王鵬飛，代玲敏，王珊，李廷剛，任鳳山*，王詠梅*

（1. 山東省葡萄研究院/山東省葡萄栽培與精深加工工程研究中心，山東濟(jì)南 250100；2. 濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東煙臺(tái) 264000；3. 農(nóng)業(yè)部華東都市農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南 250100）

在植物中，WRKY蛋白家族是一個(gè)大的轉(zhuǎn)錄因子家族[1-4]，在大多數(shù)物種中都能被發(fā)現(xiàn)，例如玉米、水稻、擬南芥等[5-6]。WRKY蛋白家族成員參與許多生物脅迫與非生物脅迫的響應(yīng)[7-8]，參與葉片的衰老過程[9-10]、激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[11-12]以及種子發(fā)育[13]。目前很多研究證實(shí)，VQ motif-containing蛋白可以與WRKY轉(zhuǎn)錄因子物理互作[14-15]，在植物生長發(fā)育及壓力響應(yīng)中發(fā)揮重要作用[16]。VQ motif-containing蛋白家族成員是一種植物特異蛋白，每個(gè)成員都含有一段高度保守的含有10個(gè)氨基酸短基序FxxhVQxhTG（h：疏水氨基酸；x：任何氨基酸）motif，這段短基序包含F(xiàn)、V、Q、T以及G五個(gè)保守氨基酸殘基。VQ motif-containing蛋白是通過V和Q這兩個(gè)保守的氨基酸殘基與WRKY轉(zhuǎn)錄因子蛋白互作[17]。

第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的VQ motif-containing蛋白含有222個(gè)氨基酸殘基，后來在其他雙子葉和單子葉植物中也陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了該蛋白的同源蛋白。這些蛋白都被發(fā)現(xiàn)含有這個(gè)保守的FxxhVQxhTG基序，因而這些蛋白家族成員最后被命名為VQ motif-containing蛋白[18]。第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的擬南芥VQ motif-containing蛋白MKS被證實(shí)可以與擬南芥AtWRKY25和AtWRKY33蛋白互作形成復(fù)合體。而這個(gè)復(fù)合體涉及植物防御反應(yīng)的調(diào)控[18]。在正常生長條件下，擬南芥MPK4蛋白通過與WRKY33和MKS蛋白互作形成復(fù)合物定位在細(xì)胞核中。而在假單胞菌感染或鞭毛蛋白處理的條件下，MPK4會(huì)使MKS蛋白磷酸化，從而釋放WRKY33蛋白，參與生物脅迫的抵御[18-19]。而擬南芥AtVQ29可以與一種bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族成員PHYTOCHROMEINTERACTING FACTOR1（PIF1）互作，從而作為光介導(dǎo)抑制下胚軸伸長的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子[20]。

很多物種中的VQ motif-containing蛋白被證實(shí)參與生物脅迫的抵御。例如擬南芥的AtVQ23（SIB1）和AtVQ16（SIB2）蛋白通過與AtWRKY33互作參與植物生物脅迫防御[21]。水稻中多種VQ motif-containing蛋白在稻黃單胞菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）和稻瘟病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzicola）感染后表達(dá)發(fā)生顯著變化[22]。擬南芥中VQ motif-containing蛋白AtVQ12和AtVQ29蛋白在植株防御灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）的感染中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用[23]。很多VQ motifcontaining蛋白被證實(shí)也參與植物非生物脅迫響應(yīng)。例如擬南芥VQ9蛋白可作為AtWRKY8轉(zhuǎn)錄因子的抑制因子，維持AtWRKY8介導(dǎo)的鹽脅迫耐受通路[24]。擬南芥中AtVQ15蛋白可以負(fù)調(diào)控植株對(duì)鹽與滲透壓力的耐受[25]。此外，很多VQ motif-containing蛋白被證實(shí)可以調(diào)控植物發(fā)育過程，例如擬南芥AtVQ14（IKU1）被證實(shí)在種子發(fā)育中發(fā)揮關(guān)鍵的作用[26]。

本研究將從全基因范圍鑒定葡萄VQ motif-containing蛋白家族基因并分析其蛋白結(jié)構(gòu)、在各種生物和非生物脅迫下的表達(dá)模式、進(jìn)化中受到的選擇壓力。并利用生物信息學(xué)方法預(yù)測葡萄VQ motif-containing蛋白成員的亞細(xì)胞定位及其互作蛋白。

1 材料與方法

1.1 VQ motif-containing蛋白家族成員的鑒定

葡萄的蛋白序列從最新版本葡萄基因組數(shù)據(jù)庫（V2.0）中獲得（http://www.genoscope.cns.fr/externe/GenomeBrowser/Vitis/）。用HMMER軟件，基于VQ motif結(jié)構(gòu)域（Pfam ID: PF05678）的隱馬克夫模型（Hidden Markov Model，HMM），搜索葡萄中全部的VQ motif-containing蛋白，從而鑒定葡萄VQ motifcontaining蛋白家族基因。利用在線軟件SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/）來確定這些搜索到的蛋白是否具有完整的VQ motif結(jié)構(gòu)域，如不含有完整的VQ motif結(jié)構(gòu)域則被篩除。

1.2 VQ motif-containing 蛋白家族成員的亞細(xì)胞定位方法

利用ProtComp 9.0軟件（http://linux1.softberry.com/berry.phtml?topic=protcomppl&group=programs&subgrou p=proloc）預(yù)測VQ motif-containing蛋白家族成員的亞細(xì)胞定位；利用cNLS Mapper軟件（http://nls-mapper.iab.keio.ac.jp/cgi-bin/NLS_Mapper_form.cgi）分析這些成員的核定位信號(hào)；用TMHMM2.0軟件（http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）分析這些成員的跨膜結(jié)構(gòu)域。

1.3 多重序列比對(duì)與進(jìn)化樹分析

利用ClustalX2.0軟件進(jìn)行蛋白多重序列比對(duì)分析；用PHYLIP軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，方法為鄰接法（Neighbor-Joining tree）[27]。

1.4 基因表達(dá)分析

芯片表達(dá)譜結(jié)果的MAS5-calculated signal intensity value作為標(biāo)準(zhǔn)化的基因表達(dá)量。非生物脅迫處理包括1 h、4 h、8 h、24 h的鹽脅迫處理，1 h、4 h、8 h的冷脅迫處理，以及1 h、4 h、8 h、24 h的PEG模擬干旱處理。表達(dá)譜數(shù)據(jù)來源于NCBI的GEO數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE31594），數(shù)據(jù)登記號(hào)為GSE31594。脫落酸（ABA）處理時(shí)間包括3 d和10 d。表達(dá)譜數(shù)據(jù)來源于NCBI的GEO數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE31662），數(shù)據(jù)登記號(hào)為GSE31662。白粉病感染材料包括易感病的‘赤霞珠’葡萄（Cabernet sauvignon）以及抗白粉病能力較強(qiáng)的‘諾頓’（Norton）葡萄。表達(dá)譜數(shù)據(jù)來源于于NCBI的GEO數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE6404），數(shù)據(jù)登記號(hào)為GSE6404。GLRaV-3兼容性病毒病感染下表達(dá)譜數(shù)據(jù)來源于Plant Expression Database數(shù)據(jù)庫（http://www.plexdb.org/modules/PD_browse/experiment_browser.php）。不同樣本中表達(dá)差異倍數(shù)大于1.5且t-testP＜0.05的基因被認(rèn)為是差異基因。

1.5 蛋白互作分析

蛋白互作預(yù)測軟件STRING（https://string-db.org/）分析VQ motif-containing蛋白家族成員之間及與葡萄中其他蛋白之間的互作。

1.6 選擇壓力分析

Codeml program under PAML (version 4.7 software)[28]分析葡萄VQ motif-containing蛋白基因在進(jìn)化過程中受到的選擇壓力。使用軟件中的3個(gè)位點(diǎn)模型分析：M0（one ratio）用于分析整體受到的選擇壓力，M7（beta）vs M8（beta and ω）模型被用于鑒定正向選擇位點(diǎn)[29]。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄VQ motif-containing蛋白基因的鑒定與進(jìn)化樹分析

本文共鑒定出18個(gè)葡萄VQ motif-containing蛋白家族成員（表1）。利用MEME軟件對(duì)這些VQ motifcontaining蛋白家族成員的VQ motif進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，葡萄VQ motif-containing蛋白家族最保守的VQ motif序列LOGO為“FRALVQELTG”。全部成員的VQ motif含有的VQ motif序列均為FxxhVQxhTG型短序列。其中蛋白序列最長的家族成員為VIT_218s0001g05400，含有4 6 4個(gè)氨基酸；蛋白序列最短的家族成員為VIT_214s0081g00190，含有110個(gè)氨基酸。

利用ProtComp 9.0軟件預(yù)測了這些家族成員的亞細(xì)胞定位。除了VIT_213s0084g00670能定位在過氧化物酶體和葉綠體里，其他都定位在細(xì)胞外。利用TMHMM2.0軟件對(duì)這些成員的跨膜結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了分析。膜定位分析顯示，這些成員都不能定位在膜上。而VIT_213s0084g00670可以在膜內(nèi)，其他成員都定位在膜外，利用cNLS Mapper軟件分析了這些成員的核定位信號(hào)，結(jié)果顯示這些成員都不包含核定位信號(hào)。

表1 葡萄VQ motif-containing蛋白基因IDTable 1 VQ motif-containing protein gene ID of grape

圖1 葡萄VQ motif-containing蛋白家族成員的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 1 Phylogenetic trees of grape VQ motf-containing protein family members

基于這18個(gè)葡萄VQ motif-containing蛋白家族成員的蛋白序列構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹。自舉值（boostrap value）大于700的分枝中含有的成員被分為一個(gè)亞家族。這18個(gè)成員一共被分為6個(gè)亞家族。VIT_208s0040g00540和VIT_212s0028g00500沒有被分在任何一個(gè)亞家族中，被認(rèn)為孤兒基因（圖1）。

2.2 葡萄VQ motif-containing蛋白基因在不同非生物脅迫、CBF轉(zhuǎn)基因植株及ABA處理后的表達(dá)

利用表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析了這些葡萄VQ motif-containing蛋白基因在不同非生物脅迫下的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，與對(duì)照相比，VIT_200s0304g00030基因在冷脅迫1 h和8 h后上調(diào)；VIT_200s0471g00020基因在鹽脅迫或PEG脅迫4 h后下調(diào)，而在鹽脅迫或PEG脅迫24 h后上調(diào)；VIT_201s0011g01350基因在1 h、4 h、8 h冷脅迫后均上調(diào)；VIT_201s0011g03650和VIT_202s0012g01280基因在鹽脅迫或PEG脅迫24 h后下調(diào)；VIT_204s0008g06930基因在冷脅迫1 h后上調(diào)；VIT_208s0007g05180在PEG脅迫24 h后上調(diào)；VIT_208s0040g00540基因在1 h、4 h、8 h冷脅迫后均上調(diào)；VIT_212s0028g00500基因在鹽脅迫或PEG脅迫24 h后上調(diào)；VIT_218s0166g00090基因在鹽脅迫24 h后下調(diào)；VIT_219s0014g02490基因冷脅迫4 h、8 h后下調(diào)；VIT_218s0001g05400基因在冷脅迫1 h、8 h后上調(diào)。

CBF4基因在葡萄抗逆途徑中起到關(guān)鍵的調(diào)控作用。為了研究葡萄VQ motif-containing蛋白基因是否受到CBF4基因調(diào)控，利用表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析了這些葡萄VQ motif-containing蛋白基因在過表達(dá)葡萄VvCBF4基因葡萄植株中的表達(dá)情況。轉(zhuǎn)基因砧木品種為‘自由’，表達(dá)譜數(shù)據(jù)來源于NCBI的GEO數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE29948），數(shù)據(jù)登記號(hào)為GSE29948。結(jié)果顯示，與野生型的‘自由’相比，轉(zhuǎn)基因葡萄植株中的VIT_200s0304g00030、VIT_201s0011g01350、VIT_204s0008g06930、VIT_208s0040g00540和VIT_218s0001g05400表現(xiàn)上調(diào)；VIT_200s0471g00020、VIT_202s0012g01280和VIT_219s0014g02490表現(xiàn)下調(diào)。

利用表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析了這些葡萄VQ motif-containing蛋白基因在ABA處理中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，相對(duì)于正常未處理的葡萄，VIT_200s0471g00020、VIT_201s0011g01350、VIT_208s0007g05180、VIT_212s0028g00500及VIT_213s0156g00160基因在ABA處理3 d和10 d的條件下均下調(diào)；而VIT_201s0011g03650和VIT_213s0084g00670基因在ABA處理3 d和10 d的條件下均上調(diào)；VIT_218s0166g00090基因在ABA處理3 d的條件下上調(diào)；VIT_208s0007g06470基因在ABA處理10 d的條件下均上調(diào)。

2.3 葡萄VQ motif-containing蛋白基因在不同生物脅迫中的表達(dá)

利用表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析了這些葡萄V Q m o t i fcontaining蛋白基因在GLRaV-3兼容性病毒病感染下的表達(dá)情況。表達(dá)譜數(shù)據(jù)來源于Espinoza等[30]的結(jié)果。結(jié)果顯示，與未感染病毒的對(duì)照植株相比，VIT_200s0304g00030、VIT_200s0471g00020、VIT_212s0028g00500、VIT_218s0166g00090、VIT_219s0014g02490及VIT_218s0001g05400基因均上調(diào)；VIT_201s0011g01350、VIT_201s0011g03650、VIT_208s0040g00540及VIT_213s0156g00160基因均相對(duì)于對(duì)照植株表達(dá)下調(diào)。

利用表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析了這些葡萄VQ motif-containing蛋白基因在白粉病感染下葡萄植株中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，相對(duì)于未感病的對(duì)照植株，在感病12 h時(shí)，VIT_200s0471g00020基因在‘赤霞珠’中表達(dá)下調(diào)，而VIT_200s0471g00020基因在‘諾頓’中表達(dá)也下調(diào)；VIT_201s0011g01350基因在感病12 h和48 h的‘赤霞珠’中表達(dá)上調(diào)，而在‘諾頓’中變化不顯著；VIT_208s0007g05180基因在感病24 h和48 h后的‘赤霞珠’中上調(diào)，‘諾頓’也均顯著上調(diào)；VIT_213s0156g00160基因在感病4 h的‘赤霞珠’中表達(dá)下調(diào)，在‘諾頓’葡萄中變化不顯著。

2.4 葡萄VQ motif-containing蛋白互作分析

蛋白互作軟件預(yù)測結(jié)果顯示，V Q m o t i fcontaining蛋白家族成員VIT_200s0471g00020能與另外7個(gè)VQ motif-containing蛋白家族成員互作，包括VIT_204s0008g06930、VIT_218s0001g06350、VIT_201s0011g03650、VIT_218s0166g00090、VIT_209s0002g07540、VIT_208s0007g06470和VIT_218s0001g05400。其中的家族成員間也有互作，如VIT_208s0007g06470可以與VIT_218s0166g00090互作，VIT_209s0002g07540可以與VIT_201s0011g03650和VIT_218s0001g06350互作，VIT_201s0011g03650可以與VIT_204s0008g06930互作，VIT_218s0001g06350可以與VIT_204s0008g06930互作。預(yù)測結(jié)果還顯示，VQ motif-containing蛋白家族成員VIT_213s0084g00670可以與WRKY家族蛋白VIT_208s0058g00690（WRKY33）、Sigma70_r2結(jié)構(gòu)域包含蛋白VIT_215s0024g00640、VIT_216s0050g02520及VIT_216s0039g00660互作；VQ motif-containing蛋白家族成員VIT_208s0007g05180也可與和WRKY家族蛋白VIT_208s0058g00690（WRKY33）、Sigma70_r2結(jié)構(gòu)域包含蛋白VIT_215s0024g00640、VIT_216s0050g02520及VIT_216s0039g00660互作。

2.5 葡萄VQ motif-containing蛋白家族基因受到的選擇壓力

利用PMAL軟件分析了葡萄VQ motif-containing蛋白家族各個(gè)亞家族所受到的選擇壓力。M0模型結(jié)果顯示，亞家族1（group 1）的omega（dN/dS）為0.60826，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有13個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。M0模型結(jié)果顯示，亞家族2（group 2）的omega（dN/dS）為0.58661，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有超過30個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。M0模型結(jié)果顯示，亞家族3（group3）的omega（dN/dS）為0.60826，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有13個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。M0模型結(jié)果顯示，亞家族3（group3）的omega （dN/dS）為0.28288，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有超過50個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。M0模型結(jié)果顯示，亞家族4（group 4）的omega（dN/dS）為0.21844，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有6個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。M0模型結(jié)果顯示，亞家族5（group 5）的omega（dN/dS）為0.51739，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有12個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。M0模型結(jié)果顯示，亞家族6（group 6）的omega（dN/dS）為0.23406，說明該亞家族整體在進(jìn)化歷史中受到純化選擇。M7 vs M8模型結(jié)果顯示，有13個(gè)ayes Empirical Bayes（BEB）正向選擇位點(diǎn)。

3 討論與結(jié)論

本文鑒定出18個(gè)葡萄VQ motif-containing蛋白基因。前人已在水稻、玉米、茶樹和竹子中鑒定VQ motifcontaining蛋白基因，分別為39個(gè)、61個(gè)、25個(gè)和25個(gè)[22,31-33]。葡萄中鑒定出較少的VQ motif-containing蛋白基因可能是因?yàn)槠咸阎唤?jīng)歷過一次古六倍化事件，而沒有經(jīng)歷過其他基因組復(fù)制事件[34]。分析發(fā)現(xiàn)，葡萄中VQ motif-containing蛋白最保守的序列LOGO是“FRALVQELTG”。而之前的研究報(bào)道，茶樹VQ motif-containing蛋白最保守的序列LOGO是“FKQVQMLTG”[32]。這說明不同物種中VQ motif的序列差別可能很大。對(duì)茶樹VQ motif-containing蛋白的亞細(xì)胞定位研究結(jié)果顯示，很多茶樹VQ motif-containing蛋白可以定位在葉綠體和細(xì)胞核中。本結(jié)果顯示，除了VIT_213s0084g00670能定位在過氧化物酶體和葉綠體里，其他葡萄VQ motif-containing蛋白都定位在細(xì)胞外。膜定位分析顯示，這些成員都不能定位在膜上，且都不包含核定位信號(hào)。這說明葡萄VQ motif-containing蛋白不能定位在細(xì)胞核中。推測可能不同物種中的VQ motifcontaining蛋白的亞細(xì)胞定位存在較大的差異。系統(tǒng)發(fā)育樹分析顯示，竹子、茶樹的VQ motif-containing蛋白家族可以被分為6個(gè)亞家族[32-33]，與在葡萄中的研究結(jié)果相一致，并且發(fā)現(xiàn)了2個(gè)孤兒VQ motif-containing蛋白基因。

之前的研究顯示VQ motif-containing蛋白家族在生物及非生物脅迫起到重要作用[21-25]。本結(jié)果發(fā)現(xiàn)很多葡萄VQ motif-containing蛋白基因在干旱、鹽或冷脅迫下表達(dá)發(fā)生變化，說明很多葡萄VQ motif-containing蛋白基因可以響應(yīng)這些非生物脅迫，并可能在這些非生物脅迫耐受中發(fā)揮作用。葡萄CBF4基因在葡萄抗寒過程中起到重要的作用[35]。而本研究結(jié)果顯示，一些葡萄VQ motif-containing蛋白基因在CBF4過表達(dá)的葡萄植株中表達(dá)發(fā)生變化。這說明葡萄CBF4基因可能調(diào)控這些葡萄VQ motif-containing蛋白基因的表達(dá)。ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在干旱、鹽和冷脅迫響應(yīng)中起到重要的作用[36]。而本研究發(fā)現(xiàn)很多葡萄VQ motif-containing蛋白基因的表達(dá)可以受到外源ABA處理的影響，說明這些葡萄VQ motifcontaining蛋白基因可能直接響應(yīng)ABA信號(hào)或者能受到ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中基因的調(diào)控。

本結(jié)果顯示很多葡萄VQ motif-containing蛋白基因的表達(dá)會(huì)受到病毒感染或白粉病感染的影響，說明這些葡萄VQ motif-containing蛋白基因可能在這些生物脅迫耐受中發(fā)揮作用，包括在病毒感染和致病菌脅迫耐受。通過比較易感病品種‘赤霞珠’和抗病品種‘諾頓’感染白粉病后VQ motif-containing蛋白基因的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn)，二者中大部分相同VQ motif-containing蛋白基因的表達(dá)趨勢一致。但是VIT_213s0156g00160和VIT_201s0011g01350的變化趨勢在二者之間不同。因此推測這可能是二者抗病能力差異的原因之一。

之前的研究顯示，VQ motif-containing蛋白家族成員可以通過與WRKY轉(zhuǎn)錄因子互作發(fā)揮作用[18,24]。第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的擬南芥VQ motif-containing蛋白MKS可以與擬南芥AtWRKY33和AtWRKY25蛋白互作[18]。茶樹中部分VQ motif-containing蛋白也可以與茶樹WRKY33和WRKY25蛋白互作[32]。本結(jié)果顯示VIT_208s0007g05180和VIT_208s0058g00690也可以與葡萄WRKY33互作，但是未發(fā)現(xiàn)有與葡萄WRKY25互作的葡萄VQ motifcontaining蛋白。之前的研究顯示，有的植物VQ motifcontaining蛋白可能與MPK4和PIF1互作[18,20]，而本研究結(jié)果顯示，部分葡萄VQ motif-containing蛋白還可以與多個(gè)Sigma70_r2結(jié)構(gòu)域包含蛋白互作。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)葡萄VQ motif-containing蛋白家族在進(jìn)化歷史中主要遭受純化選擇，其中6個(gè)亞家族均遭受純化選擇。而大量正向選擇位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)也說明盡管VQ motif-containing蛋白家族在進(jìn)化歷史中主要遭受純化選擇，但是正向選擇也對(duì)葡萄VQ motif-containing蛋白家族的進(jìn)化產(chǎn)生了一定影響?；蚣易迨艿秸蜻x擇或含有正向選擇位點(diǎn)，說明家族成員功能可能發(fā)生分歧或家族成員進(jìn)化出新功能[37]。VQ motif-containing蛋白家族在生物及非生物脅迫起到重要作用[21-25]，因此推測這些功能在進(jìn)化過程中可能受到選擇壓力的影響。