高國強 楊江輝

一份病理報告，就像一份“判決書”。病理診斷可以判定腫瘤的良惡性，腫瘤的原發(fā)灶在哪，腫瘤是否需要切除，切多大范圍，切得干不干凈，是否需要繼續(xù)擴大切除等，都要靠病理醫(yī)生的診斷報告來決定。惡性腫瘤患者治療過程中，該如何用藥？需不需要放化療等與預后密切相關(guān)的治療手段，也要由病理診斷來決定。那么，為什么如此重要的病理報告，在患者看來總是來得很慢，不是“立等可取”呢？

病理診斷是在觀測器官的大體（肉眼）改變、鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)和細胞病變特征而做出的疾病診斷，因此它比臨床上根據(jù)病史、癥狀和體征等做出的分析性診斷（常有多個診斷或可能性診斷）以及利用各種影像（如超聲波、X射線、CT、核磁共振等）所做出的診斷，更具有客觀性和準確性。因此，國外將病理醫(yī)生稱之為“醫(yī)生的醫(yī)生”。大多數(shù)的病理實驗室，就像黑匣子一樣不為患者所知，那我們就從標本送檢到診斷報告來一探究竟……

標本的前處理：固定和取材

簡單來說，固定就是把新鮮標本，放入10%福爾馬林中浸泡?？此坪唵危渥饔脜s至關(guān)重要，一旦做不好，在后續(xù)過程無法彌補。

首先，固定能防止組織自溶和腐敗，使細胞內(nèi)的特殊成分，如一些蛋白質(zhì)等沉淀或凝固，使其定位在細胞內(nèi)的原有部位，便于后續(xù)觀察;其次，組織細胞內(nèi)的不同物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生不同的折光率，對染料產(chǎn)生不同的親和力，經(jīng)染色后容易區(qū)別;固定劑還有硬化作用，能夠使組織硬度增加，便于制片。因此，充分的固定是制作良好切片的前提，一般要求固定液量應為組織總體積的4～5倍，也可10～20倍。組織取下后應立即放入固定液中，大多數(shù)組織應固定24小時。

送檢來的標本，不一定要全部做成切片觀察，取材就是按照檢查的目的和要求切取適當大小的組織塊，以供制片進行顯微鏡檢查之用。一般要求大小1.5×1.5×0.2～0.3cm為宜，并詳細記錄取材過程，必要時對標本攝影存檔。

“化學加工”：包埋、脫水、透明、浸蠟

包埋就是用包埋劑（通常為石蠟），將組織包埋成塊的過程。只有經(jīng)過包埋，才能使組織達到一定的硬度和韌度，才有利于切成所需要的厚度。石蠟包埋法，是目前病理科最常用的包埋法。

為了讓石蠟進入組織，就需要進行脫水和透明。脫水是借某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過程。目前病理科常用梯度酒精，來達到組織脫水的目的。之后需要一種溶劑既能與乙醇混合，又能溶解石蠟，以使石蠟浸入組織塊。這種溶劑目前病理科常用二甲苯，因其化學危害較嚴重，也有用環(huán)保透明劑代替的。在這一過程中，因水分被溶劑（如二甲苯）取代，其折射指數(shù)接近于組織蛋白的折光指數(shù)，組織塊變得透亮，因此稱之為透明。

最后，組織浸入融化的石蠟，就完成了組織“化學加工”程序。

“手工加工”：切片、染色

接下來就到了制片的關(guān)鍵過程——切片，就是用切片機制作切片的過程。切片機對于一名病理技術(shù)員來說，就像槍支之于戰(zhàn)士，戰(zhàn)馬之于騎士。切片要求厚薄均勻，平坦，無褶皺、折疊，無刀痕、裂隙、顫痕。切好的片子放入攤片機中，用載玻片撈起，瀝水后放在展片機（烤片機）上烘烤，之后就可以進行脫蠟染色等處理。

蘇木素-伊紅（H-E）染色，是病理科最常用的染色方法。染色后組織細胞核呈藍色，細胞質(zhì)呈紅色，便于診斷醫(yī)師觀察組織結(jié)構(gòu)，提供診斷依據(jù)。除此之外，為顯示細胞內(nèi)外特殊化學物質(zhì)（如含鐵血黃素、黑色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等），還需要進行特殊染色;免疫組織化學染色，利用抗原抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標記技術(shù)，可以對組織和細胞內(nèi)的特定抗原進行定位、定性或半定量檢測;原位分子雜交（FISH）對于腫瘤易感基因檢測、腫瘤的預后判斷和監(jiān)測、腫瘤的個體化和靶向治療等方面應用廣泛。染色后的切片用中性樹膠封固，至此，切片的制作過程就結(jié)束了。

病理醫(yī)師拿到切片后，在顯微鏡下進行仔細觀察，一組標本，通常要看幾十分鐘，碰到有問題的還要看了再看。為了保證病理診斷的準確性，自標本送檢之日起，一般3～5個工作日發(fā)出診斷報告。如需進一步檢查（如特殊染色、免疫組織化學、原位雜交等），則需再適當延長時日。