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(1.江山市畜牧獸醫(yī)局 ，浙江 江山 324100； 2.南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院)

浙江省蕭山區(qū)某生豬養(yǎng)殖場，存欄基礎(chǔ)母豬2000頭，一段時間該場保育豬和育肥豬死亡不斷，多呈明顯PRDC臨床癥狀，其主要癥狀有：皮膚發(fā)紅，發(fā)燒，有的消瘦，被毛凌亂，呼吸困難，咳嗽。發(fā)病豬從45日齡到120日齡不等。其平均死亡率保育豬為18.5%，育肥豬7.4%。根統(tǒng)計，呈急性死亡的豬占4成，呈慢性發(fā)病，逐漸消瘦，最終死亡的病例占6成。發(fā)病持續(xù)長達半年之久，期間用過替米考星，氟苯尼考，磺胺氯達嗪鈉粉，強力霉素，泰樂菌素，泰妙菌素，黃芪多糖等多種藥物，均沒有達到根治的效果。但一停藥，很快再次發(fā)病，損失較為嚴重。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1病料 取自不同臨床癥狀和不同日齡的發(fā)病豬，撲殺后進行剖檢采樣，共剖檢保育豬4頭，育肥豬4頭。

1.1.2藥敏試紙 購自杭州微生物試劑有限公司，規(guī)格：直徑6 mm，執(zhí)行標準：WS/T125-1999。

1.2方法

1.2.1細菌分離、純化與鑒定 8頭剖檢豬無菌取深層組織接種在TSA培養(yǎng)基中分區(qū)劃線，放置于溫度37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)30 h后取出，用無菌的接種環(huán)挑去不同菌落，進行革藍氏染色，鏡檢，根據(jù)鏡檢結(jié)果挑取單獨菌落進行傳代培養(yǎng)、純化并進行生化鑒定及藥敏試驗。

1.2.2病原檢測 采集剖檢豬的肺臟，淋巴結(jié)，脾臟和扁桃體，進行豬瘟病毒，豬藍耳病病毒，豬偽狂犬病毒以及豬圓環(huán)病毒檢測。

1.2.3防治措施 根據(jù)檢測結(jié)果，判定該豬場長期處于混合感染狀態(tài)，其主要病毒性病原有高致病性藍耳病病毒和豬圓環(huán)病毒2型，主要細菌性病原包括胸膜肺炎放線桿菌，豬鏈球菌和副豬嗜血桿菌。針對檢測結(jié)果及藥敏試驗，進行如下整改：

(1)采用以疫苗免疫為主，藥物保健及治療為輔的雙管齊下措施。

(2)疫苗預防措施：按表1和表2的推薦免疫程序進行，對仔豬及種豬，注重做好圓環(huán)和鏈球菌滅活疫苗的免疫；使保育豬及時產(chǎn)生針對性抗體，對肥豬，應做好傳染性胸膜肺炎滅活疫苗的免疫。

(3)藥物保健及治療：仔豬斷奶轉(zhuǎn)群時，在飼料中添加阿莫西林、恩諾沙星及葡萄糖進行保健，對于正在發(fā)病(副豬嗜血桿菌病或者巴氏桿菌病)出現(xiàn)臨床癥狀(如腿跛行、關(guān)節(jié)腫大、皮膚蒼白、被毛凌亂、消瘦、咳嗽等)的仔豬，使用頭孢或阿莫西林針劑進行治療，同群仔豬用藥物保健7～10 d。

(4)育肥豬75 kg左右進行一次藥物保健。使用500 g/t氟苯尼考+1000 g/t替米考星或1000 g/t磺胺類+1000 g/t恩諾沙星或800 g/t泰萬菌素+500 g/t氟苯尼考拌料，輪換用藥，連續(xù)飼喂7 d。

(5)做好各項消毒措施，包括豬舍內(nèi)外環(huán)境，廢棄物，人員進出，病死豬以及手術(shù)床的消毒。

2 結(jié)果

2.1剖檢病變 共剖檢發(fā)病保育豬4頭，育肥豬4頭，保育豬主要病變?yōu)椋盒陌e液，絨毛心，肺臟粘連(圖1)。

表1 仔豬推薦免疫程序

表2 種豬推薦免疫程序

圖1 主要剖檢病變A:豬肺表面附著纖維素性滲出物； B:心臟表面附著纖維素性滲出物

2.2細菌分離形態(tài) 8頭剖檢豬分別無菌取深層組織接種在TSA(5%無支原體新生牛血清+1%NAD)上進行細菌分離鑒定。結(jié)果8頭豬一共分離出可疑菌落14株(保育6株，育肥8株)，將挑取的可疑菌落進一步純培養(yǎng)后進行革蘭氏染色鏡檢(見圖2)和生化鑒定。根據(jù)革蘭氏染色結(jié)果，分別為革蘭氏陰性球桿菌, 散在或成雙存在(圖2A)； 革蘭氏陽性球菌, 單個或成對(圖2B)；革蘭氏陰性長桿菌(圖2C)。

圖2 可疑菌落革蘭氏染色結(jié)果A:革蘭氏陰性球桿菌，散在或成雙存在; B:革蘭氏陽性單個或成對球菌； C:革蘭氏陰性長桿菌

2.3細菌生化鑒定結(jié)果 進一步進行生化鑒定結(jié)果：保育豬1、3號樣本各1株病原，為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌；2、4號樣本各2株病原，分別為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌和鏈球菌。育肥豬1號樣本2株病原，分別為副豬嗜血桿菌和鏈球菌；2號樣本3株病原，分別為副豬嗜血桿菌、鏈球菌和豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌；3號樣本2株病原，分別為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌和鏈球菌；4號樣本1株病原，為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

最終共分離到三種細菌，分別為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌、豬鏈球菌和副豬嗜血桿菌。

2.4藥敏結(jié)果 對三種分離菌進行藥敏試驗，結(jié)果見表3至表5。

藥敏結(jié)果顯示對傳染性胸膜肺炎放線桿菌較為敏感的藥物是克林霉素、頭孢曲松、恩諾沙星、林可霉素、環(huán)丙沙星和氧氟沙星；對豬鏈球菌較為敏感的藥物是阿莫西林、氨芐青霉素、頭孢曲松、頭孢拉定(Ⅵ)和恩諾沙星；對副豬嗜血桿菌較為敏感的藥物是頭孢曲松、頭孢拉定(Ⅵ) 、氨芐青霉素以及強力霉素。

2.5病毒性病原檢測結(jié)果 病毒性病原檢測結(jié)果見表6。

表3 傳染性胸膜肺炎放線桿菌藥敏試驗結(jié)果

注：“-”表示沒有抑菌圈

表4 豬鏈球菌藥敏試驗結(jié)果

表5 副豬嗜血桿菌藥敏試驗結(jié)果

注：“+”表示陽性；“-”表示陰性

由表6顯示，剖檢的8頭豬圓環(huán)全陽，豬瘟和偽狂犬全為陰性，保育和育肥分別有2頭和3頭豬高致病性藍耳病陽性。說明該豬場存在圓環(huán)和高致病性藍耳病的存在。

2.6轉(zhuǎn)歸情況 根據(jù)藥敏試驗，采用敏感藥物防治，經(jīng)過3個月方案的實施，保育和育肥豬死亡率和發(fā)病率呈明顯下降趨勢，其中保育豬死亡率從18.5%下降到5.6%，育肥豬死亡率從原來的7.4%下降到2%。

3 討論

豬傳染性胸膜肺炎是豬場由豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引起的一種常見細菌病，有時呈亞臨床感染，有時可引起大規(guī)模爆發(fā)[1]?，F(xiàn)已知的豬傳染性胸膜肺炎有15種血清型，其中血清1～12型以及15型被稱為生物Ⅰ型，而13和14型被稱為生物Ⅱ型[2-3]。豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌普遍存在，Marcelo Gottschalk等[4]檢測了2011-2014年加拿大地區(qū)134份來自發(fā)病豬的APP菌株的血清型，其中血清型5和血清型7比例較高，分別為39%和37%。在我國，逯忠新等[5]應用間接血凝試驗對華中地區(qū)的1470份豬血清進行血清抗體檢測以及血清型分型鑒定，結(jié)果平均抗體陽性率為20%，血清型主要為1、3、7型。臨床上豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌通常與其他病原混合感染。刁有祥[6]應用PCR方法對從山東省地區(qū)采集豬傳染性胸膜肺炎病料和臨床健康豬病料進行圓環(huán)2型和藍耳病毒檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在傳染性胸膜肺炎豬病料中圓環(huán)2型陽性率高達67.5%，藍耳病毒性率高達40%，而健康對照圓環(huán)2型和藍耳病毒的陽性率分別為16.8%和9.6%，明顯低于傳染性胸膜肺炎陽性肺臟相應的檢出率，說明豬傳染性胸膜肺炎的發(fā)生可能與圓環(huán)2型和藍耳病毒的感染和共感染有關(guān)。本案例通過檢測，發(fā)現(xiàn)豬場存在豬鏈球菌，副豬嗜血桿菌，高致病性藍耳病病毒以及豬圓環(huán)病毒和豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌，上述病原相互作用，造成了保育豬和育肥豬群的豬呼吸道綜合征。

臨床上目前對豬傳染性胸膜肺炎的預防和控制多采用抗生素或疫苗。然而，無論是哪一種措施，均不能從豬的扁桃體中徹底清除豬胸膜肺炎放線桿菌[7]。但H.Wyns等[8]通過實驗發(fā)現(xiàn)通過檢測APP感染豬的炎性細胞因子可用于評估藥物、疫苗佐劑及疫苗的免疫調(diào)節(jié)性能。由于近年濫用抗生素的現(xiàn)象越來越嚴重,長期使用的藥物對本病的治療效果明顯減弱。比如Michele Vanni等[9]發(fā)現(xiàn)從1994年到2009年，意大利的胸膜肺炎放線桿菌阿莫西林、氨芐西林、頭孢喹肟、復方新諾明、青霉素和替米考星的耐藥性成明顯上升趨勢，且像四環(huán)素類，頭孢類等藥物耐藥性也逐漸增強。因此，預防該傳染病的有效方法是應用安全、高效的新型疫苗進行免疫預防。譚武貴等[10]就通過敏感藥物治療豬傳染性胸膜肺炎及其呼吸道混合感染。本案例通過對分離株進行藥敏試驗，根據(jù)藥敏結(jié)果進行治療和保健藥物的篩選和用藥，能起到事半功倍的效果。

目前已有很多商品化疫苗防治豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌，包括活疫苗，滅活苗，亞單位疫苗及基因工程苗[11]。逯忠新等[12]以國內(nèi)多發(fā)的豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌強毒株制成油佐劑滅活苗，經(jīng)強毒攻毒效力試驗試驗表明保護率達到90%以上。

本案例通過檢測發(fā)現(xiàn)該豬場為多病原混合感染，一方面通過分離株的藥敏試驗，確定細菌性感染的敏感藥物，第一時間控制細菌病，另一方面調(diào)整免疫程序，增加主要病原菌的疫苗免疫，在病毒病如藍耳和圓環(huán)上，采用加強和優(yōu)化免疫的方法，再加上嚴格的消毒措施，多方面共同努力，通過三個月時間，將保育和育肥的死亡率降低到優(yōu)良水平。這得益于快速準確的診斷以及實驗室敏感藥物的篩選上。