黃周鋒 ，胡筱希 ，陸國壽 ，黃建猷 ，譚 曉

（1．廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，南寧 530022；2．廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實驗室，南寧 530022）

四味脾胃舒顆粒是由4味中藥組成（茯苓、雞矢藤、陳皮、山楂），標(biāo)準(zhǔn)編號 WS-11057（ZD-1057）-2002-2012Z，具有健脾和胃，消食止痛的功效，用于脾胃虛弱所致的食欲不振，脘腹脹痛，傷食腹瀉，小兒疳積等。四味脾胃舒顆粒為廣西天天樂藥業(yè)股份有限公司的全國獨(dú)家品種（國藥準(zhǔn)字Z20026557），具有較好的臨床效果，但其相應(yīng)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)未明。

采用HPLC-LTQ/Orbitrap MS法對中藥成方制劑進(jìn)行化學(xué)成分研究，能在一定程度上揭示制劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，亦更有助于促進(jìn)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善。鑒于四味脾胃舒顆粒這一壯瑤藥民族醫(yī)藥產(chǎn)品現(xiàn)代研究相對滯后的現(xiàn)狀，本研究采用HPLC-LTQ/Orbitrap MS法對四味脾胃舒顆粒進(jìn)行化學(xué)成分研究，從四味脾胃舒顆粒樣品中共分析出30個成分，鑒定了26個化合物，為進(jìn)一步研究其藥效及促進(jìn)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善打下了基礎(chǔ)。

1 實驗材料

1.1 儀器與試藥 HPLC-LTQ/Orbitrap MS（美國熱電公司）；乙腈、甲醇、甲醇、乙酸銨為色譜純（德國Merck公司）；水為超純水。

1.2 試藥與樣品 四味脾胃舒顆粒是由4味中藥組成（茯苓、雞矢藤、陳皮、山楂），標(biāo)準(zhǔn)編號WS-11057（ZD-1057）-2002-2012Z。

2 方法

2.1 色譜及質(zhì)譜檢測條件

2.1.1 色譜條件 XTerraC18色譜柱（2．1mm×100mm，3．5 μm）；流動相 A 為 0．1%甲酸+2．5 mmol/L 乙酸銨水，流動相B為乙腈；梯度洗脫，0～10 min（90%-60%A），10～20 min（60%-40%A），20～25 min（40%-20%A），25～27 min（20%-10%A），27～35 min（10%-10%A），35～35．10 min（10%-90%A），35．10～40 min（90%）；流速 0．3 mL/min；柱溫 25 ℃；檢測波長282 nm。

2.1.2 質(zhì)譜條件 ESI離子源；正離子檢測；毛細(xì)管溫度320℃；脫氣溶劑溫度350℃；脫氣溶劑氣流量 10 L/min；掃描范圍 150～2 000 m/z；霧化器壓力35 000 kpa；毛細(xì)管電壓4 kV；錐孔電壓100 V。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取四味脾胃舒顆粒樣品1 g，加入10 mL 50%乙醇回流30 min，共兩次，過濾，合并濾液，回收溶劑，濾液蒸干后用無水乙醇定容于100 mL容量瓶中。

2.3 數(shù)據(jù)整理 查詢國內(nèi)外茯苓、雞矢藤、陳皮、山楂及其同科屬植物化學(xué)成分研究相關(guān)文獻(xiàn)報道，同時借助Scifinder和Reaxys數(shù)據(jù)庫，收集整理了四味脾胃舒顆粒處方中各味藥材中各類化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)。利用液質(zhì)聯(lián)用儀采集數(shù)據(jù)后，提取各色譜峰的質(zhì)譜圖，根據(jù)準(zhǔn)分子離子（M+H+/M]+）等信息判斷并得到一級質(zhì)譜精確相對分子質(zhì)量，與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行對比，對各色譜峰進(jìn)行初步推測。篩選信噪比較好的二級質(zhì)譜圖以獲取色譜峰的二級質(zhì)譜信息，并獲得化合物相應(yīng)的碎片離子，根據(jù)離子的裂解情況并結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步對比推測化學(xué)成分。

3 結(jié)果與分析

四味脾胃舒顆粒樣品在“2．1．2”項色譜條件及“2．1．3”質(zhì)譜條件下分析得 HPLC-LTQ/Orbitrap MS總離子流圖，見圖 1。根據(jù)“2．1．4”的數(shù)據(jù)分析方法，共得到30種成分，推測了其中26種，結(jié)果見表1。

圖1 四味脾胃舒樣品正離子模式總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms of Siwei Piweishu Granule

3.1 黃酮類成分的鑒定 峰9在ESI模式下得到m/z303．0853[M]+（C16H14O6），與文獻(xiàn)報道的橙皮素分子式一致，其二級質(zhì)譜得到m/z，177，153，137的碎片峰，與文獻(xiàn)報道的橙皮素的二級質(zhì)譜相一致，推測它為橙皮素[1]。見圖2。

采用類似及分析方法，通過比較檢測得到的母離子和二級質(zhì)譜信息[2-5]，鑒定峰8為柚皮素，峰16為刺芒柄花素，峰17為川陳皮素，峰18為3′，4′，5′，3，5，6，7-Heptamethoxyflavone，峰 19 為橘皮素，峰20為柚皮黃素，峰24為芹菜素，峰26為4′，5，7-Trimethoxyflavone，峰 27 為漢黃芹素。

3.2 苷類成分的鑒定 峰7（t=6．39）在ESI模式下得到 m/z 449．1787[M]+H（C21H21O11）與文獻(xiàn)報道的Cyanidin-3-galactoside分子式一致，其二級質(zhì)譜的到m/z287、177、315、245的碎片峰，與文獻(xiàn)報道的Cyanidin-3-galactoside的二級質(zhì)譜相一致，推測它為Cyanidin-3-galactoside[6]。見圖3。

采用類似及分析方法，通過比較檢測得到的母離子和二級質(zhì)譜信息[7-9]，鑒定峰12為Catechin 7-glucoside，峰 13 為 Cyanidin-3-malonylglucoside，峰14為野櫻苷，峰28為芹菜苷。

3.3 酸類成分的鑒定 峰30（t=39．43）在ESI模式下得到 m/z171．1495[M]+H（C7H6O5）與文獻(xiàn)報道的沒食子酸分子式一致，其二級質(zhì)譜的到m/z153，125的碎片峰，與文獻(xiàn)報道的沒食子酸的二級質(zhì)譜相一致，推測它為沒食子酸[10-11]。見圖4。

采用類似及分析方法，通過比較檢測得到的母離子和二級質(zhì)譜信息[12]，鑒定峰6為去氫土莫酸。

3.4 生物堿類成分的鑒定 峰15（t=11．59）在ESI模式下得到 m/z246．2429[M]+（C14H18N2O2）與文獻(xiàn)報道的刺桐堿分子式一致，其二級質(zhì)譜的到m/z229、188、129、101、115的碎片峰，與文獻(xiàn)報道的刺桐堿的二級質(zhì)譜相一致，推測它為刺桐堿[13]。見圖5。

采用類似及分析方法，通過比較檢測得到的母離子和二級質(zhì)譜信息，鑒定峰1為去3-formylindole，峰 2、3、4 為 4-（6-Ethyl-4-phenylquinolin-2-yl）phthalonitrile 或其異構(gòu)體，峰 5 為 C24H28N4O4，峰29 為 3-（O-Tolyl）pyridine。

3.5 其他成分的鑒定 峰 10（t=7．23）在 ESI模式下得到 m/z465．2940[M]+（ C21H21O12）與文獻(xiàn)報道的Delphinidin 3-O-β-glucopyranoside分子式一致，其二級質(zhì)譜的到m/z303，153的碎片峰，與文獻(xiàn)報道的Delphinidin 3-O-β-glucopyranoside的二級質(zhì)譜相一致，推測它為 Delphinidin3-O-β-glucopyranoside[14]。見圖6。

采用類似及分析方法，通過比較檢測得到的母離子和二級質(zhì)譜信息[9，15]，鑒定峰 11 為 C6H11O4，鑒定峰 22為 C16H23O4，鑒定峰 23為 chrysoeriol，鑒定峰 25 為 C8H5O3。

4 討論

采用HPLC-LTQ/Orbitrap MS法從四味脾胃舒顆粒樣品中共分析出30個成分，鑒定了26個化合物，按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類主要分為黃酮類成分（橙皮素、柚皮素、刺芒柄花素）、苷類成分（Cyanidin 3-galactoside、野櫻苷、芹菜苷）、酸類成分（去氫土莫酸、沒食子酸）、生物堿類成分（刺桐堿、3-formylindole）等成分。其中主要為黃酮類成分和苷類成分。

四味脾胃舒顆粒是由4味中藥組成，包括茯苓、雞矢藤、陳皮、山楂。參考文獻(xiàn)及根據(jù)本實驗測定分析結(jié)果可推斷出一部分化學(xué)成分的藥材來源。茯苓中富含有機(jī)酸類成分，可推斷去氫土莫酸應(yīng)為茯苓中的成分；陳皮中富含黃酮類成分，可推斷橙皮素、柚皮素、川陳皮素、橙皮苷等成分為陳皮藥材中提取出來的成分；山楂中富含酚酸類成分，可推斷沒食子酸為山楂藥材中提取出來的成分；暫未推斷分析出雞矢藤中的化學(xué)成分。

表1 四味脾胃舒二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)Tab.1 Secondary MS data of alkaloids of Siwei Piweishu Granule

圖3 Cyanidin-3-galactoside質(zhì)譜裂解途徑Fig.3 MSfragmentationpathwayofCyanidin-3-galactoside

圖4 沒食子酸質(zhì)譜裂解途徑Fig.4 MS fragmentation pathway of Gallic acid

圖5 刺桐堿質(zhì)譜裂解途徑Fig.5 MS fragmentation pathway of Hypaphorine

圖6 Delphinidin 3-O-β-glucopyranoside質(zhì)譜裂解途徑Fig.6 MS fragmentation pathway of Delphinidin 3-O-β-glucopyranoside

四味脾胃舒顆粒具有健脾和胃，消食的功效，這提示其成分應(yīng)能對胃腸道功能有促進(jìn)作用。研究表明[16-18]，橙皮苷、柚皮苷等黃酮類成分均可改善功能性消化不良大鼠的胃排空和小腸推進(jìn)，其中橙皮苷促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn)作用可能與其增加胃動素的分泌有關(guān)。本研究的完成，在一定程度上對四味脾胃舒顆粒的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了闡明，為其深層次的研究開發(fā)提供了科學(xué)基礎(chǔ)。