李志濤　彭蕊　朱冰清　王暉

摘要：以蛹蟲草的菌絲體為目的產(chǎn)物，采用L18（37）正交試驗研究蛹蟲草最佳液體菌種培養(yǎng)基配方。試驗結(jié)果表明，葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂對蛹蟲草菌絲體含量有顯著影響；最佳配方為：葡萄糖2.5%、玉米粉1.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.15%、碳酸鈣0.05%、硫酸鎂0.10%、維生素B1 0.003%，在此條件下的菌絲體含量達(dá)24.17 mg/mL。

關(guān)鍵詞：液體發(fā)酵；培養(yǎng)基配方；蛹蟲草；正交試驗；菌絲體

中圖分類號：TS201.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2019）02-0003-03

蛹蟲草又稱北冬蟲夏草，是一種食藥兩用的大型真菌，其藥用成分與冬蟲夏草相近，具有降壓、抗衰老、鎮(zhèn)靜、保肺、益腎、止血、抗疲勞、提高人體免疫力、抗癌等功能，醫(yī)藥價值和經(jīng)濟(jì)價值均較高。目前，我國一般采用固體菌種方式培養(yǎng)蛹蟲草，但這種培養(yǎng)方式具有菌齡長而不一，出菇不整齊的缺點。與固體菌種培養(yǎng)相比，液體菌種制種具有菌齡一致、周期短、出菇整齊等優(yōu)點，因此，以蛹蟲草的菌絲體為目的產(chǎn)物，研究蛹蟲草的最佳液體菌種培養(yǎng)基配方，為進(jìn)一步開發(fā)蛹蟲草提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蛹蟲草：衡水學(xué)院食品學(xué)實驗室提供。

PDA斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH值自然。

葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸鎂、維生素B1。

1.2 儀器與設(shè)備

Alpha1506型分光光度計：上海譜元儀器有限公司；AE523型電子天平：上海恒平有限公司；SPX-100B-Z型生化培養(yǎng)箱：蘇州江東精密儀器有限公司；HH-6型恒溫水浴鍋：上海析達(dá)公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 蛹蟲草菌絲生長量測定 蛹蟲草菌絲提取流程為：蛹蟲草斜面菌種（PDA斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)）→搖瓶液體發(fā)酵→蛹蟲草發(fā)酵液→收獲蛹蟲草菌絲體→60 ℃條件下干燥→稱量。

搖瓶液體發(fā)酵的培養(yǎng)基成分為葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸鎂、維生素B1。將不同發(fā)酵培養(yǎng)基分別裝入三角瓶（裝量為100 mL/250 mL，接種量為10%），在轉(zhuǎn)速150 r/min、24 ℃條件下振蕩培養(yǎng)6 d。

菌絲生長量測定公式為：

蛹蟲草菌絲體含量=菌絲體的干重（mg）/

發(fā)酵液體積（mL） （1）

1.3.2 正交試驗 選用葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸鎂、維生素B1為試驗因素，進(jìn)行L18（37）正交試驗，因素水平見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗

L18（37）正交試驗結(jié)果及分析見表2。

由表2得知，按培養(yǎng)基成分對蛹蟲草菌絲體含量影響順序為：C>F>D>A>G>B>E，即蛋白胨>硫酸鎂>磷酸二氫鉀>葡萄糖>維生素B1>玉米粉>碳酸鈣。說明蛋白胨對蛹蟲草菌絲體含量的影響最大，葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂對菌絲生長有顯著影響（p<0.05）。

由表2中的數(shù)據(jù)還可知：最佳試驗組合為A2B2C2D2E2F2G1，即葡萄糖2.5%、玉米粉1.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.15%、碳酸鈣0.05%、硫酸鎂0.10%、維生素B1 0.003%。。

2.2 驗證試驗

采用最佳組合進(jìn)行驗證試驗，結(jié)果取3次平行試驗的平均值，確定菌絲體含量為24.17 mg/mL，明顯高于正交試驗（表1）中的最高值。

3 結(jié)論

采用正交試驗確定的蛹蟲草的最佳培養(yǎng)基配方為：葡萄糖2.5%、玉米粉1.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.15%、碳酸鈣0.05%、硫酸鎂0.10%、維生素B1 0.003%。在此最佳條件下進(jìn)行驗證試驗，菌絲體含量達(dá)24.17 mg/mL。

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