顧曉龍，羅明友

（松桃德康農(nóng)牧有限公司，貴州 松桃 554100）

黃精為百合科植物黃精、多花黃精或滇黃精的干燥根莖，為《中國(guó)藥典》收錄品種，始載于《名醫(yī)別錄》。按藥材形狀不同，分別習(xí)稱為“雞頭黃精”“姜形黃精”“大黃精”。黃精味甘、性平，歸脾、肺、腎經(jīng)，具有健脾、補(bǔ)腎、潤(rùn)肺、生津等功能。黃精含有黃精皂苷、煙酸、糖類、醌類、氨基酸及微量元素，具有激發(fā)免疫、增強(qiáng)免疫、延緩衰老、抗病毒等作用［1］。因此，對(duì)黃精的藥理研究和開發(fā)利用具有重要意義。

1 儀器與藥材

1.1 儀器 HX-1000A高速萬能粉碎機(jī)，BP211D型分析天平，201型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱。

1.2 藥材 黃精藥材購(gòu)自四川利民中藥飲片有限責(zé)任公司，批號(hào)：170901。

2 材料與方法

2.1 飼料制備 取黃精打粉，按30 g/kg的比例把黃精加入飼料粉料中，V型混機(jī)混合30min，玉米淀粉制漿，槽型混機(jī)混合10 min左右，然后用顆粒飼料機(jī)制備成小鼠飼料，備用。

2.2 黃精提取物對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用研究

2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 昆明系小白鼠60只，18～22g，雌雄各半，由四川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為3組，每組20只，分籠飼養(yǎng)。Ⅰ組作為對(duì)照組，Ⅱ組和Ⅲ組為免疫抑制組。Ⅲ組在免疫抑制造模成功后飼喂添加了黃精的飼料，Ⅰ組和Ⅱ組飼喂普通飼料。3組小鼠均自由采食、飲水，連續(xù)15 d，環(huán)境溫度控制在23～25℃。

2.2.2 免疫抑制造模方法 小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺（用量為80 mg/kg），注射量為0.2 mL/d。免疫抑制組前3d需腹腔注射環(huán)磷酰胺，3d后雌雄小鼠各處死一只，然后檢測(cè)血常規(guī)白細(xì)胞是否下降，如有下降即造模成功。

2.2.3 E-玫瑰花環(huán)試驗(yàn) 在試管中加入2mL分層液，取肝素抗凝血等量（2 mL），沿管壁緩緩加入至分層液上，注意不要打破兩層界面。用離心機(jī)2000r/min離心20min，取出，棄上層血漿。吸取淋巴細(xì)胞層，用Hank's液洗滌2次，反復(fù)離心，即可得到淋巴細(xì)胞懸液。

取淋巴細(xì)胞懸液0.2mL，加入綿羊紅細(xì)胞懸液0.2 mL，混勻，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)3 min，然后以500 r/min的速度離心5 min，再放入4℃冰箱2h，取出，輕輕搖動(dòng)，使下沉的細(xì)胞重新懸浮，加入2.5%戊二醛0.1 mL混勻，固定5 min，再輕輕搖動(dòng)，使細(xì)胞浮起，用吸管吸1滴置載玻片上，推片，自然干燥，瑞氏染色，400倍顯微鏡下觀察。凡1個(gè)淋巴細(xì)胞結(jié)合3個(gè)以上紅細(xì)胞的均為玫瑰花環(huán)，計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，算出玫瑰花環(huán)百分?jǐn)?shù)［1］。

2.2.4 血清抗體IgG、IgM含量測(cè)定 血清抗體用小鼠免疫球蛋白IgG、IgM酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒測(cè)定。

2.2.5 臟器系數(shù)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)各臟器進(jìn)行肉眼檢查，觀察異常變化，及時(shí)記錄，取脾臟、胸腺精密稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 E-玫瑰花環(huán)率 結(jié)果見表1。由表1可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，黃精添加組小鼠的玫瑰花環(huán)率高于免疫抑制組，且差異顯著，與對(duì)照組相比差異不顯著。

表1 各組小鼠的E-玫瑰花環(huán)率

3.2 血清抗體IgG、IgM含量 結(jié)果見表2。由表2可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，免疫抑制組的IgG、IgM含量均顯著降低（P＜0.05），說明造模成功；黃精添加組的IgG和IgM含量與對(duì)照組相比差異不顯著，但略微高于對(duì)照組。

表2 各組小鼠的血清抗體水平 mg/mL

3.3 小鼠臟器系數(shù) 結(jié)果見表3。由表3可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，免疫抑制組的脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)顯著低于對(duì)照組，黃精添加組與對(duì)照組相比差異不顯著。

表3 各組小鼠的臟器系數(shù)

4 討論

黃精多糖是黃精化學(xué)組成的一個(gè)重要部分，其最重要和最主要的生物活性就是免疫增強(qiáng)作用。玫瑰花環(huán)試驗(yàn)是體外檢測(cè)人類和動(dòng)物免疫活性細(xì)胞的表面標(biāo)識(shí)，是測(cè)定免疫活性細(xì)胞數(shù)量與功能的一種試驗(yàn)方法。T淋巴細(xì)胞表面具有能夠吸附綿羊及豚鼠等動(dòng)物紅細(xì)胞的受體，利用這個(gè)特征可使紅細(xì)胞吸附在淋巴細(xì)胞周圍，形成所謂的玫瑰花環(huán)，以此來計(jì)算T淋巴細(xì)胞數(shù)，測(cè)定機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)［2］。通過測(cè)定E-玫瑰花環(huán)率我們可以看出，免疫抑制組與對(duì)照組之間差異顯著（P＜0.05），黃精添加組與對(duì)照組之間差異不顯著，表明黃精能明顯提高正常小鼠淋巴細(xì)胞的免疫功能，使其達(dá)到正常生理水平。

血清免疫球蛋白測(cè)定是檢查體液免疫功能的最常用方法。IgG是人和動(dòng)物血清中含量最高的免疫球蛋白，占血清免疫球蛋白的75%～80%，IgG是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體。IgM是一種高效能抗體，其殺菌、溶菌、溶血、調(diào)理及凝集作用均比IgG高。IgM在體內(nèi)產(chǎn)生最早，但持續(xù)時(shí)間最短，因此不是機(jī)體抗感染的主力，但在抗感染免疫的早期起著十分重要的作用［3］。從本試驗(yàn)可以看出，飼料中添加黃精可以提高免疫抑制小鼠的血清免疫球蛋白的含量，可在一定程度上提高機(jī)體免疫力。

免疫器官的臟器系數(shù)是衡量機(jī)體免疫功能的初步指標(biāo)，胸腺和脾是重要的外周免疫器官，機(jī)體的免疫應(yīng)答主要以脾為主，T淋巴細(xì)胞分化的主要場(chǎng)所則以胸腺為主。本研究結(jié)果顯示，黃精可促進(jìn)免疫抑制小鼠免疫器官的發(fā)育，提示其對(duì)小鼠具有相應(yīng)的治療作用。

綜上所述，黃精能增強(qiáng)免疫功能低下模型小鼠的免疫系統(tǒng)功能，如細(xì)胞免疫和體液免疫，對(duì)將來開發(fā)利用黃精提供了部分理論依據(jù)。