盧克剛，張紅霞

(1.山東職業(yè)學(xué)院生物工程系，山東濟(jì)南 250104；2.山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟(jì)南 250101)

隨著人們生活水平的提高，食品安全問題越來越受到重視。有機(jī)氯農(nóng)藥（OCPs）和多氯聯(lián)苯（PCBs）屬于環(huán)境中普遍存在的有機(jī)污染物，由于其性質(zhì)穩(wěn)定、半衰期較長、毒性高、脂溶性強(qiáng)等特點，很容易通過食物鏈在脂類物質(zhì)中高度蓄積，極少量的殘留即能對生物體產(chǎn)生復(fù)合干擾損害，甚至致癌、致畸、致突變（LAUBY-SECRETAN等，2016；YANG 等，2015）。近年來，油、蛋、奶等農(nóng)產(chǎn)品的有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯的污染情況逐漸受到重視，測定殘留量的主要方法是氣相色譜法（GC）及其聯(lián)用技術(shù)（付文雯等，2018；丁立平等，2014；趙雁冰等，2011）。

目前，GB/T 5009.19-2008和GB 5009.190-2014是分別測定食品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量和多氯聯(lián)苯含量，樣品均需溶劑提取再經(jīng)凝膠滲透色譜或多次柱色譜層析凈化后方可上機(jī)測定，操作繁瑣，且成本較高（中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，2014；中華人民共和國衛(wèi)生部、中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會，2008）。本研究采用乙腈為溶劑，超聲輔助提取，結(jié)合硫酸酸化凈化、稀釋鹽析法除雜等前處理，操作簡便、快速、凈化徹底，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，通量高，可實現(xiàn)禽蛋中14種有機(jī)氯農(nóng)藥和7種多氯聯(lián)苯的同時測定，能滿足批量禽蛋樣品快速檢測的需要。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料 雞蛋、鵪鶉蛋均為市售。禽蛋去殼后粉碎混勻，裝入容器置于4℃貯藏。

1.1.2 試劑 乙腈、正己烷、丙酮和二氯甲烷：色譜純，賽默飛世爾公司；無水硫酸鈉、氯化鈉和濃硫酸：優(yōu)級純，國藥集團(tuán)；純化水自制。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 標(biāo)準(zhǔn)品：8種有機(jī)氯農(nóng)藥混標(biāo)（α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、p，p"-滴滴伊、o，p"-滴滴涕、p，p"-滴滴滴、p，p"-滴滴涕）、六氯苯、七氯、艾氏劑、順式-氯丹、反式-氯丹、氧氯丹，濃度均為100 mg/L，購于農(nóng)業(yè)部環(huán)保所；7種多氯聯(lián)苯混標(biāo)（PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153、PCB180），濃 度 均 為 10 mg/L，購 于 美 國o2si公司。

混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制：準(zhǔn)確移取適量有機(jī)氯和多氯聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)溶液，用正己烷稀釋，配成1000 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的配制：準(zhǔn)確吸取適量上述混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液用正己烷稀釋，配成濃度為5、10、20、50、100、200 μg/L 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.1.4 儀器 7890B氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測器（μECD）：美國Aglient公司；毛細(xì)管色譜柱（HP-5，30 m×0.25 mm×0.25 μm）：美國Aglient公司；電子天平：北京賽多利斯；渦旋混合器：德國IKA公司；超聲波清洗機(jī)：寧波新芝生物科技公司；離心機(jī)：德國sigma公司；氮吹儀：美國Organomation公司；Mili-Q超純水機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理 提?。悍Q取樣品4 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入10 mL水搖勻，加入20 mL乙腈渦旋2 min，超聲15 min，再加入約4 g氯化鈉，渦旋2 min，8000 r/min離心5 min，移取10 mL有機(jī)層提取液于15 mL具塞離心管中，40℃水浴下氮吹近干，用正己烷定容至2 mL，渦旋 2 min，待凈化。

凈化：上述正己烷溶液加濃硫酸0.2 mL，振搖1 min，9000 r/min離心5 min，棄去下層硫酸廢液。如果硫酸層仍有顏色（表明正己烷層中雜質(zhì)未除完全），再加0.2 mL濃硫酸，重復(fù)操作直至無色。正己烷層再加入3 mL 20%硫酸鈉水溶液，渦旋1 min，9000 r/min離心3 min，取正己烷層加入適量無水硫酸鈉脫水后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中供測定用。

1.2.2 氣相色譜條件 HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；氮氣（≥ 99.999%），恒流，柱流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度為260℃；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL；檢測器（μECD）溫度為300℃；程序升溫：初始溫度50℃，保持1 min，15℃ /min升 至 200℃，3℃ /min升 至260℃，30℃ /min 升至 280℃，保持 5 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器分析條件的選擇 為了使目標(biāo)物有合適的保留時間和良好的分離度，本文考察了色譜柱、柱流速、升溫程序及進(jìn)樣口溫度等影響因素。通過多次實驗，最終確定了1.2.2所述的色譜條件。在此色譜條件下，混合標(biāo)樣、雞蛋空白樣品加標(biāo)色譜圖分別見附圖（I、II）。圖1可見，21種待測目標(biāo)物達(dá)到基線分離，同時避免雜峰的干擾，在30 min內(nèi)就可完成分析。

圖1??有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品（100?μg/L）色譜圖（I）、雞蛋空白樣品加標(biāo)（25?μg/kg）色譜圖（II）

1-α-六六六；2-六氯苯；3-β-六六六；4-γ-六六六；5-δ-六六六；6-PCB28；7-七氯；8-PCB52；9-艾氏劑；10-氧氯丹；11-反式-氯丹；12-PCB101；13-順式-氯丹；14-p，p"-滴滴伊 ；15-PCB118；16-p，p"-滴滴滴；17-o，p"-滴滴涕 ；18-PCB153；19-p，p"-滴滴涕 ；20-PCB138；21-PCB180

2.2 提取溶劑的選擇 為了有效提取目標(biāo)物，根據(jù)禽蛋樣品的特點及目標(biāo)化合物的特性，比較了正己烷、乙腈、丙酮、正己烷與二氯甲烷混合液等4種溶劑的提取效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用含正己烷的溶劑提取極易乳化并有大量的共萃物，而以乙腈為溶劑，目標(biāo)物溶解性好，并能較好地除脂、沉淀蛋白，目標(biāo)物有較好的回收率，故選乙腈為提取溶劑。

2.3 硫酸凈化 硫酸磺化過程中不能劇烈振搖，以免樣品乳化嚴(yán)重，硫酸應(yīng)少量多次添加，根據(jù)酸層顏色決定添加次數(shù)。凈化后如直接進(jìn)樣，引入的酸氣會影響毛細(xì)管柱的涂層，縮短色譜柱壽命，對檢測器也會造成損壞，因此，凈化后的正己烷層要用20%硫酸鈉溶液洗滌以除去殘留的硫酸和磺化物。

2.4 方法的評價

2.4.1 方法的線性范圍、檢出限及定量限 取1.1.3配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行儀器分析，以化合物濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算相關(guān)系數(shù)。以雞蛋空白樣品加標(biāo)來考察方法的檢出限和定量限，S/N≥3、S/N≥10所對應(yīng)的化合物濃度分別為檢出限和定量限，結(jié)果見表1。從表中可見，21種化合物在5～200 μg/L時線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限為0.10～0.20 μg/kg，定量限為0.3 ～ 0.7 μg/kg。

2.4.2 回收率和精密度 在雞蛋空白樣品中添加 3個濃度水平（5、20、100 μg /kg）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行添加回收實驗（每個水平重復(fù)6次）。按照選定的方法進(jìn)行前處理和分析測定，計算各待測組分的回收率及RSD，結(jié)果見表2。由表2可知，在3個濃度加標(biāo)水平下，雞蛋空白樣品中有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯加標(biāo)的平均回收率為75.1%～103.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.41%～6.64%，方法的準(zhǔn)確度與精密度較高，可滿足日常檢測的需要。

表1 方法的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表 2 有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯在雞蛋中的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）????????????%

2.5 實際樣品的檢測 采用本法對市售的20份禽蛋樣品（雞蛋、鵪鶉蛋各10份）進(jìn)行檢測，僅有2份雞蛋和1份鵪鶉蛋樣品中檢出有機(jī)氯農(nóng)藥p，p"-DDT，檢出值均低于5 μg/kg，多氯聯(lián)苯均沒有檢出，說明這些禽蛋樣品受到的污染較輕。

3 結(jié)論

禽蛋是我國居民生活中動物蛋白的重要來源，如果長期攝入有機(jī)氯農(nóng)藥與多氯聯(lián)苯污染的禽蛋會對人體健康產(chǎn)生極大危害。本研究建立了禽蛋中14種有機(jī)氯農(nóng)藥和7種多氯聯(lián)苯殘留同時檢測的氣相色譜方法，該法靈敏度高，重現(xiàn)性好，通過對實際樣品的檢測，驗證了本方法的實用性和可靠性，可為禽蛋中有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯殘留的高通量檢測提供參考。