周亞軍 丁園

【摘要】 目的：分析晚期血吸蟲病患者外周血中Vα24自然殺傷T細(xì)胞水平。方法：選取筆者所在醫(yī)院45例健康體檢者設(shè)為對照組，45例晚期血吸蟲病患者設(shè)為觀察組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測患者外周血細(xì)胞中的Vα24 NKT細(xì)胞在T淋巴細(xì)胞中的比例。檢測兩組肝功能指標(biāo)，分析Vα24 NKT與肝功能的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組患者NKT細(xì)胞水平為（0.15±0.01）%，顯著低于對照組的（0.84±0.21）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。兩組各肝功能指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。相關(guān)性分析顯示，NKT細(xì)胞在晚期血吸蟲病患者外周血Vα24中與γ-GT呈正相關(guān)（r=0.371，P<0.05），而Vα24 NKT細(xì)胞與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB、A/G無相關(guān)性（r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031，P>0.05）。結(jié)論：晚期血吸蟲患者外圍血中Vα24 NKT細(xì)胞明顯減少，Vα24 NKT細(xì)胞與γ-GT呈正相關(guān)，與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G無相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】 晚期血吸蟲病 流式細(xì)胞術(shù) Vα24 自然殺傷T細(xì)胞

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.29.027 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）29-00-02

[Abstract] Objective： To analyze the level of Vα24 natural killer T cells in peripheral blood of patients with advanced schistosomiasis. Method： A total of 45 healthy subjects in our hospital were selected as the control group， and 45 advanced schistosomiasis patients were selected as the observation group. Flow cytometry was used to determine the proportion of Vα24 NKT cells in T lymphocytes. The liver function indexes of the two groups were detected and the correlation between Vα24 NKT and liver function was analyzed. Result： The level of NKT cells in the observation group was （0.15±0.01） %， which was significantly lower than （0.84±0.21） % in the control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. There were significant differences in liver function between the two groups （P<0.01）. Correlation analysis showed that NKT cells were positively correlated with γ-GT in peripheral blood Vα24 of patients with advanced schistosomiasis（r=0.371， P<0.05）， while Vα24 NKT cells were not correlated with ALT， AST， ALP， TBIL， ALB and A/G （r=-0.001， -0.178， 0.023， -0.101， 0.026， 0.031， P>0.05）. Conclusion： The number of Vα24 NKT cells in peripheral blood of patients with advanced schistosomiasis are significantly decrease. Vα24 NKT cells are positively correlate with gamma GT， but not with ALT， AST， ALP， TBIL， ALB and A/G.

[Key words] Advanced schistosomiasis Flow cytometry Vα24 Natural killer T cells

First-authors address： Clinical Diagnosis and Treatment Center for Schistosomiasis in Hubei， Jingzhou 434001， China

自然殺傷性T細(xì)胞（NKT）是一類特殊性質(zhì)的免疫細(xì)胞，其與先天免疫和后天免疫有關(guān)[1]。在微生物感染、自身免疫性疾病、抗腫瘤轉(zhuǎn)移和移植物存活方面影響顯著，其作用日益得到承認(rèn)[2]。血吸蟲病是一種嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲病。文獻(xiàn)報道其參與了血吸蟲病小鼠的致病過程。本次探究采用流式細(xì)胞術(shù)分析檢測晚期血吸蟲病患者外周血NKT細(xì)胞的水平變化[3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇筆者所在醫(yī)院2016年6月-2018年6月在筆者所在醫(yī)院住院治療的晚期血吸蟲病患者45例，設(shè)為觀察組，其中男20例，女25例;年齡41～77歲，平均（62.1±10.3）歲。根據(jù)衛(wèi)生部2006年發(fā)布的《血吸蟲病診斷標(biāo)準(zhǔn)》，排除自身免疫性疾病、病毒性肝炎、酒精性肝臟疾病，所有患者入院前接受血吸蟲免疫學(xué)檢查。選取筆者所在醫(yī)院門診健康體檢者45例為對照組，其中男17例，女28例;年齡40～78歲，平均（63.1±11.5）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），有可比性。

1.2 方法

1.2.1 NKT細(xì)胞檢測 所有患者均于入院后第2天空腹?fàn)顟B(tài)下采集2 ml全血抗凝EDTA-K2。收集100 μl血液加入標(biāo)記后的單克隆抗體CD3-FITC 5 μl與TCR Vα24-PE 5 μl并充分混合。在避光狀態(tài)下4 ℃孵育30 min，加入500 μl紅細(xì)胞裂解液混合。室溫避光10 min，進(jìn)行PBS洗滌，1 500 r/min離心，棄上清液體，加入500 μl固定劑拌勻。并快速由流式細(xì)胞術(shù)檢測，使用Expo32軟件進(jìn)行檢測分析，檢測時每個通道由相應(yīng)的IgG細(xì)胞作為陰性對照。

1.2.2 肝功能檢測 取全血抗凝2 ml，室溫靜置30 min后，1 800×g離心5 min，分離血清。采用全自動生化分析儀檢測肝功能指標(biāo)，包括丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、白蛋白/球蛋白（A/G）等。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組NKT細(xì)胞水平比較

觀察組患者NKT細(xì)胞水平為（0.15±0.01）%，顯著低于對照組的（0.84±0.21）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 兩組肝功能水平對比

兩組ALT、TBIL、γ-GT、ALB、A/G、AST、ALP水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。

2.3 NKT細(xì)胞與肝功能的相關(guān)性

NKT細(xì)胞在晚期血吸蟲病患者外周血Vα24中與γ-GT呈正相關(guān)（r=0.371，P<0.05），而Vα24 NKT細(xì)胞與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G無相關(guān)性（r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031，P>0.05）

3 討論

慢性血吸蟲病是一種慢性免疫疾病[4]，其基礎(chǔ)是由血吸蟲病宿主抗原成分引起的局部或全身過敏，其代謝產(chǎn)物或蠕蟲病死亡在急性感染血吸蟲病中以TH1誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)答[5]，成年細(xì)胞反應(yīng)為主[6]。在感染后期，蟲體成熟排卵，而卵子則沉積在血液、肝臟等，導(dǎo)致在肝臟等部位引起TH2細(xì)胞應(yīng)答的IV超敏反應(yīng)，卵肉芽腫繼發(fā)，導(dǎo)致肝硬化，并且出現(xiàn)靜脈高壓等并發(fā)癥[7]。此外，Th細(xì)胞和NKT細(xì)胞占肝臟T淋巴細(xì)胞的20%～30%，在肝臟局部免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用[8]。NKT細(xì)胞在晚期血吸蟲病患者外周血Vα24與γ-GT呈正相關(guān)，而Vα24 NKT細(xì)胞與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G無相關(guān)性[9]。

晚期血吸蟲病患者外周血NKT細(xì)胞能識別血吸蟲卵內(nèi)的特異性抗原[10]。淋巴細(xì)胞的富集引起過度的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致患者肝功能受損[11]。在硫代乙酰胺和四氯化碳誘導(dǎo)下能引起CD1d基因顯著減少野生型小鼠的肝臟炎癥和纖維化程度，平滑肌肌動蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子β的表達(dá)也顯著降低，表明NKT細(xì)胞在小鼠體內(nèi)會導(dǎo)致肝細(xì)胞的損傷[12]。

本次研究初步表明晚期血吸蟲病患者外周血NKT細(xì)胞的變化及其與肝功能的相關(guān)關(guān)系，對進(jìn)一步探究NKT細(xì)胞數(shù)量對治療晚期血吸蟲病有重要意義。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2019-05-23） （本文編輯：桑茹南）