黃露 劉燕華 林安平

[摘要] 目的 研究子宮內(nèi)膜腺癌組織中凋亡抑制蛋白（cIAP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7（Caspase-7）的表達情況及臨床意義。 方法 采用免疫組織化學SP法對2015年1月～2017年12月于重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院接受刮宮和手術(shù)切除的80例子宮內(nèi)膜腺癌組織、50例正常子宮內(nèi)膜組織與50例子宮內(nèi)膜不典型增生組織中cIAP、Caspase-7表達情況進行檢查，并分析cIAP、Caspase-7表達與子宮內(nèi)膜腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，子宮內(nèi)膜腺癌中cIAP、Caspase-7表達的相關(guān)性。 結(jié)果 子宮內(nèi)膜腺癌組織cIAP陽性率高于子宮內(nèi)膜不典型增生組織、子宮內(nèi)膜正常組織，Caspase-7陽性率低于子宮內(nèi)膜不典型增生組織、子宮內(nèi)膜正常組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），子宮內(nèi)膜不典型增生組織、子宮內(nèi)膜正常組織cIAP陽性率、Caspase-7陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。組織學分類G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜腺癌患者組織中的cIAP陽性率低于組織學分類G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，Caspase-7陽性率高于組織學分類G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。Spearman相關(guān)分析顯示，子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7的表達呈負相關(guān)（r = -0.843，P = 0.039）。 結(jié)論 子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP存在明顯高表達，而Caspase-7存在明顯低表達，且兩者均與子宮內(nèi)膜腺癌患者的組織學分類、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切相關(guān)，其兩者表達呈負相關(guān)，值得臨床重點關(guān)注。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜腺癌；凋亡抑制蛋白質(zhì)類；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7；免疫組織化學法；臨床病理特征

[中圖分類號] R71 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）04（b）-0089-04

Expression and clinical significance of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma

HUANG Lu LIU Yanhua LIN Anping

Department of Obstetrics and Gynecology， the Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing 400010， China

[Abstract] Objective To study the expression and clinical significance of apoptosis inhibitory protein （cIAP） and caspase-7 in endometrial adenocarcinoma tissues. Methods The expression of cIAP and Caspase-7 in 80 cases of endometrial adenocarcinoma， 50 normal endometrium tissues and 50 cases of endometrial dysplasia were examined by immunohistochemical SP method in the Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University from January 2015 to December 2017， and the expression of cIAP， Caspase-7 and intrauterine were analyzed. The relationship between the clinicopathological characteristics and the expression of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma. Results The positive rate of cIAP in endometrium adenocarcinoma was higher than that of endometrium atypical hyperplasia and normal endometrium. The positive rate of Caspase-7 was lower than that of endometrium atypical hyperplasia and normal endometrium （P < 0.05）. The endometrium of endometrium was atypical hyperplasia tissue and endometrium was positive. There was no significant difference in cIAP positive rate and Caspase-7 positive rate between normal tissues （P > 0.05）. The positive rate of cIAP in the tissues of G1 to G2， FIGO stage Ⅰ to Ⅱ， and non lymph node metastasis of endometrial adenocarcinoma was lower than that of histological classification G3， FIGO stage Ⅲ to Ⅳ， and lymph node metastasis. The positive rate of Caspase-7 was higher than that of histological classification G3， FIGO stage Ⅲ to Ⅳ， and lymph node metastasis， all of them was statistically significant （P < 0.05）. Spearman correlation analysis showed that the expression of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma was negatively correlated （r = -0.843， P = 0.039）. Conclusion There is a significant high expression of cIAP in endometrial adenocarcinoma， while Caspase-7 has obvious low expression. Both of them is closely related to the histological classification， FIGO staging and lymph node metastasis of endometrial adenocarcinoma. The expression of them is negatively correlated， and it is worthy of clinical attention.

[Key words] Endometrial adenocarcinoma； Apoptosis inhibits proteins； Cysteine aspartase 7； Immunohistochemistry； Clinicopathological features

子宮內(nèi)膜癌屬于臨床上較為常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在女性所有生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中占比為20%～30%，且其中80%以上的患者均為子宮內(nèi)膜腺癌[1]。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的逐漸改變，子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病率正呈逐年升高趨勢，已成為嚴重威脅女性生命健康安全的惡性腫瘤之一[2]。雖然，目前臨床上可通過手術(shù)與放、化療等提高子宮內(nèi)膜腺癌患者的生存率，但晚期子宮內(nèi)膜腺癌的治愈率仍較低。因此，早期診斷并給予有效的治療仍是子宮內(nèi)膜腺癌治療的關(guān)鍵。有研究[3]報道顯示，子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多基因變化的過程，細胞凋亡在其中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。其中凋亡抑制蛋白（cIAP）屬于凋亡抑制因子家族成員之一，其可通過抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7（Caspase-7）以及Caspase-9等的活性，進一步達到抑制細胞凋亡的目的[4]。鑒于此，本研究通過研究子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7的表達及臨床意義，旨在為臨床子宮內(nèi)膜腺癌的治療尋找一種新的分子治療靶點?，F(xiàn)作以下報道：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月～2017年12月于重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院（以下簡稱“我院”）接受刮宮和手術(shù)切除的80例子宮內(nèi)膜腺癌患者存檔石蠟標本，正常子宮內(nèi)膜組織（隨機選取癌旁>5 cm處，術(shù)后經(jīng)病理確診為正常組織）50例存檔石蠟標本與子宮內(nèi)膜不典型增生組織50例存檔石蠟標本。納入標準：①所有患者均經(jīng)臨床影像學檢查以及手術(shù)病理組織活檢確診；②年齡>18周歲；③臨床病歷資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②入院前接受過手術(shù)、放化療等腫瘤相關(guān)治療者；③伴有心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙者；④存在精神疾病或交流溝通障礙者；⑤正在參與其他研究者；⑥妊娠期或哺乳期婦女。其中，子宮內(nèi)膜腺癌患者年齡32～78歲，平均（51.32±10.67）歲；組織學分類：G1～G2 58例，G3 22例；FIGO分期[5]：Ⅰ～Ⅱ期55例，Ⅲ～Ⅳ期25例；肌層浸潤：<1/2有44例，≥1/2有36例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例。正常子宮內(nèi)膜組織婦女的年齡33～79歲，平均（49.38±11.06）歲。子宮內(nèi)膜不典型增生患者年齡30～77歲，平均（50.05±9.87）歲。三組研究對象均為已婚育齡婦女，且各組年齡、生育史比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。所有患者均簽署了知情同意書，本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 研究方法

分別采用免疫組織化學法檢測各組不同組織的cIAP、Caspase-7表達情況，具體方式如下：分別將各組織以10%的甲醛液固定、冷凍、包埋，并制成4 μm厚的連續(xù)切片進行cIAP、Caspase-7免疫組化染色。將標本置于70℃的恒溫箱烘烤30 min，二甲苯脫蠟、梯度酒精水化處理，然后予以檸檬酸熱修復。取出切片磷酸鹽緩沖溶液（PBS）反復沖洗3次，每次3 min，加適量的濃度為3%的雙氧水，室溫下孵育10 min，再次PBS緩沖液反復沖洗。將血清置于切片上，消除非特異性染色，去除封閉液。予以沖洗、顯色、復染、脫水以及透明化處理，最后采用顯微鏡觀察并拍照。其中兔抗人多克隆抗體cIAP（生產(chǎn)批號：20141211）與兔抗人多克隆抗體Caspase-7（生產(chǎn)批號：20141025）均購自美國Prosci公司，免疫組化SP試劑盒（生產(chǎn)批號：20141109）與DAB顯色試劑（生產(chǎn)批號：20140916）均購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 評價標準

評價標準參考文獻[6]：①cIAP與Caspase-7均表達于子宮內(nèi)膜腺癌細胞細胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒狀。根據(jù)染色程度以及陽性細胞所占比例進行綜合評分。其中染色程度評分如下：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞占比評分如下：隨機選取10個高倍鏡視野（400×），記錄10×100個腫瘤細胞內(nèi)的陽性細胞占比情況，占比0%為0分，0%～25%為1分，>25%～50%為2分；>50%～75%為3分；>75%為4分。將染色程度評分與陽性細胞占比評分的乘積作為最后結(jié)果，0分記為陰性，1～2分記為弱陽性，3～4分記為陽性，>4分記為強陽性。陽性率=（弱陽性+陽性+強陽性）/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；cIAP與Caspase-7的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同子宮內(nèi)膜組織cIAP、Caspase-7陽性率比較

子宮內(nèi)膜腺癌組織cIAP陽性率高于子宮內(nèi)膜不典型增生組織、子宮內(nèi)膜正常組織，Caspase-7陽性率低于子宮內(nèi)膜不典型增生組織、子宮內(nèi)膜正常組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；子宮內(nèi)膜不典型增生組織、子宮內(nèi)膜正常組織cIAP、Caspase-7陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7表達與臨床病理特征關(guān)系分析

子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7與年齡、肌層浸潤均不相關(guān)（均P > 0.05）；cIAP、Caspase-7與組織學類型、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（均P < 0.05）；組織學分類G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移cIAP陽性率低于組織學分類G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者；組織學分類G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Caspase-7陽性率高于組織學分類G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。見表2。

2.3 子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7表達的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7的表達呈負相關(guān)（r = -0.843，P = 0.039）。見表3。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率約占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的1/3，且在部分發(fā)達國家，其發(fā)病率甚至超過了宮頸癌[7]。隨著子宮內(nèi)膜活檢與宮腔鏡技術(shù)的廣泛應用，其在子宮內(nèi)膜癌的早期診斷中取得良好效果，但對于部分病理分級較差以及臨床分期較晚的患者而言，患者易產(chǎn)生放化療抵抗，5年生存率并不十分理想[8]。由此，尋找一種新的診斷、治療、預后靶點顯得尤為重要。目前研究[9-10]認為，抑癌基因失活和細胞凋亡紊亂參與了細胞的惡性轉(zhuǎn)化以及腫瘤的進展，在腫瘤細胞逃避機體免疫監(jiān)督過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，且與腫瘤耐受放化療以及術(shù)后復發(fā)均存在密切關(guān)系。cIAP是凋亡抑制蛋白家族的重要成員，它可以通過抑制Caspase凋亡經(jīng)典蛋白，起到抑制細胞凋亡的作用。Choi等[11]研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織中cIAP陽性率明顯高于正常卵巢組織，并認為cIAP與卵巢癌發(fā)生有密切關(guān)系。Gentilin等[12]通過基因芯片對宮頸癌組織進行研究發(fā)現(xiàn)， cIAP基因高表達的宮頸癌患者5年生存率較低。而Caspase-7則是Caspase家族的重要成員，主要參與細胞凋亡，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系[13]。

本研究通過對子宮內(nèi)膜腺癌組織、正常子宮內(nèi)膜組織與子宮內(nèi)膜不典型增生組織中cIAP、Caspase-7表達情況進行比較發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP陽性率高、而Caspase-7陽性率低，這和郭真理等[14]的研究報道相一致，提示子宮內(nèi)膜癌患者cIAP存在明顯高表達，而Caspase-7存在明顯低表達。分析原因，筆者認為Caspase-3、Caspase-7蛋白水解介導腫瘤細胞的凋亡。而cIAP可直接抑制Caspase蛋白水解的過程，同時與Caspase-3、Caspase-7相結(jié)合，進一步對細胞色素C從線粒體釋放之后的凋亡信號通路產(chǎn)生抑制作用，最終達到抑制細胞凋亡的作用。另有研究[15]報道顯示，cIAP作為凋亡抑制蛋白可能具有促進子宮內(nèi)上皮細胞惡性增殖轉(zhuǎn)化，而凋亡蛋白Caspase-7可能具有促進子宮內(nèi)膜腫瘤細胞凋亡的作用。因此，將上述兩項指標作為子宮內(nèi)膜腺癌的治療新靶點具有較佳的前景。此外，組織學分類G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜腺癌患者組織中的cIAP陽性率低于組織學分類G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，Caspase-7陽性率高于組織學分類G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，這表明cIAP、Caspase-7的表達和子宮內(nèi)膜腺癌患者的病情嚴重程度密切相關(guān)，且隨著cIAP表達的升高與Caspase-7的降低，患者的病情逐漸加重。究其原因，筆者認為可能在于：cIAP屬于子宮內(nèi)膜組織惡性進展的促進因素，而Caspase-7是子宮內(nèi)膜組織惡性進展的抑癌因素[16]。其中，cIAP抑制Caspase-7的粗凋亡作用可能促進了子宮內(nèi)膜腺上皮組織惡性增殖的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移，并對患者的預后產(chǎn)生一定程度的影響[17-18]。

從子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7表達的相關(guān)性分析來看，子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7的表達呈負相關(guān)。其原因主要是Caspase-7是cIAP的直接作用蛋白，cIAP可直接抑制Caspase-7蛋白水解的過程，抑制腫瘤細胞凋亡[19-21]。因此，在子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP、Caspase-7的表達呈負相關(guān)。臨床上可以通過對子宮內(nèi)膜組織cIAP、Caspase-7檢查為子宮內(nèi)膜腺癌早期診斷、治療和預后判斷提供依據(jù)。

綜上所述，子宮內(nèi)膜腺癌組織中cIAP存在明顯高表達，而Caspase-7存在明顯低表達，且上述兩項指標與子宮內(nèi)膜腺癌患者的病情發(fā)展密切相關(guān)。臨床工作中可通過聯(lián)合檢測兩項指標表達，為臨床早期診斷以及預后評估提供理論依據(jù)。

[參考文獻]

[1] 姚瑋，衛(wèi)兵，付娟娟，等.子宮內(nèi)膜癌患者人附睪蛋白4含量變化及其與腫瘤組織中凋亡分子表達的相關(guān)性[J].安徽醫(yī)學，2017，38（7）：844-847.

[2] 張振華，李怡帆，盧雯平.中醫(yī)治療晚期婦科惡性腫瘤驗案三則[J].國際中醫(yī)中藥雜志，2017，39（2）：167.

[3] 王明芳，張文劍，王新紅，等.三氧化二砷對人子宮內(nèi)膜癌細胞裸鼠模型中Caspase-3表達的影響[J].實用癌癥雜志，2017，32（1）：9-11.

[4] Li X，Wu K，F(xiàn)an D. CIAPIN1 as a therapeutic target in cancer [J]. Expert Opin Ther Targets，2010，14（6）：603-610.

[5] FIGO Committee on Gynecologic Oncology. FIGO staging for carcinoma of the vulva，cervix，and corpus uteri [J]. Int J Gynaecol Obstet，2014，125（2）：97-98.

[6] Donnell AF，Michoud C，Rupert KC，et al. Benzazepinones and benzoxazepinones as antagonists of inhibitor of apoptosis proteins （IAPs） selective for the second baculovirus IAP repeat （BIR2） domain [J]. J Med Chem，2013，56（20）：7772-7787.

[7] 李晨星，劉忠宇，趙恩鋒，等.細胞凋亡抑制蛋白cIAP與卵巢癌耐藥性的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2012， 12（18）：3584-3585.

[8] 孫炯，楊留才，李仕紅，等.Livin與caspase-3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達水平及相關(guān)性研究[J].醫(yī)學綜述，2014， 20（9）：1708-1710.

[9] 宮瑩瑩，趙衛(wèi)東，何玉，等.內(nèi)皮抑素對子宮內(nèi)膜癌HEC1B細胞凋亡及其機制研究[J].中國臨床藥理學雜志，2017， 33（20）：2043-2046.

[10] Almomen A，Jarboe EA，Dodson MK，et al. Imiquimod Induces Apoptosis in Human Endometrial Cancer Cells in vitro and Prevents Tumor Progression in vivo [J]. Pharm Res，2016，33（9）：2209-2217.

[11] Choi JY，Yoon H，Na G，et al. Evaluation of the Expression of the Inhibitor of Apoptosis Protein Family and Human Telomerase Reverse Transcriptase in Patients with Advanced Colorectal Adenoma [J]. J Cancer Prev，2017，22（2）：98-102.

[12] Gentilin E，Minoia M，Bondanelli M，et al. Growth Hormone differentially modulates chemoresistance in human endometrial adenocarcinoma cell lines [J]. Endocrine，2017，56（3）：621-632.

[13] 徐燕，何濤，袁紅瑛，等.cIAP-1與Caspase-7在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達及其與預后的關(guān)系研究[J].重慶醫(yī)學，2016，45（36）：5107-5109.

[14] 郭真理，陳柯，王曉秋，等.Ezh2、Runx3和caspase-3在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達及相關(guān)性[J].中華病理學雜志，2011，40（6）：387-391.

[15] 申安，王雪蓮，寧厚法，等.沉默cIAP-1基因?qū)Ω伟㏒MMC-7721細胞放療敏感性的影響[J].中華肝膽外科雜志，2017，23（2）：130-133.

[16] 鄭嶸炅，買買提艾力·吾不力，萬學峰，等.Caspase-3、E-cad在新疆維吾爾族艾滋病相關(guān)型與經(jīng)典型卡波西肉瘤患者腫瘤組織中的表達及意義[J].中華傳染病雜志，2017，35（2）：70-73.

[17] 靳紅，謝凱，張美麗，等.cIAP1基因的RNA干擾載體的構(gòu)建及其對卵巢癌細胞的生物學影響[J].實用腫瘤學雜志，2015，33（1）：17-21.

[18] 于丹，伍志強，梅倩，等.宮頸癌組織中LRP16和CIAP2的表達及其意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2015，23（5）：678-681.

[19] 吳建紅，王澤友，姚永良，等.miR-421靶向抑制caspase-3表達調(diào)控BGC-823胃癌細胞的遷移與凋亡[J].實用腫瘤雜志，2015，30（6）：510-515.

[20] 達林泰，鮑琢，斯琴畢力格，等.腫瘤凋亡抑制因子cIAP-1的研究進展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志，2013，45（2）：187-189.

[21] 高艷，曹建平，全桂鳳，等.苦參堿對大鼠宮頸癌組織中Survivin、Caspase-3和Caspase-7表達的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2015，15（23）：4471-4473.

（收稿日期：2018-12-29 本文編輯：王 蕾）