，，，，

(1.陜西國際商貿(mào)學(xué)院，陜西 咸陽 712046； 2.陜西步長制藥有限公司，陜西 西安 710075；3.山東步長制藥股份有限公司，山東 菏澤 274000；4.陜西省中藥綠色制造技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西 西安 710075)

丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)為唇形科鼠尾草屬草本植物，又名赤參、血參根、大紅袍、紫丹參、紅根、紅丹參、赤丹參、紫參，主產(chǎn)自河北、山西、陜西、山東、河南、江蘇、浙江、安徽、江西及湖南等地[1]。丹參以其植株的根和根莖入藥，味苦；性微寒，歸心、肝經(jīng)，具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效[2]，現(xiàn)代藥理研究表明，丹參具有保護(hù)心肌、抗動脈粥樣硬化、抗心律失常、抗血栓、抗凝、抗心肌肥厚、肝保護(hù)、腎保護(hù)、抗腫瘤、腦保護(hù)、呼吸系統(tǒng)保護(hù)、消化系統(tǒng)保護(hù)等作用[3]。丹參是我國傳統(tǒng)的大宗中藥材，具有悠久的藥用歷史，近年來隨著心腦血管疾病的發(fā)生成為危害人類生命健康的主要疾病之一，諸如腦心通、復(fù)方丹參滴丸、復(fù)方丹參片等以丹參為原料的中成藥的需求量急劇上升，而野生丹參遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場對丹參藥材的需求，所以近幾年全國很多地方都開始進(jìn)行丹參的大規(guī)模人工種植。山東省作為丹參藥材的主產(chǎn)區(qū)之一，現(xiàn)已建成通過國家GAP認(rèn)證的丹參規(guī)范化種植基地，帶動周邊農(nóng)戶大面積種植丹參，然而在丹參種植過程中種子的質(zhì)量是保證其產(chǎn)量的重要因素之一。目前，僅有極少數(shù)中藥材種子有現(xiàn)行的地方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，這遠(yuǎn)不能滿足種子市場檢驗(yàn)的需求[4]。四川省、陜西省均已制定出適合當(dāng)?shù)厥袌龅牡⒎N子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但因?yàn)榈赜虿町悾圆荒軓V泛適用，所以就要求各個地方制定出適合本地方的種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以保證本地種子市場的有序流通。本研究在山東省丹參的主要分布區(qū)收集丹參種子，參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程》(GB/T 3543-1995)[5]中的相關(guān)檢驗(yàn)方法，結(jié)合丹參種子的生理特性[6-8]對山東丹省參種子質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，為山東省丹參種子質(zhì)量評價(jià)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2017年7月，在山東省丹參主要分布區(qū)采收成熟的丹參種子，每份500 g，共收集19份種子，具體產(chǎn)地和編號見表1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 扦 樣

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 扦樣 》(GB/T 3543.2)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)執(zhí)行。采用四分法[9]進(jìn)行取樣。

1.2.2 凈度分析

采用徒手減半法。從50 g待檢樣品中分取試驗(yàn)樣本5 g(不少于2 500粒種子)左右。參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 凈度分析》(GB/T 3543.3)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)進(jìn)行檢驗(yàn)，并計(jì)算凈度[9]。

表1 丹參種子材料信息

1.2.3 種子真實(shí)性鑒定

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 真實(shí)性和品種純度鑒定》(GB/T 3543.5)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，測定丹參種子的大小，觀察種子形狀和種皮顏色[9]。

1.2.4 千粒重測定

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 其他項(xiàng)目檢驗(yàn)》(GB/T 3543.7)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)，采用百粒法進(jìn)行測定[9]。

1.2.5 含水量測定

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 水分測定》(GB/T 3543.6)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)，采用高恒溫烘干法進(jìn)行測定，計(jì)算含水量[9]。

1.2.6 生活力測定

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 其他項(xiàng)目檢驗(yàn)》(GB/T 3543.7)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)，將在水中浸泡12 h后的丹參種子沿垂直腹縫線縱切開，露出種胚，置于0.5%的TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)溶液中，35 ℃下避光染色4 h后，統(tǒng)計(jì)被染色種子數(shù)目，計(jì)算生活力[9]。

1.2.7 標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)

參照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)》(GB/T 3543.4)(中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)1995)，發(fā)芽床為濾紙，培養(yǎng)條件為25 ℃、12 h光照/12 h黑暗，以胚根是否突破種皮作為判定是否發(fā)芽的標(biāo)準(zhǔn)，按下列公式計(jì)算發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)[9]。

發(fā)芽率(%) =(整個發(fā)芽周期內(nèi)發(fā)芽種子數(shù)/供試種子總數(shù))×100%；

發(fā)芽勢(%)=(前4 d發(fā)芽總數(shù)/供試種子數(shù))×100%；

發(fā)芽指數(shù)=∑Gt/Dt，式中：Gt為時間t內(nèi)發(fā)芽數(shù)，Dt為相應(yīng)發(fā)芽日數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 丹參種子形態(tài)特征

丹參種子長1.30～3.88 mm，種子寬0.87～2.54 mm，三棱形長卵形，兩頭略有鈍尖，背面稍平，腹面隆起成脊，圓鈍，近基部收縮稍有凹陷。無毛，種皮呈灰褐色或茶褐色[9]。

2.2 丹參種子質(zhì)量指標(biāo)檢測結(jié)果

對收集的19份丹參種子的凈度、千粒重、含水量、生活力、發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)的測定結(jié)果見表2。

由表2可知，種子凈度在67.32%～88.43%之間，平均為77.56%。丹參種子批中的雜質(zhì)主要為廢種子、花序和細(xì)沙，少數(shù)丹參種子批中混有其他植物種子。丹參種子千粒重在1.22～1.76 g之間，平均為1.59 g。丹參種子含水量在10.00%～11.92%之間，平均為10.82%。丹參種子生活力在21.33%～51.67%，平均為35.53%。丹參種子發(fā)芽率在20.67%～58.67%，平均為30.82%。丹參種子發(fā)芽勢在9.67%～48.67%，平均為23.32%。丹參種子發(fā)芽指數(shù)在4.63～21.81，平均為9.65。不同產(chǎn)地丹參種子的各項(xiàng)指標(biāo)差異明顯。

對19份丹參種子樣品所測得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行K-聚類分析，具體結(jié)果見表3，將19份丹參種子分為3類，1類12份，占總數(shù)的63.16%；2類3份，占總數(shù)的15.79%；3類4份，占總數(shù)的21.05%。

以K-聚類分析的數(shù)據(jù)結(jié)果作為參考，結(jié)合實(shí)際應(yīng)用中快速、簡便、準(zhǔn)確的需求，最終確定了以發(fā)芽率、發(fā)芽勢、生活力、千粒重、水分、凈度作為山東省丹參種子質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)的主要考量指標(biāo)[9]，初步將山東丹參種子分為3個等級，結(jié)果見表4。分級方法采用最低定級原則，即任何一項(xiàng)指標(biāo)不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)都不能作為相應(yīng)等級的合格種子，其中三級種子為不合格種子[10]。

表2 丹參種子各項(xiàng)指標(biāo)檢測值

表3 K-聚類分析結(jié)果(n=19)

表4 丹參種子質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)

3 討 論

在各項(xiàng)分級指標(biāo)中，發(fā)芽率最為重要，因其可較直接反映種子的田間出苗率[10]；發(fā)芽勢可以快速反映出種子的發(fā)芽能力及整齊度；故以丹參種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢作為首要指標(biāo)。生活力可以反映種子是否具有發(fā)芽的內(nèi)在潛力，是種子活力的判斷依據(jù)；千粒重可反映種子飽滿程度和種子成熟度等[11]；丹參種子的生活力、千粒重可以間接反映種子的萌發(fā)潛力，作為次要指標(biāo)。而凈度和含水量卻不同，往往可通過再加工如清選和干燥等來提高質(zhì)量，但發(fā)芽率是以凈種子測定的，所以離不開凈度分析[10]。含水量也與種子的千粒重、發(fā)芽率、發(fā)芽勢等有著極為密切的關(guān)系。此外，凈度和水分因素容易人為控制且與種子的貯藏質(zhì)量有直接相關(guān)性，固以凈度和水分作為收購種子時的參考指標(biāo)[10]。本次制定的丹參種子質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)中的各項(xiàng)指標(biāo)均有重要的指導(dǎo)價(jià)值，故在市場檢測中，要綜合考慮各項(xiàng)指標(biāo)的檢測結(jié)果，才能對每一批種子的質(zhì)量做出科學(xué)合理的判定。

本研究中所收集的丹參種子的各項(xiàng)種子質(zhì)量指標(biāo)數(shù)據(jù)差異較大，如丹參種子的發(fā)芽率最高為58.67%，最低僅為20.67%，這較為真實(shí)地反映了市場上中藥材種子質(zhì)量參差不齊的現(xiàn)狀，亟待制定科學(xué)合理的標(biāo)準(zhǔn)去指導(dǎo)市場[10]，以保證中藥材種子市場的健康運(yùn)轉(zhuǎn)。本標(biāo)準(zhǔn)大致反映了當(dāng)前山東省丹參種子質(zhì)量的實(shí)際情況，然植物種子質(zhì)量的好壞，還受到當(dāng)年氣候狀況的影響，故還需進(jìn)一步在生產(chǎn)實(shí)踐和市場中收集丹參種子相關(guān)信息以驗(yàn)證和完善此標(biāo)準(zhǔn)。此外，丹參種子不耐儲藏，因而本標(biāo)準(zhǔn)只能作為當(dāng)年新產(chǎn)丹參種子質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。