王志博，姜 楠，殷坤山，唐美君，李 紅，肖 強(qiáng)*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 茶葉研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部茶葉質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310008；2.中國科學(xué)院 動物研究所 動物進(jìn)化與系統(tǒng)學(xué)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101）

蕾宙尺蛾Coremecis leukohyperythra(Wehrli,1925)又名蕾佧尺蛾，屬鱗翅目（Lepidoptera）、尺蛾科（Geometridae）、灰尺蛾亞科（Ennominae）、宙尺蛾屬（Coremecis），分布于我國浙江、湖南、福建、廣東、江西等?。▍^(qū)）[1-2]，目前尚無寄主信息記錄。2018年5月，筆者在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所（浙江杭州）茶園中調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)了一種取食茶樹葉片的尺蠖幼蟲。室內(nèi)飼養(yǎng)后，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為蕾宙尺蛾（Coremecis leukohyperythra），是茶樹害蟲新紀(jì)錄[3-6]。本研究進(jìn)一步觀察描述了形態(tài)及生物學(xué)特征，以期為田間防治工作奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源

供試蟲源分別于5月和7月從浙江省杭州市中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所茶園采集，置于室內(nèi)養(yǎng)蟲籠中用茶樹嫩葉飼養(yǎng)至化蛹、羽化。飼養(yǎng)條件：溫度（25±1）℃，光周期為13 h/11 h（L/D）；相對濕度為75%～80%[7]。成蟲展翅制作成干制針插標(biāo)本保存在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所標(biāo)本室。成蟲分別檢視了中國科學(xué)院動物研究所動物標(biāo)本館以及德國波恩動物學(xué)博物館的標(biāo)本。

1.2 形態(tài)特征觀察

1.2.1 形態(tài)學(xué)觀察

田間采集的幼蟲進(jìn)行室內(nèi)飼養(yǎng)，使用Olympus SZ11 解剖鏡觀察幼蟲、蛹及成蟲的形態(tài)特征并進(jìn)行記錄描述。

1.2.2 外生殖器解剖

成蟲外生殖器解剖方法參照姜楠[1]的方法。成蟲生殖器玻片使用OLYMPUS 顯微成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照。成蟲外生殖器結(jié)構(gòu)術(shù)語參照《中國動物志》[8]。

1.3 生物學(xué)特性觀察

室內(nèi)飼養(yǎng)觀察幼蟲取食為害茶葉特點(diǎn)，記錄發(fā)生時(shí)間及歷期。

1.4 DNA 條形碼鑒定

1.4.1 DNA 提取及CO Ⅰ基因擴(kuò)增

飼養(yǎng)羽化的成蟲，取中足和后足各一個(gè)作為供試樣品編號為la151，通過測定線粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ（CO Ⅰ）序列進(jìn)行DNA 條形碼鑒定。具體方法如下，使用天根試劑盒提取基因組DNA, 擴(kuò)增及測序使用的引物為LepF1（5'-ATTCAACCAATCATAAAGATATT GG-3'）和Enh_LepR1（5'-CTCCWCCAGCAGG ATCAAAA-3'）。PCR使用浙江擎科生物公司的MIX試劑，PCR 反應(yīng)條件為 95℃預(yù)變性2 min；95℃變性30 s，46℃退火1 min，72℃延伸30 s，5個(gè)循環(huán)；95℃變性30 s，51℃退火1 min，72℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)，最后72℃終延伸10 min。PCR 產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠檢測，之后由尚亞公司的ABI 3730 測序儀進(jìn)行雙向測序[9]。

1.4.2 序列分析和聚類樹構(gòu)建

通過軟件Seqman 5.01（DNASTAR，Inc.1996）進(jìn)行雙向測序結(jié)果的拼接。獲得長度為636 bp 的DNA 條形碼序列。將序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行 BLAST 序列比對，根據(jù)序列一致性確定對應(yīng)的物種。進(jìn)一步選取其他茶樹尺蛾類害蟲序列使用Clustal 1.83 軟件進(jìn)行序列比對[10]。使用MEGA 5.0 軟件基于K2P 模型（Kimura-2-parameter distance）計(jì)算種間遺傳距離。使用MEGA 5.0 軟件基于K2P 模型構(gòu)建 NJ 樹[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)特征

成蟲：雄蟲前翅長16～20 mm，雌蟲前翅長20～22 mm。翅面淺褐色；外線外側(cè)顏色略深。前翅內(nèi)線為黑色雙線，向內(nèi)傾斜，僅下半段清楚；中點(diǎn)淺灰色，模糊；外線黑色，弱鋸齒狀，在M 脈間向外凸出；亞緣線灰白色，鋸齒狀；亞緣線與外線之間在M 3 和CuA 2 之間具1 黑褐色斑；緣線在脈間呈黑褐色短條狀；緣毛褐色摻雜黑褐色。后翅基部黑色；中線黑色，平直；外線黑色，弱鋸齒狀；亞緣線會白色，后半部分較清楚且內(nèi)側(cè)具深色帶；其余斑紋與前翅相似。雌蟲翅面斑紋與雄蟲區(qū)別：前翅內(nèi)線近弧形；前翅外線內(nèi)側(cè)和后翅中線內(nèi)側(cè)顏色淺；前翅頂角和亞緣線外側(cè)在CuA1 和CuA2 之間具灰白色斑（圖1A，圖1B）。

雄性外生殖器：鉤形突半圓形，端部中央具1 細(xì)突；顎形突中突發(fā)達(dá)，近三角形；抱器瓣端部窄且鈍圓；抱器背近中部向外凸出；抱器腹端部骨化條僅端半部具短刺，基部不具指狀突。陽端基環(huán)基半部半圓形，端半部窄；囊端部圓；陽莖后半端形成1 對端部漸細(xì)的骨化突；角狀器為1 橢圓形刺狀斑（圖1C）。

雌性外生殖器：前陰片為長三角形；后陰片近方形，長度較前陰片短；囊導(dǎo)管短，具骨環(huán)；囊體長，后端弱骨化；囊片新月狀。（圖1D）。

幼蟲：老熟幼蟲體長23～25 mm，頭頂平，尾端也較平，著生灰白色短毛。體土黃色，胸節(jié)背面中央各有兩條小縱紋，腹部各節(jié)背面有大的菱形斑塊，以前面三節(jié)上的較明顯，后漸模糊；各節(jié)有兩對黑點(diǎn)，其中后面一對較大而明顯，兩點(diǎn)間相距稍遠(yuǎn)（圖2A、圖2B）。

蛹：長10～14mm，赭褐色，形狀與茶尺蠖蛹相似（圖2C、圖2D）。

2.2 生活史及習(xí)性

蕾宙尺蛾以何蟲態(tài)越冬不詳。在浙江杭州，每年4月中、下旬第1 代幼蟲發(fā)生，5月中、下旬化蛹，5月下旬至6月上旬成蟲羽化。第2、3 代幼蟲分別發(fā)生在6月中旬和7月下旬。據(jù)推算，一年可發(fā)生4、5 代。低齡幼蟲取食嫩葉，成長后取食成葉和老葉，一般分布在茶叢上層。幼蟲老熟后在茶叢根際附近淺土中作一土室，化蛹于其中。

2.3 分子鑒定

將測序結(jié)果上傳GenBank 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST 比對。結(jié)果顯示，該蟲與數(shù)據(jù)庫中蕾宙尺蛾（Coremecis leukohyperythra）的CO I 基因（GenBank: KX951551.1）序列相似度高達(dá)100%。參考張漢鵠[10]茶樹尺蛾類害蟲名錄結(jié)合NCBI數(shù)據(jù)庫已有序列，篩選20種茶樹尺蛾類害蟲進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析（表1）。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn) 樣 品la151 與Coremecis leukohyperythra聚類在一起（圖3），兩者遺傳距離為0。DNA barcoing 技術(shù)鑒定結(jié)果支持實(shí)驗(yàn)樣品為蕾宙尺蛾（Coremecis leukohyperythra）。

圖1 蕾宙尺蛾成蟲及外生殖器形態(tài)特征Fig.1 The morphological characters of adult and genitalia of Coremecis leukohyperythra

圖2 蕾宙尺蛾幼蟲及蛹形態(tài)特征Fig.2 The morphological characters of adult and genitalia

表1 系統(tǒng)發(fā)育樹中尺蛾科茶樹害蟲名稱及CO I 基因GenBank 登錄號Table 1 Name and GenBank number of Geometrid moth tea pest in phylogenetic tree

3 討論

宙尺蛾屬（Coremecis）全世界共有6種，主要分布在中國、印度及東南亞等地區(qū)[1,11-12]。其中有兩個(gè)種分布在中國，分別為黑斑宙尺蛾（Coremecis nigrovittata）(Moore, 1868) 和蕾宙尺蛾（Coremecis leukohyperythra）。蕾宙尺蛾分布范圍比黑斑宙尺蛾要小，僅分布中國的浙江、湖南、廣東、福建等地區(qū)；而黑斑宙尺蛾除了中國湖南、湖北、福建、廣東、云南和西藏等省區(qū)外，在印度、尼泊爾、泰國和越南也有分布[1]。目前，黑斑宙尺蛾并無寄主記錄，按照其分布及與蕾宙尺蛾的親緣關(guān)系推測，黑斑宙尺蛾存在為茶樹害蟲的可能性，仍需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

在此之前，蕾宙尺蛾的寄主和食性尚無記錄。本研究明確了蕾宙尺蛾為一種茶樹害蟲，主要通過幼蟲取食茶樹葉片進(jìn)行為害。該尺蛾分布的四個(gè)省均為我國主要的產(chǎn)茶區(qū)，因此，應(yīng)該引起茶樹植保工作者的關(guān)注。

圖3 基于CO I 序列和K2P 模型構(gòu)建的NJ 樹Fig.3 Neighbour-Joining (NJ) tree based on CO I sequences and Kimura-2-parameter model with bootstrap percentages shown on the clades