王曉立 王婷 許佳明

摘 要：櫸樹在秋季色彩艷麗、是觀賞價(jià)值高的園林樹種。為了建立櫸樹無性繁殖體系，探討櫸樹葉片愈傷組織的誘導(dǎo)，以櫸樹葉片作為外植體，采用75%乙醇（30s）、2%次氯酸鈉溶液（25min）消毒，接種于含不同激素種類及濃度的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，觀察統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)結(jié)果。結(jié)果表明：櫸樹葉片作為外植體可以啟動(dòng)愈傷組織的形成。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，BA濃度為0.5mg/L，2，4-D濃度0.2mg/L的條件下，愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。為櫸樹無性繁殖體系建立奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：櫸樹；外源激素；愈傷組織；誘導(dǎo)

中圖分類號(hào)：S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190530069

基金項(xiàng)目：宿遷市重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（項(xiàng)目編號(hào)：L201702）；宿遷市科技計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：Z2018219）；江蘇省宿遷學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2018XSJ052）

*為本文通訊作者 櫸樹（Zelkova schneideriana）名稱眾多，又被稱為毛脈櫸、紅櫸、大葉櫸、黃櫸等。櫸樹分類上為榆科（Ulmaceae）櫸樹屬（Zelkova），是我國重點(diǎn)保護(hù)植物[1]。櫸樹是亞熱帶常綠闊葉樹種，在環(huán)境保護(hù)中具有重要作用[2]。櫸樹因其株形高大、枝干優(yōu)美，在秋季色彩艷麗，是觀賞價(jià)值高的園林樹種[3]。櫸樹也是良好用材樹種[4]。近年來，櫸樹野生資源稀缺，對(duì)于櫸樹的保護(hù)與開發(fā)利用尤為重要[5]。本文試驗(yàn)通過對(duì)櫸樹葉片在不同外源激素種類以及濃度配比的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，從而篩選出櫸樹葉片愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基，為進(jìn)一步研究櫸樹無性繁殖提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

取自校內(nèi)栽培櫸樹。以葉片作為組織培養(yǎng)外植體。

1.2 培養(yǎng)基配方

本試驗(yàn)采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，BA，2，4-D，NAA 3因素3水平試驗(yàn)（表1）。每種培養(yǎng)基的配方如（表2）。

1.3 試驗(yàn)方法

接種前，將櫸樹葉片外植體沖洗干凈，吸水紙吸干水分后在超凈臺(tái)上用濃度為75%的酒精浸泡30s，再用濃度為2%的Naclo浸泡25min消毒。然后無菌水洗3次，每次1min。將嫩葉分割成5mm×5mm的小塊，置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶5片，每種培養(yǎng)基接種6瓶。培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度（25±1）℃[6]。光照培養(yǎng)16h，黑暗培養(yǎng)8h。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

采SPSS、Microsoft Excel軟件進(jìn)行分析和作圖。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果如表3所示。3個(gè)因素對(duì)櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)影響的主次關(guān)系依次是B>A>C，即2，4-D>BA>NAA。根據(jù)k值各因素對(duì)櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響：BA表現(xiàn)為 0.5mg/L>4mg/L>2mg/L；2，4-D表現(xiàn)為0.2mg/L>0.5mg/L>1 mg/L；NAA表現(xiàn)為 0mg/L> 0.1mg/L> 0.5mg/L。由此可得最優(yōu)水平組合為：A1B1C1，即0.5mg/LBA+ 0.2mg/L2，4-D。

2.2 不同濃度的BA對(duì)櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響

BA濃度在0.5mg/L時(shí)出愈率高，有光澤，生長性良好。當(dāng)BA濃度在2mg/L時(shí)，出愈率低，顏色較暗，生長差（圖1）。當(dāng)BA濃度在4mg/L時(shí)出愈率次于0.5mg/L時(shí)（圖1）。

2.3 不同濃度2，4-D對(duì)櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響

從圖2可得：在2，4-D濃度為0.2mg/L 時(shí)比其它2種誘導(dǎo)培養(yǎng)基出愈情況好，愈傷組織呈翠綠色，在2，4-D濃度為0.5mg/L 時(shí)次之，2，4-D濃度為1mg/L 時(shí)出愈最差。

2.4 不同濃度NAA對(duì)櫸樹愈傷組織的誘導(dǎo)的影響

NAA對(duì)櫸樹愈傷組織的誘導(dǎo)由下圖NAA的效應(yīng)曲線圖（圖3）可知，無NAA時(shí)，誘導(dǎo)率最高，愈傷組織生長好，具有光澤，隨著NAA濃度的升高愈傷組織長勢(shì)逐漸降低，顏色變得暗淡，無光澤。

3 討論與結(jié)論

櫸樹無性繁殖技術(shù)已有很多人在研究。鐘飛霞利用櫸樹小苗的嫩莖、葉片作為外植體，成功誘導(dǎo)出愈傷組織[7]。金曉玲以嫩枝作為外植體，在MS基本培養(yǎng)基上，篩選出了誘導(dǎo)櫸樹芽萌發(fā)最佳培養(yǎng)基[8]。劉雪梅等發(fā)現(xiàn)適合櫸樹不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基[9]；劉海龍發(fā)現(xiàn)幼嫩葉片誘導(dǎo)愈傷組織最佳配方[10]等。櫸樹葉片愈傷組織最佳培養(yǎng)基為MS+0.5mg/LBA+0.2mg/L2，4-D，出愈率為96.7%。

參考文獻(xiàn)

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[2] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志（第二十二卷）[M].北京：科學(xué)出版社，1999：382-386.

[3] 茹雷鳴，張燕雯，姜衛(wèi)兵.櫸樹在園林綠化中的應(yīng)用[J].廣東園林，2007（6） ：50-52.

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[7] 鐘飛霞.櫸樹無性繁殖技術(shù)研究[D].長沙：中南林業(yè)科技大學(xué)，2010：33-35.

[8] 金曉玲，何平，張日清.櫸樹莖尖的培養(yǎng)[J].中南林學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25（1）：38-41.

[9] 劉雪梅，羅雪梅，王征，等.直接器官發(fā)生途徑的櫸樹微繁體系建立[J].湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37（2）：17-21.

[10] 劉海龍，張日清，汪靈丹，等.櫸樹葉器官再生植株技術(shù)[J].廣西林業(yè)科學(xué)，2013， 42（3）：231-233.