃酮的提取采用水浴法提取[6]。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品粗黃酮總量，根據(jù)公式（1）計(jì)算提取物粗黃酮得率。

式中：Y——標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的吸光度；

M——所用原料的質(zhì)量，g。

1.4.2 水芹中粗黃酮提取的單因素研究[7-9]

（1） 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)水芹中粗黃酮提取的影響。稱取0.5 g水芹粉于置5個(gè)20 mL燒杯內(nèi)，分別加入15 mL體積分?jǐn)?shù)為60%，70%，80%，90%，100%的乙醇為提取劑，在70℃條件下回流提取4 h，計(jì)算粗黃酮得率，確定較適宜的乙醇體積分?jǐn)?shù)。

（2）提取溫度對(duì)水芹中粗黃酮提取的影響。稱取0.5 g水芹粉置于5個(gè)20 mL燒杯內(nèi)，加入80%乙醇15 mL為提取劑，在提取溫度分別為50，60，70，80，90℃條件下回流提取4 h，計(jì)算粗黃酮得率，確定較適宜的提取溫度。

（3）提取時(shí)間對(duì)水芹中粗黃酮提取的影響。稱取0.5 g水芹粉于5個(gè)20 mL燒杯內(nèi)，加入80%乙醇15 mL作為提取劑，在70℃條件下回流提取2，3，4，5，6 h，計(jì)算粗黃酮得率，確定較適宜的提取時(shí)間。

（4）料液比對(duì)水芹中粗黃酮提取的影響。稱取0.5 g水芹粉置于7個(gè)50 mL燒杯內(nèi)，以80%的乙醇為提取劑，其料液比為1∶10，1∶15，1∶20，1∶25， 1∶30，1∶35，1∶40，在70℃條件下回流4 h，計(jì)算粗黃酮得率，確定較適宜的料液比。

1.4.3 水芹中粗黃酮的提取工藝優(yōu)化

考慮到不同提取因素間的相互作用，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間和料液比為4個(gè)主要因素，進(jìn)行四因素三水平L9（34）正交試驗(yàn)，確定水芹中粗黃酮的最佳提取工藝。

1.4.4 大孔吸附樹脂純化水芹粗黃酮[10-12]

（1） 大孔樹脂的預(yù)處理。將 AB-8，X-5和HP-20型這3種大孔吸附樹脂分別用90%乙醇浸泡24 h，同時(shí)不停攪拌，使大孔吸附樹脂和乙醇充分接觸，完成后用蒸餾水洗至無醇味；然后再用5%的鹽酸溶液浸泡4 h，用蒸餾水洗至pH值為中性；最后，用5%的氫氧化鈉溶液浸泡4 h，用蒸餾水洗至pH值為中性，備用[13]。

（2）大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附和靜態(tài)解析試驗(yàn)[14]。準(zhǔn)確稱取預(yù)處理過的大孔吸附樹脂（AB-8，X-5和HP-20型） 各3 g，置于250 mL錐形瓶中，加入黃酮提取液60 mL，恒溫（25℃） 下振蕩24 h至吸附平衡，取出后再次過濾，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)公式（1）計(jì)算黃酮得率。用蒸餾水將吸附飽和的大孔吸附樹脂洗至洗脫液無色，再次過濾，并且吸干表面水分，加入90%乙醇30 mL，于室溫下振蕩12 h，將樹脂濾出，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)公式（1）計(jì)算黃酮得率，并根據(jù)公式（2）計(jì)算吸附率，公式（3）計(jì)算解析率。

式中：C0——初始質(zhì)量濃度，mg/mL；

CV——剩余質(zhì)量濃度，mg/mL；

Cd——解析液質(zhì)量濃度，mg/mL；

V1——解析液體積，mL；

V——溶液體積，mL。

（3） 大孔吸附樹脂對(duì)粗黃酮純化[15-18]。采用濕法裝柱，用3 BV去離子水將柱子壓實(shí)，然后將粗黃酮提取液以2 mL/min的流速上柱吸附，富集15 min后，再用去離子水洗至上層液呈無色，再用90%的乙醇洗脫，收集洗脫液直至洗脫液為無色。將收集到的液體進(jìn)行濃縮，再用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥，制得粗黃酮備用。

1.4.5 制備型液相色譜制備芹菜素

精確稱量20 mg粗黃酮樣品于20 mL小燒杯中，再加入10 mL甲醇，超聲溶解10 min，取出后將溶液過0.22μm膜，備用。其中，制備型液相色譜條件設(shè)置為：Galaksil EP-C18M型色譜柱（20 mm×250 mm，平均粒徑10μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸水溶液（35∶65，V∶V），流動(dòng)相流速5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量5 mL[19-20]。

1.4.6 分析型高效液相色譜驗(yàn)證芹菜素

樣品制備方法同上，高效液相色譜條件設(shè)置為：SepaxGP-C18型色譜柱（250 mm×4.6 mm，平均粒徑5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸水溶液（35∶65，V∶V），流動(dòng)相流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 L[21]。

1.4.7 質(zhì)譜分析

采用四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀對(duì)利用制備型液相色譜儀制得的芹菜素單體進(jìn)行MS/MS分析，且MS/MS條件為：ESI離子源、電噴霧離子化正離子采集模式，掃描范圍50～500 m/z，毛細(xì)管電壓3 500 V，霧化氣壓40.0 psi，干燥溫度310℃，干燥氣流速度9 mL/min[22]。

1.4.8 抗氧化活性研究

（1） 清除DPPH自由基（DPPH·） 的能力。精確吸取芹菜素粗提物及單體樣品溶液（質(zhì)量濃度梯度為20，30，40，50，60 g/mL） 各 2 mL，分別與2 mL濃度為2×10-4mol/L的DPPH無水乙醇溶液混合，充分搖勻后放置30 min。以2 mL蒸餾水與無水乙醇的混合溶液為參比，于波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定吸光度，記為A1；精確吸取樣品溶液各2 mL分別與2 mL蒸餾水混合均勻，以蒸餾水為參比，于波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定吸光度，記為A2；精確吸取2 mL濃度為2×10-4mol/L DPPH無水乙醇溶液與2 mL蒸餾水混合均勻后，以2 mL蒸餾水與2 mL無水乙醇的混合溶液為參比，于波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定吸光度，記為A0。以上吸光度均各測(cè)3次[23]。以VC為陽性對(duì)照，根據(jù)公式（4） 計(jì)算清除率：

（2） 清除羥基自由基（·OH） 的能力。精確吸取芹菜素粗提物及單體樣品溶液（質(zhì)量濃度梯度為2，4，6，8，10 g/mL） 各1 mL，依次加入1 mL 9 mmol/L FeSO4溶液、1 mL 9 mmol/L水楊酸乙醇溶液和1 mL 9 mmol/LH2O2，充分搖勻，于37℃水浴下反應(yīng)30 min，對(duì)同樣濃度的VC作同樣處理作為陽性對(duì)照，以蒸餾水為參比，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，記為A1；以蒸餾水代替樣品作為待測(cè)溶液，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，記為A0；以蒸餾水代替FeSO4，1 mL 9mmol/L水楊酸和1 mL 9 mmol/L H2O2溶液，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，記為A2。以上吸光度均各測(cè)3次[24]。根據(jù)公式（5） 計(jì)算清除率：

（3） 清除超氧陰離子（O2-·） 的能力。取25℃下預(yù)熱過pH值8.2，濃度50 mmol/L Tris-HCl緩沖溶液2.25 mL，置于10 mL試管中，加入芹菜素粗提物及單體樣品溶液（質(zhì)量濃度梯度為1，2，4，6，8 g/mL）2 mL，再加入25℃下預(yù)熱過的45 mmol/L鄰苯三酚溶液75 L，迅速混勻，反應(yīng)4 min后加入20 L濃度為10 mol/L HCl溶液終止反應(yīng)，對(duì)同樣濃度的VC作同樣處理并作為陽性對(duì)照，以蒸餾水為參比，于波長(zhǎng)320 nm處測(cè)定吸光度，記為A1；按上述方法，以2 mL蒸餾水代替樣品，于波長(zhǎng)320 nm處測(cè)定吸光度，記為A2；以蒸餾水代替鄰苯三酚溶液，于波長(zhǎng)320 nm處測(cè)定吸光度，記為A0。以上吸光度均各測(cè)3次[25]。根據(jù)公式（6） 計(jì)算清除率：

2 結(jié)果與分析

2.1 水芹中粗黃酮的提取工藝優(yōu)化

2.1.1 水芹中粗黃酮提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果

水芹中粗黃酮提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果見圖1。

圖1 水芹中粗黃酮提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果

乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)水芹中粗黃酮提取的影響如圖1（a）所示。很顯然，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的提高，黃酮得率明顯上升，且乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到80%時(shí)，黃酮得率最高（30.24 mg/g）。乙醇體積分?jǐn)?shù)進(jìn)一步提高后黃酮提取量有所下降。由于黃酮類化合物結(jié)構(gòu)各異，其溶解特性因極性不同而有所差異。水芹黃酮中含多種成分，既有黃酮苷類又有苷元類，所以選用一定比例的乙醇溶液能夠最大程度地提取出來。

提取溫度對(duì)水芹中粗黃酮提取的影響如圖1（b）所示?？梢钥闯?，當(dāng)提取溫度從50℃上升到70℃時(shí)，黃酮得率顯著上升，從9.11 mg/g上升至30.24 mg/g，這是由于提取溫度升高可加快分子擴(kuò)散速率，從而促進(jìn)黃酮類物質(zhì)的析出。但提取溫度進(jìn)一步上升時(shí)，黃酮得率明顯下降，這可能因?yàn)樘崛囟容^高，破壞了黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)，并增加了其他非黃酮物質(zhì)的析出。

提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響如圖1（c） 所示。顯而易見，提取時(shí)間從2 h上升至4 h時(shí)，黃酮得率提高到最高值（30.24 mg/g），隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，黃酮得率無明顯變化。這可能是因?yàn)辄S酮成分的溶出需要一個(gè)過程，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，而達(dá)到飽和狀態(tài)，使得黃酮得率無明顯變化。

料液比對(duì)黃酮得率的影響如圖1（d）所示。很明顯，當(dāng)料液比從1∶10上升至1∶30時(shí)，黃酮得率快速上升到最大值（30.24 mg/g）。然而，隨著料液比的進(jìn)一步提高，黃酮得率不僅沒有增大，甚至還出現(xiàn)了略微的下降，這可能是因?yàn)辄S酮成分的溶出已經(jīng)達(dá)到飽和。

2.1.2 水芹中粗黃酮的最佳提取工藝的確定

考慮到不同提取因素間的相互作用，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇L9（34）正交試驗(yàn)進(jìn)行最佳提取工藝的確定。

正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，影響從水芹中提取粗黃酮的主次因素排列次序?yàn)榱弦罕龋咎崛囟龋疽掖俭w積分?jǐn)?shù)＞提取時(shí)間。根據(jù)結(jié)果觀察，8號(hào)試驗(yàn)的黃酮得率最高，提取工藝為料液比1∶35，提取溫度70℃，提取時(shí)間3 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)90%。然而從極差分析的結(jié)果看，最佳組合為A3B3C2D3。所以，對(duì)A3B2C1D3和A3B3C2D3進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果分別為33.76，36.75 mg/g，最終確定A3B3C2D3為水芹中粗黃酮的最佳提取工藝，即料液比1∶35，提取溫度80℃，提取時(shí)間4 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)90%。

2.2 大孔吸附樹脂的篩選

評(píng)定大孔吸附樹脂性能，不僅需要有較大的吸附量，還需要較大的解析率，所以可以通過測(cè)定大孔吸附樹脂AB-8，HP-20和X-5型這3種的吸附率和解析率來進(jìn)行篩選。

3種大孔樹脂對(duì)水芹黃酮的吸附率和解析率見表3。

由表3可知，弱極性的AB-8型大孔樹脂對(duì)水芹黃酮的吸附率和解析率最大，分別為69.87%和72.57%，故選擇AB-8型大孔樹脂對(duì)水芹黃酮進(jìn)行純化。分析其原因，可能是水芹黃酮中非極性物質(zhì)相對(duì)比較少。

表3 3種大孔樹脂對(duì)水芹黃酮的吸附率和解析率/%

2.3 制備型液相色譜分析結(jié)果

芹菜素粗提物的制備液相色譜圖見圖2。

圖2 芹菜素粗提物的制備液相色譜圖

由圖2可以看出，黃酮化合物得到了較好的分離，分離出的單體有4種，出峰時(shí)間分別為5.35，9.45，11.01，15.38 min，其相對(duì)含量分別為12.23%，46.32%，23.34%，18.26%[19]。

芹菜素分析型高效液相色譜圖見圖3。

圖3 芹菜素分析型高效液相色譜圖

相同的色譜條件下，芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖如圖3（a）所示，得出其出峰時(shí)間為10.06 min。通過制備液相收集出2號(hào)峰的液體。將收集的單體進(jìn)一步進(jìn)行高效液相分析，結(jié)果如圖3（b） 所示，其出峰時(shí)間為9.52 min，為單一色譜峰，制備效果較好。

2.4 質(zhì)譜分析結(jié)果

芹菜素單體質(zhì)譜圖見圖4。

圖4 芹菜素單體質(zhì)譜圖

由圖4可知，基峰269 m/z是芹菜素去質(zhì)子化后形成的準(zhǔn)分子離子峰，說明芹菜素具有較強(qiáng)的酸性，容易失去氫質(zhì)子形成負(fù)離子而被檢測(cè)。質(zhì)譜峰187 m/z和268 m/z等可能是269 m/z的碎片離子，另一些相對(duì)豐度較低的峰則可能來自溶液中電噴霧溶劑和樣品溶劑或芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品所含的少許雜質(zhì)[23]。

2.5 抗氧化活性研究結(jié)果

2.5.1 清除DPPH自由基能力

芹菜素對(duì)DPPH自由基清除能力見圖5。

圖5 芹菜素對(duì)DPPH自由基清除能力

顯然，DPPH自由基清除能力與芹菜素單體的質(zhì)量濃度呈正相關(guān)的關(guān)系，同一質(zhì)量濃度下，芹菜素單體、粗提物和VC的清除能力大小為VC＞芹菜素單體＞粗提物。在質(zhì)量濃度為60 g/mL時(shí)，VC的清除率高達(dá)94.83%。芹菜素能直接作用于DPPH自由基，其原因可能是其直接提供H+給DPPH自由基，也可能是其轉(zhuǎn)移電子到DPPH自由基。

2.5.2 清除羥基自由基（·OH）能力

芹菜素對(duì)羥基自由基清除能力見圖6。

圖6 芹菜素對(duì)羥基自由基清除能力

由圖6可知，和清除DPPH自由基類似，VC的清除效果最好，芹菜素單體對(duì)羥基自由基的清除能力弱于VC，且羥基自由基清除能力與芹菜素單體的質(zhì)量濃度呈正相關(guān)關(guān)系，同一質(zhì)量濃度下，芹菜素單體、粗提物和VC的清除能力大小為VC＞芹菜素單體＞粗提物。在質(zhì)量濃度為10 g/mL時(shí)，芹菜素單體和VC的清除能力接近，VC的清除率達(dá)到了60.82%，芹菜素單體的清除率為57.49%。這可能是因?yàn)榍鄄怂靥峁〩+與·OH結(jié)合，使其還原成惰性化合物或穩(wěn)定的自由基。

2.5.3 清除超氧陰離子（O2-·） 能力

芹菜素對(duì)超氧陰離子自由基清除能力見圖7。

圖7 芹菜素對(duì)超氧陰離子自由基清除能力

很明顯，相同質(zhì)量濃度下，芹菜素單體、粗提物和VC的清除能力大小為VC＞芹菜素單體＞粗提物。但在質(zhì)量濃度為4 g/mL以上時(shí)，芹菜素單體和VC的清除能力相差不大；質(zhì)量濃度為8 g/mL時(shí)，VC的清除率達(dá)到了82.64%，芹菜素單體的清除率為79.78%。關(guān)于清除O2-·的機(jī)理相關(guān)研究較少，猜測(cè)其原理與清除DPPH自由基和羥基自由基的原理相似，均提供不穩(wěn)定的自由基。

3 結(jié)論

以水芹為原料，首先通過單因素試驗(yàn)和四因素三水平正交試驗(yàn)優(yōu)化了水芹中黃酮的提取工藝，最佳提取工藝為料液比1∶35，提取溫度80℃，提取時(shí)間4 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)90%。通過大孔吸附樹脂對(duì)粗黃酮進(jìn)行分離與純化，確定了AB-8型大孔吸附樹脂對(duì)粗黃酮的純化效果最好。通過制備液相色譜對(duì)粗黃酮進(jìn)行分離純化，經(jīng)高效液相色譜分析（HPLC） 和質(zhì)譜進(jìn)行驗(yàn)證出分離的該物質(zhì)為芹菜素單體，且純度較高。同時(shí)，芹菜素粗提物及單體對(duì)DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基都具有一定的清除能力，其中芹菜素單體的抗氧化性要大于粗提物，且芹菜素單體對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力較強(qiáng)。