鄺 芳，吳 偉，楊雯新，李 饒，詹 睿

(云南師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650500)

琴葉風(fēng)吹楠(Horsfieldiapandurifolia)，喬木，是云南特有植物[1-2]，屬于肉豆蔻科(Myristicaceae)風(fēng)吹楠屬(Horsfieldia)植物.生于海拔500～800 m的溝谷坡地或山坡密林中，是典型的熱帶季節(jié)性雨林成分.其木材略輕柔致密，刨面光滑，可作高級家具、裝飾、箱板等材料.琴葉風(fēng)吹楠是一種重要的能源植物和油料作物，其種子含油量高達(dá)57.39%，以十四碳酸的固體油為主[3-4].同時它也是重要的工業(yè)原料，廣泛用于合成化妝品、醫(yī)藥、香料、殺蟲劑等[5].由于該植物數(shù)量少，熱帶雨林過度毀壞，雌株為數(shù)不多，天然繁殖較差，又因商業(yè)部門收購種子，群眾伐樹收果，因此植株日漸減少，已作為漸危種列為保護植物[6].

國內(nèi)外學(xué)者對琴葉風(fēng)吹楠的研究較少，且主要集中于其種子上，而對該屬其他種的研究漸漸增加[7-8].為了支持該種植物資源的深入研究與開發(fā)利用，得到更多的天然次生代謝產(chǎn)物，我們對采自西雙版納的琴葉風(fēng)吹楠枝葉部分展開深入研究，從70%丙酮提取物中共分離純化得到5個異黃酮、2個二氫黃酮、1個黃酮醇，共8個化合物.

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

ZF-Ⅱ型紫外分析儀(上海市安亭電子儀器廠)；Bruker Avance 500型核磁( 瑞士Bruker公司)；EYELA N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化有限公司)；層析硅膠(100～200目，200～300目)(青島海洋化工廠)；高效薄層層析硅膠板(5 cm×10 cm， 煙臺化工研究院)；Sephadex LH-20( 20～80 μm, Pharmacia Fine Chemical Co.,Ltd)；CHP-20 MCI(日本三菱公司)；丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、石油醚等柱層析溶劑(工業(yè)純, 昆明福海達(dá)有限公司)；HPLC使用溶劑甲醇、乙腈(色譜純, 北京邁瑞達(dá)科技有限公司).

實驗所用植物采于云南省西雙版納勐臘縣，由中國科學(xué)院植物學(xué)家周仕順先生鑒定為琴葉風(fēng)吹楠(H.pandurifolia).

1.2 提取和分離

干燥的琴葉風(fēng)吹楠枝葉共11 kg，粉碎后用25 L體積分?jǐn)?shù)為70%的丙酮浸泡5次，每次浸泡2天.室溫下過濾、減壓蒸餾除去溶劑，提取物合并，分散懸浮于7 L水中，用乙酸乙酯萃取得到185 g浸膏.再經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-丙酮梯度洗脫，用TLC檢測合并，得到4個部分(A～D).A部分(14.6 g)經(jīng)過Sephadex LH-20V(氯仿)∶V(甲醇)=3∶2洗脫，得到3個部分(A1-3).其中A2再經(jīng)過硅膠柱層析，以V(氯仿)∶V(丙酮)=(50∶1→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1→1∶1)梯度洗脫，得到化合物1(4.8 mg).A3經(jīng)過硅膠柱層析，以V(氯仿)∶V(丙酮)=(20∶1→10∶1→5∶1→2∶1)梯度洗脫，得到化合物4(5.27 mg).B部分(18.5 g)經(jīng)過Sephadex LH-20V(氯仿)∶V(甲醇)=3∶2洗脫，得到3個部分(B1-3).其中B1經(jīng)過硅膠柱層析，以V(氯仿)∶V(丙酮)=(50∶1 → 20∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 2∶1 → 1∶1)梯度洗脫，再經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析得到化合物3(4.46 mg).C部分(27.6 g)經(jīng)過Sephadex LH-20柱層析V(氯仿)∶V(甲醇)=3∶2除去大量色素和脂肪酸，其余部分(641 mg)經(jīng)過硅膠柱層析V(氯仿)∶V(甲醇)=100∶ 1得到化合物2(6.3 mg)和C2組分(77 mg)，C2經(jīng)過Sephadex LH-20柱層析V(氯仿)∶V(甲醇)=3∶2得到化合物6(6.84 mg).D部分(25.8 g)經(jīng)過Sephadex LH-20柱層析V(氯仿)∶V(甲醇)=3∶2，薄層層析檢測分為5個組分(D1～D5).D2(59.4 mg)經(jīng)過硅膠柱層析V(氯仿)∶V(丙酮)=30∶1分為2個亞組分(D2～1～D2-2)，D2-1(139 mg)經(jīng)過硅膠柱層析V(氯仿)∶V(丙酮)=10∶1和Sephadex LH-20柱層析(甲醇)得到化合物7(12.5 mg).D2-2有針狀晶體析出，用V(石油醚)∶V(丙酮)=5∶ 1洗滌4次并重結(jié)晶，得到無色針狀晶體化合物5(10 mg).D3(490 mg)經(jīng)過硅膠柱層析V(氯仿)∶V(甲醇)=60∶1并用薄層層析檢驗分為3個部分(D3-1～D3-3)，其中D3-2(44 mg)經(jīng)過硅膠柱層析V(石油醚)∶V(丙酮)=5∶1和Sephadex LH-20柱層析V(氯仿)∶V(甲醇)=3∶2得到化合物8(7.5 mg). 化合物結(jié)構(gòu)見圖1.

2結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1淡黃色粉末.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：8.04 (1H, s, H-2), 7.35 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-2′, H-6′), 6.82 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-3′, H-5′), 6.42 (1H, s, H-8),3.85(3H,s,6-OMe).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：182.5 (s, C-4), 158.8 (s, C-4′), 158.6 (s, C-7), 155.1 (s, C-9), 155.0 (d, C-2), 154.6 (s, C-5), 132.8 (s, C-6), 131.3 (d, C-2′, C-6′), 124.2 (s, C-1′), 123.2 (s, C-3), 116.2 (d, C-3′, C-5′), 106.6 (s, C-10), 95.0 (d, C-8), 60.9 (q, 6-OMe). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道的基本一致，因此化合物1鑒定為tectorigenin.

化合物2黃色粉末.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：8.26 (1H, s, H-2), 7.47 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, H-6′), 6.93 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3′, H-5′), 6.73 (1H,s, H-8), 3.99 (3H,s, 7-OMe), 3.81 (3H, s, 6-OMe).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：182.0 (s,C-4),160.2(s,C-5),158.5 (s,C-7),156.4(s,C-4′),154.6(d,C-2), 154.4 (s,C-9), 133.4 (s, C-6), 131.1 (d,C-2′, C-6′), 123.8 (s, C-3), 122.8 (s, C-1′), 115.9 (d, C-3′, C-5′), 107.2 (s, C-10), 91.5 (d, C-8), 60.5 (q, 6-OMe), 56.8 (q, 7-OMe). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道的基本一致，因此化合物2鑒定為7-O-methyltectorigenin.

化合物3白色粉末.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：8.15 (1H, s, H-2), 8.06 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-5), 7.16 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 7.05 (1H, dd,J= 8.3, 2.0 Hz, H-6′), 6.98 (1H,dd,J= 8.8, 2.1 Hz, H-6), 6.97 (1H,d,J= 8.3 Hz, H-5′), 6.90 (1H,d,J= 2.1 Hz, H-8), 3.87 (3H, s, 4′-OMe).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：175.6 (s, C-4), 163.2 (s, C-7), 158.7 (s, C-9), 153.4 (d, C-2), 148.3 (s, C-4′), 147.0 (s, C-3′), 128.4 (d, C-5), 126.3 (s, C-1′), 125.0 (s, C-3), 121.0 (d, C-6′), 118.5 (s, C-10), 116.9 (d, C-2′), 115.6 (d, C-6), 112.1 (d, C-5′), 103.1 (d, C-8), 56.2 (q, 4-OMe). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道的基本一致，因此化合物3鑒定為calycosin.

化合物4淡黃色針晶.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：8.24 (1H, s, H-2), 7.45 (2H, d,J= 8.6 Hz, H-2′, H-6′), 6.90 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, H-5′), 6.68 (1H, s, H-8), 6.17 (2H, s, 6,7-OCH2O-).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：182.3 (s, C-4), 158.5 (s, C-4′), 155.3 (s, C-5), 154.7 (d, C-2), 154.4 (s, C-9), 143.3 (s, C-7), 131.2 (d, C-2′, C-6′), 130.9 (s, C-6), 123.9 (s, C-1′), 122.6 (s, C-3), 115.9 (d, C-3′, C-5′), 108.7 (s, C-10), 103.8 (t, -OCH2O-), 89.9 (d, C-8). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道的基本一致，因此化合物4鑒定為irilone .

化合物5無色針狀晶體.1H NMR (500 MHz, Pyr)δ：8.45 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5), 8.16 (1H, s, H-2), 7.78 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 7.23 (1H, dd,J= 8.5, 2.0 Hz, H-6), 7.13 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 7.07 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 3.69 (3H, s, 4′-OMe).13C NMR (125 MHz, Pyr)δ： 175.4 (s, C-4), 163.9 (s, C-7), 159.8 (s, C-4′), 158.3 (s, C-9), 152.5 (d, C-2), 130.6 (d, C-2′, 6′), 128.0 (d, C-5), 125.1 (s, C-1′), 124.4 (s, C-3), 117.7 (s, C-10), 115.7 (d, C-6), 114.0 (d, C-3′, 5′), 102.9 (d, C-8), 55.0 (q, 4′-OMe). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道的基本一致，因此化合物5鑒定為formononetin.

化合物6為淡黃色晶體.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：7.75 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5), 7.60～7.40 (5H, m, H-2′～6′), 6.61 (1H, dd, J = 8.5, 2.5 Hz, H-6), 6.48 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-8), 5.58 (1H, dd,J= 13.0, 3.0 Hz, H-2), 3.05 (1H, dd,J=17.0, 13.0 Hz, H-3a), 2.77 (1H, dd,J= 17.0, 3.0 Hz, H-3b).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：189.2 (s, C-4), 164.5 (s, C-7), 163.4 (s, C-9), 139.6 (s, C-1′), 128.6 (d, C-4′), 128.4 (d, C-3′, 5′), 128.3 (d, C-5), 126.5 (d, C-2′, 6′), 114.5 (s, C-10), 110.4 (d, C-6), 102.8 (d, C-8), 79.8 (d, C-2), 43.9 (t, C-3). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道的基本一致，因此化合物6鑒定為7-hydroxyflavonone.

化合物7淡黃色晶體.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：7.73 (1H,d,J=8.5 Hz, H-5), 7.06 (1H, d,J= 1.5 Hz, H-2′), 6.89 (1H, dd,J=8.5, 1.5 Hz, H-6′),6.88 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-5′), 6.58 (1H, dd,J= 8.5, 2.2 Hz, H-6), 6.43 (1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 5.39 (1H, dd,J= 13.0, 3.0 Hz, H-2), 3.02 (1H, dd,J= 16.5, 13.0 Hz, H-3a), 2.68 (1H, dd,J=16.5, 3.0 Hz, H-3b).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：190.0 (s, C-4), 164.7 (s, C-7), 163.7 (s, C-9), 145.4 (s, C-3’), 145.1 (s, C-4’), 131.1 (s, C-1’), 128.6(d, C-5), 118.3 (d, C-6’), 115.1 (d, C-5’), 114.1(s, C-10), 113.8 (d, C-2’), 110.4 (d, C-6), 102.8 (d, C-8), 79.7 (d, C-2), 43.8 (t, C-3). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道的基本一致，因此化合物7鑒定為butin.

化合8物淡黃色針晶.1H NMR (500 MHz, CD3COCD3)δ：8.17 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-2′, 6′), 8.02(1H,d,J= 9.0 Hz, H-5), 7.05 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 7.02 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-3′, 5′), 7.01 (1H, dd,J= 9.0, 2.0 Hz, H-6).13C NMR (125 MHz, CD3COCD3)δ：172.2 (s, C-4), 162.5 (s, C-9), 159.0 (s, C-4′), 157.1 (s, C-7), 144.6 (s, C-2), 137.1 (s, C-3), 129.3 (d, C-2′, 6′), 126.6 (d, C-5), 122.9 (s, C-1′), 115.4 (d, C-3′, 5′), 114.7 (d, C-6), 114.3 (s, C-10), 102.3 (d, C-8). 以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道的基本一致，因此化合物8鑒定為3,7,4′-trihydroxyflavone.

3 結(jié)語

對琴葉風(fēng)吹楠枝葉開展了化學(xué)成分研究，從中共分離鑒定了8個黃酮類化合物，分別為tectorigenin (1), 7-O-methyltectorigenin (2), calycosin (3), irilone (4), formononetin (5), 7-hydroxyflavonone (6), butin (7), 3,7,4′-trihydroxyflavone (8).其中1～5為異黃酮，6,7為二氫黃酮，8為黃酮醇，化合物2～4為首次從該種植物中分離得到.上述研究進(jìn)一步加深了對琴葉風(fēng)吹楠化學(xué)成分的認(rèn)識，對開發(fā)該屬植物提供了一定的研究基礎(chǔ).