張明，吳茂玉，楊立風(fēng)，王崇隊(duì)，張博華，范祺，孟曉峰，馬超

（中華全國(guó)供銷(xiāo)合作總社濟(jì)南果品研究院，山東濟(jì)南250014）

靈芝孢子（Ganoderma lucidumspores）是靈芝生長(zhǎng)成熟期從菌蓋彈射出來(lái)的擔(dān)孢子，是靈芝的生殖細(xì)胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)；富含蛋白質(zhì)和氨基酸類、糖肽類、三萜類物質(zhì)，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保肝和降血糖等功能[1，2]。

野生的靈芝孢子粉由于風(fēng)吹雨淋等自然因素的影響，難以收集。目前靈芝的種植以人工栽培為主，我國(guó)靈芝種植主要分為四大種植區(qū)域，分別為閩浙的武夷山及龍泉區(qū)域、東北吉林長(zhǎng)白山區(qū)域、安徽一帶大別山區(qū)域和山東魯西區(qū)域，這四大區(qū)域的孢子粉產(chǎn)量占全國(guó)總產(chǎn)量的60%以上。靈芝孢子有一層極難被人體胃酸消化的幾丁質(zhì)和葡聚糖構(gòu)成的外壁，不破壁的孢子粉人體無(wú)法消化吸收，目前靈芝孢子破壁技術(shù)有生物酶解法、化學(xué)法、物理法等[3，4]。受栽培方式、栽培環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)供給形式、采收時(shí)間、加工手段、儲(chǔ)藏方式等諸多因素的影響，靈芝孢子粉的品質(zhì)差別較大。如何準(zhǔn)確鑒別靈芝孢子粉品質(zhì)，保證產(chǎn)品質(zhì)量，是破壁靈芝孢子粉產(chǎn)業(yè)亟待解決的難題。

本研究在前期調(diào)研的基礎(chǔ)上，從我國(guó)靈芝孢子粉四大主產(chǎn)區(qū)共遴選出9個(gè)樣品，分別對(duì)其感官品質(zhì)、物理特性、理化指標(biāo)、主要成分含量及抗氧化活性等指標(biāo)進(jìn)行了分析，以期為破壁靈芝孢子粉產(chǎn)品品質(zhì)的鑒別提供指導(dǎo)和借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)材料為不同產(chǎn)地的靈芝孢子粉，DJ101、DJ102、DJ103、DH101采自大別山地區(qū)；SG101采自山東魯西地區(qū)；WL103、WL119、WH101 采自武夷山地區(qū)；CD101 采自長(zhǎng)白山地區(qū)。

熱風(fēng)循環(huán)烘箱，RXH-B-1，江陰市宏達(dá)粉體設(shè)備有限公司；高速臺(tái)式離心機(jī)，TGL-10B，上海安亭科學(xué)儀器廠；激光粒度分布儀，BT-9300H，丹東百特儀器有限公司；測(cè)色色差計(jì)，WSC-S，上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司；數(shù)碼顯微鏡，Motic BA310 Digital，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；馬弗爐，SX-2.5-10D，天津泰斯特儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

靈芝孢子粉經(jīng)風(fēng)選、干燥、破壁處理、包裝、滅菌等工藝加工制成破壁靈芝孢子粉。

1.2.1 破壁靈芝孢子粉物理性質(zhì)分析

（1）色澤

采用測(cè)色色差計(jì)測(cè)定9種破壁靈芝孢子粉的色澤[5]，用CIELAB表色系統(tǒng)測(cè)定破壁靈芝孢子粉的L*、a*和b*值，其中L*代表明度指數(shù)，從黑暗（L*=0）到明亮（L*=100）的變化；a*代表顏色從綠色（-a*）到紅色（+a*）的變化，b*代表顏色從藍(lán)色（-b*）到黃色（+b*）的變化。

（2）粒徑和比表面積

采用激光粒徑分布儀測(cè)定9種破壁靈芝孢子粉的粒徑分布和比表面積。以異丁醇為沉降介質(zhì)，首先進(jìn)行空白標(biāo)定，要求背景值在2.0以內(nèi)，取少許樣品，緩慢進(jìn)樣，待遮光率達(dá)到10%～20%區(qū)間范圍內(nèi)，停止進(jìn)樣，開(kāi)啟超聲，超聲分散30 s后，測(cè)定粒徑和比表面積，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定10次[5]。

（3）破壁率

參照《破壁靈芝孢子粉破壁率測(cè)定》（NY/T 1677-2008）中的方法進(jìn)行測(cè)定[6]。

（4）松密度、堆積密度

松密度：準(zhǔn)確稱取5 g粉體（m），將其小心轉(zhuǎn)入50 mL量筒中，水平方向輕搖量筒，使粉體上表面盡量平整，記錄此時(shí)粉體的體積V[7]，計(jì)算公式見(jiàn)式（1）。

堆積密度：準(zhǔn)確稱取5 g粉體（m1），轉(zhuǎn)入50 mL量筒中，盡量減少筒壁粘連，充分振實(shí)，直至量筒內(nèi)粉體體積不再變化，讀取粉體體積（V1），重復(fù)測(cè)定3次，取平均值，計(jì)算公式見(jiàn)式（2）。

1.2.2 破壁靈芝孢子粉營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)分析

（1）灰分測(cè)定

按照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 5009.4-2016）《食品中灰分的測(cè)定》第一法測(cè)定[8]。

（2）粗多糖測(cè)定

參照《保健食品功效成分檢測(cè)方法》中的“粗多糖的測(cè)定方法”（以葡聚糖計(jì)）進(jìn)行測(cè)定[9]。

（3）脂肪測(cè)定

按照GB 5009.6-2016《食品中脂肪的測(cè)定》第二法進(jìn)行測(cè)定[10]。

1.2.3 破壁靈芝孢子粉抗氧化活性分析

（1）DPPH自由基清除能力

取2 mL樣品溶液，與2 mL、0.4 mmol/L的DPPH溶液充分混勻，避光靜置30 min，于517 nm處測(cè)吸光度A1。同理測(cè)定2 mL樣品溶液與2 mL無(wú)水乙醇充分混勻后的吸光度A2以及2 mL蒸餾水與2 mL DPPH溶液充分混勻后的吸光度A0。以蒸餾水進(jìn)行空白校正[11]，計(jì)算公式見(jiàn)式（3）。

（2）-OH自由基清除能力

取1 mL樣品溶液，依次加入1 mL 8 mmol/L的FeSO4溶液，1 mL 8 mmol/L的水楊酸-乙醇溶液，1 mL 8 mmol/L的H2O2溶液?；靹蚝箪o置1 h，于510 nm處測(cè)吸光度A'1。同時(shí)用蒸餾水代替樣品溶液測(cè)得吸光度A'0，用蒸餾水代替H2O2溶液測(cè)得吸光度A'2[12]，計(jì)算公式見(jiàn)式（4）。

（3）還原能力

取1 mL樣品溶液，加入0.2 mL的0.2 mol/L的磷酸鹽緩沖溶液和0.5 mL 1%的K3[Fe(CN)6]溶液?；靹蚝?0℃反應(yīng)20 min，冷卻。再加入1 mL 10%三氯乙酸溶液、0.2 mL、0.1%FeCl3溶液和3 mL的蒸餾水混勻，靜置5 min，700 nm處測(cè)吸光度Ai。用蒸餾水代替樣品溶液測(cè)得吸光度Ac，用蒸餾水代替K3[Fe(CN)6]溶液測(cè)得吸光度Aj[13]，計(jì)算公式見(jiàn)式（5）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用SPSS進(jìn)行ANOVA單因素方差分析和Ducan's多重檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉物理性質(zhì)比較

2.1.1 破壁靈芝孢子粉色澤比較

破壁靈芝孢子粉呈深棕褐色。由表1可知，L*值從大 到 小 依 次 為 WH101、CD101、DJ103、WL103、DJ102、DJ101、DH101、SG101、WL119，WH101 亮度最大，其次是CD101，WL119色澤最深。a*值大小依次為WL119、SG101、DJ101、WL103、WH101、DJ103、DH101、CD101、DJ102，說(shuō)明WL119偏紅程度最大，SG101、DJ101次之，DJ102紅色最淺。b*值中DJ102、DH101值較高，說(shuō)明偏黃程度較大。破壁靈芝孢子粉色澤除受原料品種影響外，破壁、干燥等加工過(guò)程對(duì)其也有較大影響，總體來(lái)看，WL119、SG101、DJ101等粉體色澤品質(zhì)較好。

表1 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉色澤比較Table 1 Comparison of the pink color of brokenGanoderma lucidumspores produced from different origin raw materials

表2 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉粒徑、比表面積及破壁率比較Table 2 Comparison of particle size,specific surface area and breaking rate of spore powder of brokenGanoderma lucidum from different origin raw materials

2.1.2 破壁靈芝孢子粉粒徑、比表面積及破壁率比較

D10、D50、D90分別表示粉體粒徑小于某一值時(shí)累計(jì)率為10%、50%、90%，其中D50為粒徑的中值，又稱中位徑或平均粒徑，最具代表性。9種粉體的粒徑分析結(jié)果如表2所示，由表可知，9種干燥粉體D50大小依次為CD101>DJ103>WL119>SG101>WL103>DH101>DJ102>WH101>DJ101?？缍扔糜诒碚鞣垠w粒度分布的寬度，跨度越大，粒度分布越分散[14]。由表2可以看出，CD101粉體最為分散，DJ102跨度最小，粉體分布較均勻。DJ101比表面積最大，WH101次之，DJ103最小。破壁率均在95%以上，DJ101、DJ102、SG101、WH101 破壁效果較好。

2.1.3 松密度

松密度是反映粉體充填性的評(píng)價(jià)指標(biāo)，在片劑和膠囊劑的裝填過(guò)程中具有重要意義，松密度越大越有利于粉末的充填[15]。圖1顯示了我國(guó)不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉體松密度的對(duì)比，由圖可知，松密度由大到小依次為 DJ101、CD101、WL103、SG101、WL119、WH101、DJ102、DJ103、DH101。其中 DJ101、CD101 松密度較高，更有利于作為膠囊劑等產(chǎn)品的充填原料，DH101充填效果最差。

圖1 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉松密度比較Fig.1 Comparison of loose density of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

2.1.4 堆積密度

圖2 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉堆積密度對(duì)比Fig.2 Comparison of bulk density of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

堆積密度影響壓片成型，研究表明，堆積密度越大，越有利于壓片成型[16]。由圖2可知，堆積密度大小依次為CD101>DJ101>WL103>WL119>WH101>DJ102>SG101>DJ103>DH101。其中CD101、DJ101堆積密度較高，更有利于壓片成型，DH101較其他樣品較難壓片。

2.2 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)分析

2.2.1 灰分

圖3 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉灰分對(duì)比Fig.3 Comparison of ash content of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

灰分是標(biāo)示食品中無(wú)機(jī)成分總量的一項(xiàng)指標(biāo)，也是鑒別產(chǎn)品潔凈度、摻假等行為的重要指標(biāo)。由圖3可知，灰分大小依次為DH101>WL103>WL119>WH101>DJ101>SG101>DJ102>DJ103>CD101。其中DH101灰分值最大，為 1.1 g/100 g，CD101 最低，為 0.72 g/100 g，所有樣品均符合藥典規(guī)定的小于或等于3.2 g/100 g的要求。

2.2.2 多糖含量

圖4 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉粗多糖含量對(duì)比Fig.4 Comparison of Crude polysaccharide content of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

靈芝多糖是破壁靈芝孢子粉最主要的活性成分之一，具有降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種保健功能[17]。圖4為我國(guó)不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉粗多糖含量的對(duì)比，由圖可知，多糖含量大小依次為DJ103>SG101>DH101>DJ102>WL103>CD101>WH101>DJ101>>WL119。其中DJ103粗多糖含量最高，為1.38 g/100 g，SG101次之，WL119含量最低，為0.79 g/100 g。

2.2.3 脂肪含量

圖5 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉脂肪含量對(duì)比Fig.5 Comparison of Fat content of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

靈芝孢子粉內(nèi)脂肪類物質(zhì)主要為脂肪酸、三萜類等成分，是破壁靈芝孢子粉含量最為豐富的主要活性成分之一，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等功效[18]。圖5為我國(guó)不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉粗脂肪含量對(duì)比，由圖可知，粗脂肪含量由大到小依次為 SG101、DJ103、DH101、DJ102、WH101、DJ101、CD101、WL103、WL119。其中SG101粗脂肪含量最高，為32.67%，DJ103次之，WL119含量最低，為27.33%。

2.3 破壁靈芝孢子粉抗氧化活性比較

2.3.1 DPPH自由基清除率

圖6（見(jiàn)下頁(yè)）為9種破壁靈芝孢子粉對(duì)DPPH自由基清除能力對(duì)比，由圖可知，DPPH自由基清除能力對(duì)比由大到小依次為 DJ102、SG101、CD101、WL103、DH101、DJ101、DJ103、WL119、DH101、WH101。其中 DJ102 樣品對(duì)DPPH自由基清除能力最強(qiáng)，清除率達(dá)72.55%，SG101次之，WH101清除能力最弱，清除率為57.89%。

圖6 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉對(duì)DPPH自由基清除率對(duì)比Fig.6 Comparison of DPPH free radical scavenging rate of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

2.3.2 -OH自由基清除率

羥基自由基被認(rèn)為是毒性最強(qiáng)的活性氧自由基，輻射、損傷等理化因素都會(huì)促進(jìn)它的形成，是造成生物有機(jī)體過(guò)氧化損傷的主要因素[19]。9種破壁靈芝孢子粉對(duì)-OH自由基清除能力如圖7所示，由圖可知，-OH自由基清除能力由大到小依次為DJ103、WH101、WL119、WL103、DH101、DJ102、CD101、DJ101、SG101。其中 DJ103樣品對(duì)-OH自由基清除能力最強(qiáng)，清除率為33.44%；WH101、WL119次之，SG101清除能力最弱，清除率為10.09%。

圖7 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉對(duì)-OH自由基清除率對(duì)比Fig.7 Comparison of-OH free radical scavenging rate of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

2.3.3 還原能力

抗氧化劑的還原力與其抗氧化活性之間存在聯(lián)系。抗氧化劑是通過(guò)自身的還原作用給出電子，從而清除自由基，還原力越大，抗氧化性越強(qiáng)[20]。圖8為9種破壁靈芝孢子粉還原能力的對(duì)比，由圖可知，供試樣品中還原能力 由 大 到 小 依 次 為 DJ102、DJ103、WL103、SG101、CD101、DJ101、WH101、DH101、WL119。其中 DJ102 樣品還原能力最強(qiáng)，達(dá)46.4%，DJ103次之，WL119還原能力最弱，為37%。

圖8 不同產(chǎn)地原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉還原能力對(duì)比Fig.8 Comparison of reducing ability of brokenGanoderma lucidumspore powder from different origin raw materials

3 小結(jié)

通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)區(qū)原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉的物理、營(yíng)養(yǎng)及抗氧化活性等特癥。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我國(guó)四大靈芝產(chǎn)區(qū)中，大別山產(chǎn)區(qū)、長(zhǎng)白山產(chǎn)區(qū)原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉松密度、堆積密度較高，更有利于作為片劑、膠囊劑等產(chǎn)品的加工原料；大別山產(chǎn)區(qū)原料生產(chǎn)的破壁靈芝孢子粉粗多糖含量（以葡聚糖計(jì)）最高，為1.38 g/100g，且抗氧化能力最強(qiáng)，其中DPPH自由基清除能力、-OH自由基清除能力、還原能力最高分別可達(dá)72.55%、33.44%，46.4%。