余剛/河南省正陽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所

王艷*/河南省駐馬店市動物疫病預(yù)防控制中心

以種公豬為對象，投喂添加不同水平復(fù)方中草藥復(fù)方制劑，研究中草藥復(fù)方制劑對種公豬血液生理生化指標(biāo)、疫苗抗體水平的影響。試驗共分10個小組分別為1個對照組和9個試驗組，每個小組各有6頭種公豬。共三個中草藥組方，每個組方設(shè)置3個不同比例中草藥復(fù)方制劑（分別為0.25%、0.5%、1%），分圈飼養(yǎng)，后抽血進行血液細胞分析、免疫抗體水平檢測。本試驗結(jié)果表明，在飼料中添加中草藥復(fù)方制劑能改變種公豬的血液生理生化指標(biāo)、提高免疫抗體水平。

目前，在畜牧業(yè)的研究中，中草藥以它獨特的作用方式、良好的治療效果、無抗藥性、無殘留以及無污染而受到廣大科研人員和生產(chǎn)人員的青睞。中草藥具有營養(yǎng)性、維生素樣、激素樣、增強機體免疫力、抗微生物、抗應(yīng)激和抗寄生蟲等作用，并且不容易產(chǎn)生抗藥性和耐藥性。因此，中草藥不僅可以治療個體而且可以進行群體防治。大力開發(fā)中草藥復(fù)方制劑不僅能夠解決動物疫病長期困擾畜牧業(yè)發(fā)展的問題，還能夠解決抗生素殘留問題及滿足人們對食品安全的需求，具有重要的經(jīng)濟效益和社會效應(yīng)。

本研究主要依據(jù)中獸醫(yī)理論，圍繞中草藥調(diào)動自身抵抗力抵御外來疾病入侵這一主要法則，針對種公豬在生產(chǎn)上的應(yīng)用目的，優(yōu)化中草藥配方組合以及制作工藝所研發(fā)的一種發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑對種公豬疫病防控的研究，以充分發(fā)揮中草藥扶正祛邪、標(biāo)本兼顧的特色和優(yōu)勢，使中草藥的組合效應(yīng)達到最優(yōu)。

一、材料和方法

1.試驗動物。隨機抽取15月齡左右、體重180±10 kg、身體健康、繁殖性能相近的（某品種）種公豬60頭，對照組和9個試驗組各6頭。

2.試劑與儀器。

（1）儀器。全自動血液細胞分析儀（型號BC－5300Vet），購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；全自動酶標(biāo)儀（型號ELX800），購自美國伯騰儀器有限公司；一次性注射器；無菌離心管；微量移液器等。

（2）試劑?？谔阋呖贵w檢測ELISA試劑盒，購自洛陽萊普生信息科技有限公司；豬瘟、藍耳、偽狂犬抗體檢測ELISA試劑盒均購自愛德士生物科技有限公司。

3.發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑的組方與配制。發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑組方：

方一組成及比例：當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿、桑椹、枸杞、甘草（1∶4∶2∶2∶2∶1）。

方二組成及比例：當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿、山茱萸、枸杞、甘草（1∶4∶2∶2∶2∶1）。

方三組成及比例：當(dāng)歸、黃芪、淫羊藿、菟絲子、桑椹、山茱萸、枸杞、甘草（1∶4∶1∶1∶1∶1∶1∶1）。

組方中各個藥材干燥粉碎后，噴灑乳酸菌，置于固態(tài)發(fā)酵裝置中發(fā)酵72 h，與日糧混合后按照試驗設(shè)計飼喂。

4.試驗設(shè)計。本次試驗在某豬場進行，其品種為某品種種公豬60頭，試驗共分10個小組分別為1個對照組和9個試驗組，每個小組各有6頭種公豬。具體試驗分組見表1，試驗種公豬分別飼喂基礎(chǔ)日糧（對照組）；混合0.25%方一發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗1組）；混合0.5%方一發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗2組）；混合1%方一發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗3組）；混合0.25%方二發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗4組）；混合0.5%方二發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗5組）；混合1%方二發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗6組）；混合0.25%方三發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗7組）；混合0.5%方三發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗8組）；混合1%方三發(fā)酵中草藥的基礎(chǔ)日糧（試驗9組）。10個組的基礎(chǔ)日糧完全一致，由某公司提供。日糧組成見表2。

5.飼喂管理。為保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，對種公豬的飼養(yǎng)應(yīng)保證在同一飼養(yǎng)水平下：每天投料2次，自由采食并保證充足飲水，每小組的試驗豬在一個圈舍飼養(yǎng)，每日打掃圈舍2次，圈舍每周沖欄消毒2次。整個試驗期間，有專人飼喂，專人管理，保持種公豬每天運動 2 h。

6.樣品采集。

（1）每天有專人負責(zé)觀察實驗動物的健康狀況，并做好詳細記錄。

表1 試驗設(shè)計

表2 基礎(chǔ)日糧的組成

（2）使用發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑之前通過前腔靜脈（或耳緣靜脈）采血，采集所有的實驗組和對照組動物全血各兩份，2 ml/份。

（3）使用發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑之后每間隔15 d通過前腔靜脈（或耳緣靜脈）采集所有的實驗組和對照組動物全血各兩份2 ml/份，連續(xù)采取6次。

7.樣品處理與檢測。

（1）采集全血樣品中的其中1份4℃保存，利用全自動血液細胞分析儀進行血液白細胞、中性粒細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞等計數(shù)分析。

（2）采集全血樣品中的另外1份室溫靜置30 ～ 50 min，以 3 000 r/min 離心 20 min，取血清待檢。利用ELISA檢測試劑盒檢測豬瘟、藍耳病、偽狂犬、口蹄疫的抗體水平。

表3 發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑對種公豬免疫細胞數(shù)量的影響

二、結(jié)果與分析

1.發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑對種公豬血液中免疫細胞數(shù)量的影響。見表3。

從試驗組和對照組血細胞的檢測分析比較，由表1得知，飼喂組方三（試驗7、試驗8、試驗9）復(fù)方中草藥制劑的種公豬所檢測各項血細胞數(shù)目均處在正常范圍值內(nèi)，而組方一（試驗1、試驗2、試驗3）和組方二（試驗4、試驗5、試驗6）的各項細胞檢測值普遍偏高，接近于對照組的檢測值。

2.發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑對種公豬抗體水平的影響。見表4。

表4 發(fā)酵中草藥復(fù)方制劑對種公豬抗體水平（平均值）的影響

由表2可見：在豬瘟、豬藍耳、豬O型口蹄疫、豬偽狂犬抗體方面，從各試驗組的ELISA檢測值顯示得出組方一（試驗1組、試驗2組、試驗3組）和組方三（試驗7組、試驗8組、試驗9組）的抗體水平均較高，而組方二（試驗4組、試驗5組、試驗6組）的抗體水平相對低些，通過組方一和組方三的試驗檢測數(shù)據(jù)比較分析得知組方三的的免疫抗體水平相對較高些；在組方間的中草藥投飼混合比例方面，混合1%比例組方的試驗組ELISA檢測值顯示以上四種抗體水平均高于0.25%和0.5%的比例；而對照組的ELISA檢測值均基本接近臨界值，疫苗抗體一般，不具有很好的保護率。本試驗最終得出飼喂組方三1%比例的復(fù)方中草藥制劑其疫苗免疫抗體水平最高，具有很高的免疫效力。

三、討論與結(jié)論

白細胞是動物機體內(nèi)主要免疫活性細胞之一，在正常生理條件下，白細胞數(shù)量決定機體免疫能力的高低。在白細胞分類中，當(dāng)血清與病原菌（抗原）相互作用產(chǎn)生趨化因子時，機體內(nèi)的中性粒細胞被吸引并用于殺死細菌；單核細胞通過血液進入組織轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉毎⑼淌筛鞣N異物，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、白細胞生成等；嗜酸性粒細胞具有吞噬能力，參與非特異性免疫及中和組胺保護機體；嗜堿性粒細胞的顆粒內(nèi)含有組織胺、肝素及過敏性慢反應(yīng)物質(zhì)等，參與炎癥反應(yīng)和速發(fā)型的過敏反應(yīng)，調(diào)節(jié)微血管張力或者血液凝固性；淋巴細胞參與機體的細胞和體液免疫，調(diào)節(jié)其反應(yīng)。機體內(nèi)白細胞數(shù)目往往維持在相對恒定狀態(tài)，盡管在不同生理或時間白細胞分裂指數(shù)出現(xiàn)一定的波動，但是死亡與生成的白細胞實際處于一個動態(tài)平衡；相對于白細胞分類百分比，白細胞分類數(shù)更能反映外周血白細胞對機體防御和保護的狀態(tài)。

血細胞數(shù)量及其相關(guān)成分可因家畜種類、品種和性別等因素而發(fā)生變動，其生理生化值在一定程度上反映家畜新陳代謝及生理機能狀況。特定血液生理指標(biāo)是品種特征之一，并且與經(jīng)濟性狀存在一定相關(guān)性。在臨床上，由于血細胞參與機體免疫反應(yīng)，具有防御和保護作用，因此成為疾病診斷及其病理過程監(jiān)測的主要依據(jù)之一。

本研究結(jié)果表明，飼料中添加復(fù)方中草藥制劑（1%組方三）能顯著改善種公豬體內(nèi)部分血液生理生化指標(biāo)，使種公豬長期處于健康狀態(tài)；并能顯著提高豬體內(nèi)疫苗免疫抗體水平，使疫苗充分發(fā)揮其作用對種公豬具有很好的保護。從飼料工業(yè)的長遠發(fā)展來看，通過對中草藥作用機理、檢測標(biāo)準(zhǔn)的進一步研究，必將促進天然中草藥飼料添加劑在種公豬飼料中的廣泛應(yīng)用。在飼料中添加中草藥對種公豬生長、免疫和消化機能的影響，有待于進一步做深層次的研究。