牛建功，張濤，劉鴻，米乃瓦爾·木衣提，蔡林鋼，劉春池

（新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)科學研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部西北地區(qū)漁業(yè)資源環(huán)境科學觀測實驗站，新疆 烏魯木齊 830000）

新疆裸重唇魚Cymnodiptychus dybowskii隸屬鯉形目Cypriniformes鯉科Cyprinidae裂腹魚亞科Schizothoracinae裸重唇魚屬Cymnodiptychus，地方名：厚唇魚、小白條[1]，主要分布于新疆的伊犁河流域、天山北坡準噶爾盆地諸水域、南疆開都河；在中亞地區(qū)錫爾河、巴爾喀什湖支流上游等水體中也有分布[2]。新疆裸重唇魚是伊犁河流域典型土著種和生態(tài)敏感種，近年來，隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，受捕撈和水利工程建設(shè)的影響，種群資源量下降，捕撈群體規(guī)格變小，天然資源量驟減[3]。2004年新疆裸重唇魚被列為新疆維吾爾自治區(qū)人民政府列為Ⅰ類水生野生重點保護動物。目前，有關(guān)新疆裸重唇魚的年齡與生長、生長與環(huán)境因子、繁殖生物學、食性[4]、魚產(chǎn)卵場等已有研究，發(fā)現(xiàn)新疆裸重唇魚天然產(chǎn)卵場繁殖水溫為8～14℃，水流速度0.2～0.6m/s[5]。楊天燕等[6]研究了新疆7種裂腹魚亞科魚類的系統(tǒng)發(fā)育，認為新疆裸重唇魚屬于特化等級，具有極高的科研價值，而關(guān)于新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育和早期仔魚發(fā)育尚未見報道。因此，本研究通過結(jié)合近幾年新疆裸重唇魚人工繁殖實驗，觀察幾批次的受精卵發(fā)育和早期發(fā)育特征，以期為新疆裸重唇魚的規(guī)?；斯し敝澈驮鲋潮Ｗo提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與培育條件

2016年3—4月從鞏乃斯河新源河段及其附屬水體捕獲新疆裸重唇魚親魚，暫養(yǎng)于新疆伊犁河流域開發(fā)建設(shè)管理局恰普其海魚類增殖站流水養(yǎng)殖繁育車間。挑選腹部膨大、成熟度較好、體表無外傷親魚進行加溫、流水刺激。水溫控制在12～14℃，流水刺激3～4d后注射催產(chǎn)劑。2016年4月1日—4月19日通過干法授精共獲得受精卵12萬粒，在60cm×40cm×30cm PE孵化箱中孵化，水溫控制在14～18℃，每天 0點、5點、10點、16點、20點換水1/2，挑揀死卵，每隔72h換孵化箱，防止水霉病爆發(fā)。

1.2 方法

從4月19日獲得的受精卵中取2 000粒，固定后在40×Olympus體視顯微鏡下觀察，用Canon數(shù)碼相機（G11）照相。觀察時每次隨機取50粒卵，每隔30～120min觀察記錄、拍照一次；破膜后每隔24h取20尾仔魚,放置培養(yǎng)皿中苯氧乙醇麻醉后，用游標卡尺（中國桂林數(shù)顯卡尺，精度0～300mm）測量仔魚全長，記錄特征。根據(jù)張人銘等[7]要求，本試驗觀察樣本數(shù)不低于70%達到所記錄的胚胎發(fā)育時期為時間節(jié)點，觀測至仔魚上浮平游。

各階段積溫K的計算方法如下：

K（h·℃）=t×T，其中，t為各階段所需時間（h），T為該階段的平均水溫（℃）[8]。

1.3 圖像和數(shù)據(jù)處理

觀察獲得的胚胎和仔魚發(fā)育圖片采用Photoshop CS10.0軟件進行處理，數(shù)據(jù)用Excel2007處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 受精卵的形態(tài)特征

新疆裸重唇魚成熟卵沉性、較大，呈圓球形，卵質(zhì)均勻，透明狀，亮黃色或橙色，略帶黏性，卵徑（2.2±0.28）mm。受精后幾分鐘內(nèi)，卵吸水膨大，黏性增強，放入盆中，用羽毛輕輕刷洗，換水3～5次，逐漸去除黏性，使卵粒分散，不再相互黏合。卵子質(zhì)膜外的卵黃膜因吸水膨脹而形成受精膜，在卵子和受精膜之間形成卵周隙?？捎^察到原生質(zhì)由植物極向動物極緩慢流動。受精約35min后卵周隙最大，此時卵徑2.90～3.40mm，卵黃約占卵體積的3/5。

2.2 胚胎發(fā)育各階段積溫和發(fā)育特征

根據(jù)形態(tài)特征，新疆裸重唇魚的胚胎發(fā)育過程可分為受精卵、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期和器官形成期6個階段，共26期。在水溫（16±2）℃下，從受精卵到孵化歷時146.58h，積溫2 359.53 h·℃，其中受精卵耗時0.89h，積溫 14.27h·℃；卵裂期耗時10.72h，積溫185.78h·℃，囊胚期耗時11.95h，積溫191.13h·℃；原腸期耗時耗時22.89h，積溫366.30h·℃；神經(jīng)胚期耗時耗時3.71h，積溫59.34h·℃；器官分化期耗時耗時 96.42h，積溫1 542.71h·℃。各個階段的胚胎發(fā)育特征見表1。

2.3 早期仔魚發(fā)育特征

仔魚孵出第一天側(cè)臥水底，平均全長9.1mm，卵黃囊較大，約占魚體4/5左右，前囊呈水滴形，后囊呈棒狀。全身半透明，血液流動和脊索清晰可見，心跳為69次/min,扭動頻率為7～9次/min（圖Z1）。

生長1d后，仔魚側(cè)臥，平均全長9.1mm，卵黃囊前囊變小，后囊變長，全身顏色加深，血液紅色清晰，脊索可見，心跳為73次/min，扭動頻率為10～12次 /min，扭動過程中可前進 2～5cm（圖 Z2）。

2d后，仔魚側(cè)臥，平均全長9.2mm，卵黃囊繼續(xù)變小，前、后囊已基本連通，眼睛明顯變黑，全身顏色繼續(xù)加深，血液可見，心跳為75次/min，扭動頻率為 20～25次 /min。

4d后，仔魚側(cè)臥，偶爾可正臥，胸鰭可見，全身顏色繼續(xù)加深，眼睛明顯黑色，背部有黑色斑點，卵黃囊繼續(xù)變小，前后囊合并為一個卵黃囊，心跳為79次/min，扭動頻率更快，向前游動為正臥游動，可前進5cm以上。

6d后，魚體正臥，全長9.8mm，胸鰭變大，清晰可見，背部有黑色斑點，卵黃囊已呈線狀，魚體可自由游動，鰾空泡初步形成，偶爾可游上水面，靜止后下落至箱底，腸管等器官較為明顯，整體已基本接近幼魚形態(tài)。

序 E 圖1 E 2 E 3 E 4 E 5 E 6 E 7 E 8 E 9 E 1 0 1 1 E 1 2 E 1 3 E 1 4 E 1 5 E 1 6 E 1 7 E 1 8 E 1 9 E 2 0 E 2 1 E 2 2 E 2 3 E 2 4 E 2 5 E 2 6 E]℃2）±1 6（溫[水表程進育發(fā)胎胚魚唇重裸疆新1表℃2）±6 1 s k i i a t（w d y b o s u t y c h i p o d n y m G o f t e n m p e v e l o d i c n r y o b m E.1 a b T征特育發(fā)℃/h·溫積/h間時續(xù)持/h中集極物動向質(zhì)生m 0.2 8）m /5，原3的（2.2±積體卵徑占，卵約黃狀明，卵m透m色黃3.4 0，淡勻2.9 0～均徑質(zhì)，卵，卵脹形膨球水，圓吸性卵黏精受0 1 4.2 7 0 0.8 9球裂卵的等相小大個兩成形裂經(jīng)次一過經(jīng)盤胚2 3.0 2 0.5 5球裂卵的大等個4成，形裂分等次2第行進向方直垂軸裂分次一第與3 0.1 1.8 8球裂卵個8成，形個4列，每列2成，形次一裂分行平溝裂分條兩2 1.3 9 1.3 4球裂卵個1 6計，共個4列，每列4成形，共裂分次四第2 4.5 1.5 3異差有狀、形小大間之球裂，卵球裂卵個3 2計，共個4列，每列8成形，共裂分次五第2 4.3 7 1.5 2度難有已測觀眼，肉顯明異差征特狀形和布分間空間之球裂，卵異差后先有間時裂，分裂分次六第2 9.4 6 1.8 4體胚胞細多成，形布分集，密等不小大胞，細限界胞細出辨分可，但多越來越球裂卵3 2.9 4 2.0 6期胚囊入，進起隆盤，胚滑平于，趨糊模越來越限界間胞細5 0 3.1 3高最至起隆盤胚9 0.7 0 5.6 7成形腔胚1/3，囊約囊黃卵包下緣外層，胚后點高最達到盤胚5 0.4 3 3.1 5環(huán)胚成，形厚增處緣，邊包外延下續(xù)繼，并處1/2至包下盤胚1 4 4.5 9.0 3盾胚成，形起隆厚加的形角三呈層一2/3，有的囊黃卵至包下續(xù)繼胞細層胚8 4 5.2 5栓黃卵成，形面外于露球黃卵分部小一留，僅伸延續(xù)繼盾，胚處3/4至包下盤胚1 3 7.8 8.6 1板經(jīng)神見可緣外胎，胚處4/5至包下盤胚5 9.3 4 3.7 1寬變薄變端，后起隆端前體，胚閉關(guān)孔胚6 0 3.7 5節(jié)體個6 3～見可約，隱現(xiàn)出索，脊顯明起隆部尾頭體胚1 2 2.6 6 7.6 7形滴水倒，呈側(cè)兩的泡腦在現(xiàn)出囊，眼現(xiàn)出泡腦1 3 7.5 6 8.5 9芽尾成，形離分囊黃卵與始開端末體，胚陷凹始開囊黃卵1 5 0.4 4 9.4 0囊耳，即泡氏耳普庫現(xiàn)出側(cè)兩腦后8 7.6 6 5.4 8次1 0 7～動運肉肌遞傳鐘分每均，平動運肉肌遞傳地則規(guī)不始開部尾和部，背長變芽尾體胚2 3.7 8 1.4 9部尾至送傳動扭部頭，由動運身全為式方動i n，運/m次2 4 1 5～，達繁頻動扭體，胚見可睛眼2 0.5 6 1.2 9石耳對2現(xiàn)出中囊聽5 5.3 8 3.4 6烈劇繁頻加更動扭體，胚部頭到及觸，可長變柄，尾色無液i n，血/m次2 6為率，頻動跳微輕臟心狀棒的小很有，內(nèi)泡空室心現(xiàn)出3 0 8 1 9.2 5出伸膜破已柄尾分，部動流液血見，可動扭烈劇中膜卵在體胚5 7 6.6 7 3 6.0 4間時后精受期時育發(fā)0 0.8 9 e g g s t a g e e r t i l i z e d l a s t d i s c F B卵起精隆受盤胚1.4 4 c e l l s t a g e 2-期胞細2 3.3 2 c e l l s t a g e 4-期胞細4 4.6 6 c e l l s t a g e 8-期胞細8 6.1 9 c e l l s t a g e 1 6-期胞細1 6 7.7 1 c e l l s t a g e 3 2-期胞細3 2 9.5 5 c e l l s t a g e 6 4-期胞細6 4 1 1.6 1 s t a g e o r u l a M期胞細多1 4.7 4 s t a g e b l a s t u l a a r l y E期早胚囊2 0.4 1 s t a g e b l a s t u l a i d-M期中胚囊2 3.5 6 s t a g e b l a s t u l a a t e L期晚胚囊3 2.5 9 s t a g e g a s t r u l a a r l y E期早腸原3 7.8 4 s t a g e g a s t r u l a i d-M期中腸原4 6.4 5 s t a g e g a s t r u l a a t e L期晚腸原5 0.1 6 a t i o n f o r m b r y o e u r a l e m N期胚經(jīng)神5 3.9 1 a t i o n f o r m l a s t o p o r e B期閉封孔胚6 1.5 8 a p p e a r a n c e e r e s e t a m M期現(xiàn)出節(jié)體7 0.1 7 a t i o n f o r m s a c y e E期現(xiàn)出囊眼7 9.5 7 a p p e a r a n c e a u d a l b u d C期芽尾8 5.0 5 p r e s e n t v e s i c l e a r E期現(xiàn)出囊聽8 6.5 4 e f f e c t u s c u l a r M期應(yīng)效肉肌8 7.8 3 a p p e a r a n c e e n s L期現(xiàn)出體晶9 1.2 9 a t i o n f o r m t o l i t h O期成形石耳1 1 0.5 4 e a r t b e a t i n g H期跳心1 4 6.5 8 a t c h i n g H期膜出

3 討論

3.1 胚胎發(fā)育的水溫

適宜的水溫是魚類胚胎發(fā)育和仔魚培育的重要條件之一。水溫過低孵化期延長，影響孵化率，水溫過高畸形率上升[9,10]。本試驗中，孵化溫度為14℃～18℃，主要參考伊犁河流域鞏乃斯河水域2012—2017年間新疆裸重唇魚天然產(chǎn)卵場水域的數(shù)據(jù)確定。試驗發(fā)現(xiàn)，水溫低于12℃時，受精卵發(fā)育至尾牙期后停止發(fā)育，然后大量死亡，死亡率高達90%以上；水溫高于22℃時，受精卵破膜速度加快很多，破膜的仔魚卵黃囊較大，尾柄彎曲，畸形率可達80%左右。本研究開展之前，對新疆地區(qū)已開展人工繁育的裂腹魚類進行了較為詳細的比對（表2）。在四種裂腹魚類的胚胎發(fā)育中，新疆裸重唇魚水溫最低，塔里木裂腹魚Schizothoraxbiclolulphi類次之，扁吻魚Aspiorhynchuslaticeps和伊犁裂腹魚Schizothoraxpseudaksaiensis最高。扁吻魚和塔里木裂腹魚是塔里木河流域的土著特有魚類，前者處于塔里木河流域的中下游水域，后者處于中上游水域[11]；伊犁裂腹魚和新疆裸重唇魚為伊犁河流域的土著特有魚類，伊犁裂腹魚處于伊犁河流域的中下游，新疆裸重唇魚主要分布在伊犁河流域上游三大支流[12]，這說明上述四種裂腹魚類胚胎發(fā)育水溫的差別與天然水域產(chǎn)卵場棲息地水溫有較大關(guān)系。

3.2 與其他裂腹魚亞科魚類胚胎發(fā)育比較

表3比較了新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育各時期的發(fā)育積溫[7,13,14]。由表3可知，新疆裸重唇魚發(fā)育時間最長，長達近1周，伊犁裂腹魚次之，扁吻魚和塔里木裂腹魚較為相近，其原因主要與產(chǎn)卵場天然水域的氣候特征有較大關(guān)聯(lián)。新疆裸重唇魚和伊犁裂腹魚為伊犁河流域土著特有魚類，塔里木裂腹魚類和扁吻魚為塔里木河流域土著特有魚類，伊犁河流域冰封期較塔里木河流域更長、更冷，所以同為裂腹魚亞科魚類的新疆裸重唇魚和伊犁裂腹魚孵化時間更長。

對比發(fā)現(xiàn)，新疆裸重唇魚上浮時間最長，塔里木裂腹魚和扁吻魚次之，伊犁裂腹魚上浮時間最短（表3），其原因主要與仔魚所生長的天然水域餌料生物豐富度有較大關(guān)系。新疆裸重唇魚主要生長在伊犁河中上游水域，水體中輪蟲、枝角類等浮游動物的生物量較低，而伊犁裂腹魚主要生長在伊犁河水域的中下游，水體中浮游動物的生物量豐富，在仔魚生長發(fā)育過程中，新疆裸重唇魚仔魚卵黃囊的體積比伊犁裂腹魚要大的多，以保證仔魚在開口餌料匱乏的水域中能夠生長的更大更強壯，提高自身的成活率。與新疆其他幾種裂腹魚類胚胎發(fā)育特征比較發(fā)現(xiàn)，新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育具有如下特點：①成熟卵個體較大，卵黃囊體積大，受精吸水膨脹比大，可達3.4mm；②適應(yīng)發(fā)育水溫閾值較廣，12～20℃均可發(fā)育、生長，是新疆地區(qū)分布水域最廣的裂腹魚類；③破膜仔魚卵黃囊體積占比大，能更好地為仔魚提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，破膜仔魚在開口餌料匱乏的水域中可維持15d；④仔魚上浮時間較長，在淺水帶的產(chǎn)卵場水域中能更有利躲避其他捕食者，提高種群成活率。

表2 幾種裂腹魚類人工繁殖技術(shù)參數(shù)對比Tab.2 Comparison of technical parameters of artificial propagation of several members in Schizothoracinae

表3 幾種裂腹魚類胚胎發(fā)育時期積溫對照表Tab.3 The comparison of effective accumulative temperature of embryonic development in fishes in Schizothoracinae

圖版1 新疆裸重唇魚胚胎及早期仔魚發(fā)育的形態(tài)Plate 1 Morphology of Embryo and Early Larval Development of Gymnodiptychus dybowskii