楊帆*，王蘇儀，劉曉飛，崔琳琳，MARCHISIO Mario

1. 黑龍江省第二醫(yī)院，暨黑龍江省中毒搶救治療中心，黑龍江省勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病研究院（哈爾濱 150000）；2. 哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院（哈爾濱 150000）；3. 哈爾濱工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院（哈爾濱 150000）

食品安全是一個(gè)與人們健康息息相關(guān)的重大問(wèn)題，許多導(dǎo)致人類(lèi)疾病的高風(fēng)險(xiǎn)因素是通過(guò)食品傳播的。近年來(lái)，食品成分中含有害有毒物質(zhì)，如殺蟲(chóng)劑[1]、鹽酸克倫特羅[2]、獸藥[3]、生物毒素[4]等，已引起許多食品安全事故，而對(duì)于復(fù)合污染物、過(guò)敏原、病原體、添加劑等的檢測(cè)分析和制作過(guò)程控制，對(duì)維護(hù)人們健康同樣具有重大意義[5]。加強(qiáng)食品安全監(jiān)管已成為各級(jí)政府的重要而緊迫的任務(wù)之一，但是檢測(cè)食品中的有害有毒物質(zhì)存在許多困難，例如復(fù)雜基質(zhì)樣品，需要測(cè)試的有害有毒物質(zhì)的各種類(lèi)型和復(fù)雜成分，以及測(cè)試低含量的化合物等。利用氣相色譜和高效液相色譜等傳統(tǒng)測(cè)試儀器價(jià)格昂貴，樣品處理步驟復(fù)雜，檢測(cè)周期長(zhǎng)，檢測(cè)成本高，難以滿(mǎn)足現(xiàn)場(chǎng)快速測(cè)量的要求，也不能用于有毒有害物質(zhì)的早期監(jiān)測(cè)。因此，食品工業(yè)需要適當(dāng)?shù)姆治龇椒凹夹g(shù)手段來(lái)檢查食品的安全性和質(zhì)量[6]。

生物傳感芯片是20世紀(jì)90年代在生命科學(xué)領(lǐng)域中迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)高新技術(shù)。生物芯片的主要特點(diǎn)是高通量、微型化和自動(dòng)化，能在短時(shí)間內(nèi)對(duì)生物樣品進(jìn)行分析，快速準(zhǔn)確地獲取樣品中大量的生物信息，其效率是傳統(tǒng)檢測(cè)手段的成百上千倍[7]。而生物傳感芯片技術(shù)的原理，在于其采用原位合成或微矩陣點(diǎn)樣等方法，將大量生物大分子如核酸片段、多肽片段（甚至組織切片）、細(xì)胞等樣品有序地固定在硅膠片或聚丙烯酰胺凝膠等支持物表面，組成密集的二維分子排列，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中的靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器（如激光共聚焦掃描）對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效的檢測(cè)分析，判斷樣品中靶分子的數(shù)量，從而達(dá)到分析檢測(cè)的目的[8]。

具體論述已經(jīng)開(kāi)發(fā)的幾種不同類(lèi)型的生物傳感芯片，包括用于檢測(cè)食品中有毒有害物質(zhì)的基于免疫測(cè)定和PCR的生物傳感芯片，及表面等離子體共振傳感芯片等，總結(jié)其各自的分析性能，包括檢測(cè)的限制條件和分析時(shí)間。

1 生物傳感芯片

1.1 側(cè)流測(cè)定（LFA）

側(cè)向流動(dòng)測(cè)定（LFA）是一種極簡(jiǎn)單的免疫測(cè)定形式，其在診斷市場(chǎng)上獲得極大的普及，源于LFA最著名的妊娠試驗(yàn)。使用者將一滴尿液樣品施加到盒式裝置上或?qū)l帶浸入尿液樣品中。如果出現(xiàn)兩條粉紅色的線(xiàn)條，懷孕；一條粉紅色的線(xiàn)，沒(méi)有懷孕；沒(méi)線(xiàn)，測(cè)試失敗。LFA本質(zhì)上是預(yù)裝有幾種不同抗體的膜。這被認(rèn)為是最簡(jiǎn)單的生物傳感芯片形式之一，LFA當(dāng)然可以用于檢測(cè)食品中有毒有害物質(zhì)的檢測(cè)。

硝酸纖維素膜是LFA中最常用的材料，這種膜的孔徑在0.05～12 μm之間變化，這決定了液體轉(zhuǎn)運(yùn)的速度和試驗(yàn)的靈敏度。當(dāng)樣品具有高黏度或含有脂肪球（例如牛奶）時(shí)，膜的材料選擇和孔徑特別重要[9]。核酸LFA利用一對(duì)引物（即對(duì)病原體核酸特異的核酸的短序列）代替抗體，并檢測(cè)樣品中這種核酸序列的存在。由于樣品中此類(lèi)核酸的量可能非常低，因此通常需要PCR擴(kuò)增。Kong等[10]通過(guò)LFA檢測(cè)能量飲料和牛奶中葉酸的含量，Liu等[11]則采用LFA方法快速地檢測(cè)出食品中的相思豆毒素的含量。但是該方法由于PCR的擴(kuò)增要求，核酸LFA并不適合外出應(yīng)用[12]。

LFA非常易于使用，且價(jià)格低廉。它可以在室溫下儲(chǔ)存，是一次性的，因此沒(méi)有交叉污染問(wèn)題。目前已報(bào)道的檢測(cè)限為10 ng/mL，用于蚊子血粉中的IgG[13]、血吸蟲(chóng)的0.2 ng/mL尿液[14]、魚(yú)精子中肺炎鏈球菌1 ng/mL[15]、血清中梅毒螺旋體5 ng/mL[16]。

1.2 ELISA 生物傳感芯片

ELISA通常在微板上進(jìn)行，并且用酶標(biāo)儀對(duì)其結(jié)果進(jìn)行定量。在某種程度上，這是一種光學(xué)免疫傳感器。這種方法可以使用微通道替換孔，其中目標(biāo)溶液連續(xù)地流過(guò)微通道（流動(dòng)注射分析），將抗體固定在微通道的特定位置的內(nèi)表面上，這種連續(xù)流動(dòng)的特性使漂洗非常有效。實(shí)際上，該方法既不需要抽吸-分配循環(huán)又不需要攪拌，因?yàn)榱鲃?dòng)應(yīng)該從微通道的內(nèi)表面除去任何過(guò)量的分子，將光照射到固定抗體的位置，而光傳感器從微通道的另一側(cè)讀取信號(hào)。

最近，已經(jīng)證明了使用ELISA型實(shí)驗(yàn)室芯片檢測(cè)食源性病原體的許多新型檢測(cè)方案，其擁有近乎實(shí)時(shí)且具有優(yōu)異的靈敏度。Guan等[17]證明大腸桿菌O157：H7（使用抗大腸桿菌）的生物發(fā)光檢測(cè)，檢測(cè)限為3.2×101CFU/mL，測(cè)定時(shí)間為20 min。Wojciechowski等[18]使用抗體包被的有機(jī)光電二極管檢測(cè)葡萄球菌腸毒素B，檢測(cè)限為0.5 ng/mL。除此以外，Dong等[19]則通過(guò)ELISA生物傳感芯片在牛肉中成功檢測(cè)出口蹄疫病毒，其采用鎳螯合化學(xué)方法將重組蛋白（抗原）固定在聚苯乙烯微球上，測(cè)定牛血清中FMDV抗體。結(jié)果表明，在25 min的檢測(cè)時(shí)間內(nèi)，僅用10 mU/L樣品量就能成功地檢測(cè)出口蹄疫病毒。最大陽(yáng)性百分率（NPPV）為303%，稀釋倍數(shù)為32倍，評(píng)價(jià)分析靈敏度。該方法的批內(nèi)變異系數(shù)（CV）值分別為15.5%和17.1%，完全符合世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）傳染病診斷試驗(yàn)驗(yàn)證原則。ELISA生物傳感芯片還被應(yīng)用在檢測(cè)食物中黃曲霉素[20]，Sciancalepore等[21]則在30 min內(nèi)對(duì)150 nL的起始樣品，檢測(cè)出15個(gè)食源性細(xì)菌細(xì)胞。

1.3 基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的生物傳感芯片

自20世紀(jì)80年代中期以來(lái)，PCR技術(shù)已被證明是檢測(cè)食品中病原體的寶貴方法，并發(fā)表了許多關(guān)于不同食源性病原體的PCR檢測(cè)的論文，包括大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌、金黃色葡萄球菌等。實(shí)時(shí)PCR是用于定量特定DNA片段的最常用技術(shù)。通過(guò)檢測(cè)由于特異性擴(kuò)增產(chǎn)生的熒光信號(hào)，實(shí)時(shí)測(cè)量PCR過(guò)程中合成的產(chǎn)物量。實(shí)時(shí)PCR需要特殊的熱循環(huán)儀和通常特定的熒光探針。

目前已有的微PCR芯片可分為三種：第一種是固定室微PCR芯片作為傳統(tǒng)熱循環(huán)的納米/微微升儲(chǔ)庫(kù)；第二種是連續(xù)流微PCR芯片，其中在不同的溫度區(qū)域內(nèi)建立不同位置，使樣品可以在各個(gè)溫度的各個(gè)區(qū)域之間移動(dòng)，以此進(jìn)行循環(huán)；第三種是基于液滴的PCR系統(tǒng)，其中擴(kuò)增反應(yīng)在每個(gè)擴(kuò)增子的油包水滴中進(jìn)行[22]。

Chin等[23]用天然污染的豬肉樣品進(jìn)行多重直接PCR檢測(cè)沙門(mén)氏菌的敏感性和特異性。以常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)方法為參考，評(píng)價(jià)多重直接PCR的效果。其相對(duì)準(zhǔn)確度、靈敏度和特異性分別為98.8%，97.6%和100%。Bai等[5]發(fā)現(xiàn)了一種用于檢測(cè)食源性病原體的光學(xué)薄膜生物傳導(dǎo)芯片的方法。主要原理是將醛標(biāo)記的探針排列并共價(jià)連接到肼衍生的芯片表面上，然后將生物素化的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增子與探針雜交，再用抗生素免疫球蛋白G-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物和可沉淀的辣根過(guò)氧化物酶底物洗滌和短暫溫育后，將與探針結(jié)合的生物素化鏈可視化為芯片表面上的顏色變化（金色至藍(lán)色/紫色）。PCR片段靶標(biāo)的高靈敏度和準(zhǔn)確檢測(cè)可在30 min內(nèi)完成。該測(cè)定非常穩(wěn)健，靈敏，特異且經(jīng)濟(jì)，并且可以適應(yīng)不同的通量。但有時(shí)顯示假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，需要進(jìn)一步確認(rèn)，如探針雜交和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性問(wèn)題等。

1.4 表面等離子體共振傳感芯片

基于表面等離子體共振（Surfaceplasmon resonance，SPR）的SPR傳感芯片的基本原理是：將某種單鏈DNA分子結(jié)合在金屬膜表面，加入與其互補(bǔ)的單鏈DNA，兩者的結(jié)合將使金屬膜與溶液界面的折射率上升，從而導(dǎo)致共振角度改變。如果固定入射光角度，就能根據(jù)共振角的改變程度對(duì)互補(bǔ)的單鏈DNA進(jìn)行定量。這一原理可用于分子雜交的快速檢測(cè)。與納米技術(shù)等先進(jìn)技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用，SPR技術(shù)被廣泛用來(lái)研究生物分子，如蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、藥物-蛋白質(zhì)、核酸-蛋白質(zhì)、核酸-核酸之間相互作用的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)、結(jié)合位點(diǎn)和反應(yīng)物濃度等信息，其優(yōu)越性是常規(guī)分析技術(shù)所無(wú)法比擬的[24]。

LFA和ELISA兩種生物傳感芯片都需要具有標(biāo)簽的二抗，例如金納米顆粒、熒光染料和化學(xué)發(fā)光染料，隨后進(jìn)行多次漂洗步驟。目前有幾種不涉及標(biāo)記的替代方法，如無(wú)標(biāo)記免疫測(cè)定生物芯片?；诓煌男盘?hào)轉(zhuǎn)換機(jī)制，無(wú)標(biāo)記型生物傳感器又分為SPR、石英晶體微量天平（QCMs）和微懸臂梁等[25]，其中SPR可能是最受歡迎的無(wú)標(biāo)記免疫分析生物傳感芯片之一。

在SPR在食品有毒有害物質(zhì)檢測(cè)中應(yīng)用的先期報(bào)道中，Li等[26]通過(guò)一種便攜式基于免疫抑制原理的高靈敏和可重復(fù)利用的SPR免疫傳感器，檢測(cè)出香豆素和鹽酸克侖特羅的抗體-抗原免疫應(yīng)答，并通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性和連續(xù)檢測(cè)方法檢測(cè)了香豆素分子，印證該方法可以通過(guò)減少實(shí)驗(yàn)步驟、延長(zhǎng)服務(wù)時(shí)間、增長(zhǎng)生物傳感芯片壽命和降低測(cè)試成本，來(lái)快速實(shí)現(xiàn)大量樣品現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。Hana等[27]則在復(fù)雜的漢堡包和黃瓜樣品中發(fā)現(xiàn)，基于厚度低至20 nm的pCBAA刷的SPR生物傳感器能夠檢測(cè)大腸桿菌O157：H7和沙門(mén)氏菌，兩種細(xì)菌的檢測(cè)限分別為57 CFU/mL和大腸桿菌17 CFU/mL，沙門(mén)氏菌分別為7.4×103和11.7×103CFU/mL，具有非凡的靈敏度和特異性。

1.5 乳膠免疫凝集試驗(yàn)（LIA）芯片

另一種更簡(jiǎn)單的免疫測(cè)定形式可以在芯片實(shí)驗(yàn)中重復(fù)顯示，稱(chēng)為乳膠免疫凝集測(cè)定（LIA）。雖然這不是無(wú)標(biāo)簽，但它可能是無(wú)沖洗的（ELISA和SPR實(shí)驗(yàn)室芯片都需要沖洗步驟）。在LIA中，顆粒用針對(duì)給定靶標(biāo)的抗體包被并與所討論的樣品液體混合。如果抗體存在于流體中，則顆粒會(huì)形成更大的聚集體，這種抗體-抗原相互作用稱(chēng)為免疫凝集。過(guò)去已在視覺(jué)上被觀(guān)察到，檢測(cè)極限是凝集物沉淀并變得可見(jiàn)的點(diǎn)，但在芯片實(shí)驗(yàn)中通過(guò)前向光散射測(cè)量免疫凝集更為合適，因?yàn)槟膩單⒚谆蚣{米顆粒不需要從溶液中沉淀出來(lái)以獲得正信號(hào)[28]。Heinze等[29]在1%稀釋的雞糞中檢測(cè)到禽流感病毒，檢出限為10 pg/mL。You等[30]檢測(cè)到10%稀釋的萵苣中檢測(cè)限為10 CFU/mL的大腸桿菌。Fronczek等[31]在10%稀釋的雞肉組織中檢測(cè)到沙門(mén)氏菌，檢測(cè)限為10 CFU/mL，所有檢測(cè)時(shí)間均為10 min或更短。

但是，LIA并不總能提供完美的結(jié)果。特異性始終是一個(gè)問(wèn)題，因?yàn)榉翘禺愋越Y(jié)合可能導(dǎo)致假陽(yáng)性讀數(shù)。為了抑制非特異性結(jié)合，在顆粒懸浮液中加入了表面活性劑，而表面活性劑有時(shí)即使在存在靶抗原時(shí)也會(huì)阻止顆粒凝集（假陰性）。為了解決這個(gè)問(wèn)題，高羧化膠乳顆粒（即表面被羧基側(cè)鏈飽和）可用于LIA實(shí)驗(yàn)室芯片，因?yàn)楦叨若然哪z乳顆粒能夠在不使用表面活性劑的情況下提高顆粒穩(wěn)定性，在微流體混合中具有優(yōu)勢(shì)[32]。

1.6 具有電化學(xué)檢測(cè)的免疫分析實(shí)驗(yàn)室芯片

1.6.1 阻抗免疫分析芯片

該芯片利用電化學(xué)而非光學(xué)檢測(cè)，是將抗體固定在表面上，其中兩個(gè)電極稱(chēng)為交叉指型微電極（IME）的構(gòu)型圖案化。當(dāng)像細(xì)菌這樣的大靶標(biāo)與表面結(jié)合的抗體結(jié)合時(shí)，一些靶標(biāo)能夠橋接兩個(gè)電極，從而降低電阻。如果電極圖案非常小（微電極），那么可以檢測(cè)到較小的靶，例如病毒和蛋白質(zhì)。IME免疫傳感器已經(jīng)成功地用于檢測(cè)許多不同食物樣品基質(zhì)中的病原體，包括Guo等[33]使用電化學(xué)阻抗譜檢測(cè)大腸桿菌，檢測(cè)限為102CFU/mL。

1.6.2 碳納米管（CNT）免疫分析芯片

CNT在電化學(xué)免疫測(cè)定中的主要優(yōu)點(diǎn)是增強(qiáng)的電子性質(zhì)，大的邊緣平面/基面比和快速的電極動(dòng)力學(xué)。因此，基于CNT的免疫測(cè)定通常具有比傳統(tǒng)碳電極更高的靈敏度、更低的檢測(cè)限和更快的電子轉(zhuǎn)移動(dòng)力學(xué)。CNT的優(yōu)異機(jī)械和導(dǎo)電性能（高致動(dòng)應(yīng)力、低驅(qū)動(dòng)電壓和高能量密度）使它們非常有希望開(kāi)發(fā)用于疾病診斷的超靈敏和小型化免疫傳感器。Li等[34]通過(guò)結(jié)合CNT多層生物傳感器和基于微流控芯片的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP），對(duì)大腸桿菌O157：H7及其毒性基因進(jìn)行視覺(jué)和即時(shí)檢測(cè)，功能化的CNT多層生物傳感器可以選擇性地捕獲復(fù)雜樣品中的目標(biāo)細(xì)菌大腸桿菌O157：H7。隨后用基于微流體芯片的LAMP分析釋放的細(xì)菌的DNA濃度，在系統(tǒng)優(yōu)化捕獲和檢測(cè)條件后，傳感平臺(tái)能夠檢測(cè)低至1 CFU/mL的濃度而無(wú)需復(fù)雜儀器，這比以前報(bào)道的方法靈敏得多。

1.7 光纖或光波導(dǎo)入生物傳感芯片中的使用

生物傳感芯片的一個(gè)傳統(tǒng)缺點(diǎn)是它們的高檢測(cè)限（因此靈敏度差），這是因?yàn)樾◇w積減少了可檢測(cè)信號(hào)。而通過(guò)使用光學(xué)檢測(cè)，將光纖與芯片實(shí)驗(yàn)室微流體裝置集成，可以獲得更低的檢測(cè)限（在單分子水平上），以提高靈敏度。通常光纖用于從其光源傳輸光，而另一組光纖用于檢測(cè)生物反應(yīng)，但只有在相對(duì)干凈的環(huán)境中才能使用光學(xué)方法檢測(cè)。此外，樣品體積必須足以維持如此低的檢測(cè)限。

通常，在傳導(dǎo)芯片中使用的光纖分為嵌入式光纖、接近光纖兩類(lèi)纖維取向。嵌入式光纖實(shí)際上包含在傳感芯片中，與微通道結(jié)構(gòu)物理接觸，這使其發(fā)揮了最佳性能，信號(hào)損失微不足道，但是它需要極其復(fù)雜的制造工藝。此外，接近光纖位于芯片附近但不接觸芯片。因此，它們易于開(kāi)發(fā)，盡管它們可能在其信號(hào)中引入額外的噪聲。

2006年，Rindorf等[35]首次將微結(jié)構(gòu)光纖（MOF）嵌入到生物芯片中應(yīng)用。一個(gè)16 mm長(zhǎng)的MOF被整合到光學(xué)流體耦合器芯片中，該芯片是使用CO2激光器在PMMA聚合物中制造的。開(kāi)發(fā)的芯片配置允許通過(guò)MOF的液體流量和瞬時(shí)的光學(xué)特性產(chǎn)生連續(xù)控制。當(dāng)MOF集成在芯片中時(shí)，MOF通過(guò)將傳感層固定在光纖的微結(jié)構(gòu)化內(nèi)，而表面上功能化，以捕獲特定的單鏈DNA串。傳感層含有與靶DNA序列互補(bǔ)的DNA鏈，通過(guò)高選擇性DNA雜交過(guò)程進(jìn)行操作。這是一種使用消逝波傳感原理進(jìn)行捕獲DNA的光學(xué)檢測(cè)。由于芯片尺寸小，所提出的技術(shù)允許分析低至300 nL的樣品體積以及制造小型化便攜式設(shè)備。Han等[36]則使用接近光纖（即纖維緊密接觸但不接觸微流體裝置）來(lái)量化備檢物，由于微流體裝置中乳膠免疫凝集引起光散射增加，該檢測(cè)限低于（優(yōu)選在單細(xì)胞水平上）其他傳統(tǒng)方法，他們實(shí)驗(yàn)證明了大腸桿菌的實(shí)時(shí)檢測(cè)，且該方法基本上是一步法，并且不需要樣品預(yù)處理或細(xì)胞培養(yǎng)。檢測(cè)限低至每個(gè)裝置40 CFU/mL或每臺(tái)設(shè)備4 CFU（僅限活細(xì)胞），或每個(gè)裝置＜10 CFU/mL或每臺(tái)設(shè)備＜1 CFU（包括死細(xì)胞和游離抗原），該結(jié)果優(yōu)于在微流體裝置中進(jìn)行的大腸桿菌檢測(cè)的其他結(jié)果。該技術(shù)非常適于應(yīng)用，因?yàn)樗试S光源和檢測(cè)器在非?？拷酒臋z測(cè)區(qū)域處的精確定位，這消除了對(duì)更大和昂貴的光學(xué)定位階段的需要。

2 結(jié)語(yǔ)與展望

近幾年，食品安全在我國(guó)已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，食品的安全性成為消費(fèi)者、政府監(jiān)管機(jī)構(gòu)的重要關(guān)注對(duì)象。生物芯片作為新興的生物技術(shù)，具有高效、大信息量和高特異性的特點(diǎn)，能夠在很短時(shí)間內(nèi)分析大量的生物分子，使人們能快速準(zhǔn)確地獲取樣品中的靶信息，檢測(cè)效率比傳統(tǒng)檢測(cè)手段有了極大的提高。目前，隨著科研的不斷深入，納米技術(shù)和半導(dǎo)體技術(shù)已經(jīng)開(kāi)始助力生物芯片的發(fā)展，這使得生物傳導(dǎo)芯片可以微小化、精密化。而在此基礎(chǔ)上，接下來(lái)的發(fā)展方向還要集中在如何不斷提升生物傳導(dǎo)芯片的實(shí)際檢測(cè)效率，使其快速又真實(shí)可靠地產(chǎn)生結(jié)果。在生物傳導(dǎo)芯片的研發(fā)過(guò)程中，應(yīng)該不斷加強(qiáng)、不斷健全與芯片配套的分析系統(tǒng)，形成高度的集成化。隨著食品安全問(wèn)題日益突出，食品檢測(cè)項(xiàng)目不斷復(fù)雜化，生物傳導(dǎo)芯片不僅要滿(mǎn)足快速、穩(wěn)定、可視的基本要求，還應(yīng)不斷增大芯片的信息容納能力，具備同時(shí)檢測(cè)多種項(xiàng)目的能力[37-40]。如此可見(jiàn)，生物傳導(dǎo)芯片雖然擁有廣闊的發(fā)展市場(chǎng)和應(yīng)用前景，但研究還需不斷深入，任重道遠(yuǎn)。