楊東玲，薛慧文

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅省玉門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 玉門 735211）

布魯氏菌?。˙rucellosis）又稱布氏桿菌病，是由布魯氏菌屬的細(xì)菌侵入機(jī)體引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的一種變態(tài)反應(yīng)性人畜共患性傳染病。布魯氏菌病的易感宿主目前已知有60多種，如家禽、家畜以及野生動(dòng)物等都可以是布魯氏菌病的宿主，動(dòng)物感染布魯氏菌病后會(huì)在動(dòng)物與動(dòng)物之間傳播，造成廣泛性的發(fā)病狀態(tài)或者帶菌狀態(tài)[1]。直接或者間接接觸患病動(dòng)物及其流產(chǎn)分娩時(shí)的分泌物、胎盤胎衣、乳汁、皮毛，食用被布魯氏菌污染的食物以及實(shí)驗(yàn)室接觸等方式也可以被感染。布魯氏菌感染后主要引起雌性動(dòng)物流產(chǎn)和雄性動(dòng)物不育等典型癥狀，人感染后則會(huì)出現(xiàn)波狀熱、虛弱、乏力、關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，嚴(yán)重者會(huì)喪失勞動(dòng)能力和生育能力。布魯氏菌病的傳播介質(zhì)很多，可經(jīng)過皮膚、黏膜、呼吸道及消化道等途徑進(jìn)行傳播[2]。另外，患病公畜的精液中也含有大量的布病原菌，交配時(shí)經(jīng)生殖道進(jìn)行傳播。經(jīng)常接觸動(dòng)物的飼養(yǎng)工、擠奶工、剪毛工等養(yǎng)殖人員，在自身防護(hù)措施不夠或有明顯可見傷口且抵抗力低下、清洗消毒不徹底的情況下，動(dòng)物身體上攜帶的布魯氏菌就可以感染到人類[3]。人類之間的感染和傳播一般很罕見，至目前未見報(bào)道。

近年來，由于動(dòng)物流通加快，異地活畜交易頻繁，引種防病檢疫意識(shí)缺乏，部分農(nóng)戶未經(jīng)申報(bào)盲目調(diào)入攜帶或感染布魯氏菌的動(dòng)物，形成傳染源，致使該市布魯氏菌病死灰復(fù)燃。為了解玉門市的羊布魯氏菌病分布情況和流行特征，對(duì)玉門市12鄉(xiāng)鎮(zhèn)和2個(gè)農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)的所有存欄羊只進(jìn)行了隨機(jī)抽樣，通過血清學(xué)抗體檢測(cè)，掌握該市羊布魯氏菌病感染情況及分布情況，為有效控制疫情提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 以玉門市轄區(qū)內(nèi)12個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和2個(gè)農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)為單位，按照全市不少于2萬份，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)不少于1 500份的既定抽樣監(jiān)測(cè)數(shù)量，選擇羊只存欄200只以上規(guī)模養(yǎng)殖戶定點(diǎn)采樣，隨機(jī)挑選散養(yǎng)戶按養(yǎng)殖比例采集血樣樣品。采集未經(jīng)布魯氏菌疫苗免疫羊只血液樣品69 804份，采集經(jīng)布魯氏菌疫苗免疫羊只血液樣品1 250份的與經(jīng)疫苗免疫血清。

由于樣本容量大，為確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，將12鄉(xiāng)鎮(zhèn)和2個(gè)農(nóng)墾團(tuán)團(tuán)場(chǎng)按照地理位置及地域特點(diǎn)分為四個(gè)片區(qū)，即沿山鄉(xiāng)鎮(zhèn)（昌馬鄉(xiāng)、清泉鄉(xiāng)、赤金鎮(zhèn)）、城郊鄉(xiāng)鎮(zhèn)（玉門鎮(zhèn)、下西號(hào)鄉(xiāng)、黃閘灣鄉(xiāng)、柳河鄉(xiāng)、六墩鄉(xiāng)）、偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（花海鎮(zhèn)、柳湖鄉(xiāng)、獨(dú)山子鄉(xiāng)、小金灣鄉(xiāng)）、農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)（黃花、飲馬），實(shí)行分批次分區(qū)域采樣，冷藏箱保存，當(dāng)天送檢，全血由各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)畜牧獸醫(yī)站提供，檢測(cè)工作在玉門市動(dòng)物疫病預(yù)防控中心國(guó)家生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室完成。

1.1.2 診斷試劑 布魯氏菌琥紅平板凝集試驗(yàn)用抗原、布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)用抗原，布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。試劑均由制標(biāo)單位哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，由甘肅省酒泉市畜牧獸醫(yī)局按年度統(tǒng)一配發(fā)。

1.2 儀器設(shè)備

0.5%石炭酸生理鹽水、潔凈玻璃板、成品的琥紅平板凝集反應(yīng)紙、凝集試驗(yàn)管（三分管）、比濁管、試管、1 ml滅菌吸管、45～50 μl移液器、試管架、燒杯、牙簽（供攪拌用）、酒精燈、火柴、離心管、離心機(jī)、恒溫箱或生化培養(yǎng)箱等。

1.3 方法

根據(jù)省級(jí)和市級(jí)布魯氏菌病抽樣監(jiān)測(cè)方案，結(jié)合玉門市的實(shí)際情況，通過血清學(xué)檢測(cè)開展布魯氏菌病監(jiān)測(cè)工作。血清學(xué)監(jiān)測(cè)方法采用琥紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）進(jìn)行篩選試驗(yàn)，篩選試驗(yàn)陽性樣品再用試管凝集試驗(yàn)（SAT）進(jìn)行確診試驗(yàn)。試驗(yàn)的操作方法和判定標(biāo)準(zhǔn)均按照《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2002）規(guī)定進(jìn)行[4]。

1.3.1 琥紅平板凝集試驗(yàn)（RBT） 首先用離心機(jī)分離血清，將成品的琥紅平板凝集反應(yīng)紙上各格標(biāo)記受檢血清號(hào)，并加相應(yīng)血清30 μl，最后一格加入40 μl生理鹽水作對(duì)照。然后用滴管吸取均勻懸浮的抗原液，在每一格受檢血清旁垂直滴加抗原液30 μl，在3 min內(nèi)用牙簽類小棒攪動(dòng)血清和抗原充分混合，一個(gè)小格用一個(gè)牙簽。在試驗(yàn)中設(shè)置陰陽性對(duì)照，第一格加入布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，第二格加入布魯氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，最后一格加入40 μl生理鹽水作為對(duì)照組。最后結(jié)果判定，在陰、陽性血清對(duì)照成立的條件下，對(duì)被檢血清進(jìn)行判定，受檢血清在3 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。

1.3.2 試管凝集試驗(yàn)（SAT） 首先制備0.5%石炭酸的10%鹽溶液作為抗原和血清的稀釋液，其次稀釋待檢血清，取5支凝集試管排列于試管架上，每份血清用4支凝集試管，依次標(biāo)記檢驗(yàn)編碼，第1管加1.15 ml稀釋液，第2～4管各加入0.5 ml稀釋液，然后用1 ml移液器取被檢血清0.1 ml，加入第1管內(nèi)，并混合均勻，充分混勻后以該移液器吸取混合液0.25 ml棄去；取0.5 ml混合液加入第2管，用該移液器如前述方法混合；再吸第2管混合液0.5 ml至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混勻液0.5 ml。第5管為稀釋液對(duì)照管。稀釋完畢后，將0.5 ml 20倍稀釋的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，此時(shí)血清稀釋倍數(shù)依次變?yōu)?：25、1：50、1：100、1：200；設(shè)陰性血清、陽性血清和抗原對(duì)照，陰性血清的稀釋和加抗原的方法與受檢血清同，陽性血清須稀釋到原有滴度，加抗原的方法與受檢血清同， 抗原對(duì)照：1：20稀釋抗原液5 ml，再加0.5 ml稀釋液，觀察抗原是否有自凝現(xiàn)象。

每次試驗(yàn)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法制備5支比濁管作為判定的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，將試管靜置于37～40℃恒溫箱中24 h，參照比濁管，取出并觀察試驗(yàn)管，按各試管上層液體清亮度判讀記錄結(jié)果。結(jié)果判定，凝集反應(yīng)程度分為五級(jí)：a)++++菌體完全凝集，100%下沉，管底形成大片凝集物，上層液體100%清亮；b）+++菌體幾乎完全（約75%）凝集，管底的片狀凝集物較小而薄，上層液體75%清亮；c）++菌體顯著（約50%）凝集，管底出現(xiàn)凝集環(huán)，液體50%清亮；d）+僅有少部分細(xì)菌凝集，管底可見有稀疏、點(diǎn)狀的凝集物，液體25%清亮；e）—液體均勻混濁，無沉淀凝集物。

2 結(jié)果與分析

2.1 2014-2016年玉門市未經(jīng)免疫羊布魯氏菌病抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

2014-2016年共抽樣監(jiān)測(cè)69 804只羊，檢出陽性樣品數(shù)4 304只，陽性率為6.17%，2015年整體陽性率略微下降，2016年猛然增長(zhǎng)至8.19%，2014-2016年玉門市羊布魯氏菌病呈爆發(fā)式增長(zhǎng)。這其中規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶的抽檢數(shù)量都在減少，規(guī)模場(chǎng)的陽性數(shù)和陽性率在下降，且下降幅度明顯，但全市的羊布魯氏菌陽性率呈上升，說明全市布病疫情主要發(fā)生于分散養(yǎng)殖戶[5]。詳見表1。

2.2 2017-2018年玉門市經(jīng)布魯氏菌S2株弱毒疫苗免疫羊抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

2016年10月份開始，玉門市將羊布魯氏菌病疫苗免疫列入重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃，采用統(tǒng)一配備下發(fā)的豬株布氏菌病弱毒活疫苗(S2株)對(duì)全市除種公羊外的所有基礎(chǔ)母羊、懷孕母羊、新生羔羊及育肥羊進(jìn)行羊布魯氏菌病口服給藥免疫。2017-2018年共抽樣監(jiān)測(cè)經(jīng)布魯氏菌S2株疫苗免疫6個(gè)月以上的羊血清樣品1 250份，檢出陽性樣品4份，4份陽性均為種公畜血清，陽性率由2014年的5.48%降至2018年的0.29%，經(jīng)疫苗免疫控制布魯氏菌病取得了較好的效果（見表2）。

2.3 2014-2018年全市各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)羊布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果及分析

本次調(diào)查中，五年時(shí)間共調(diào)查了包括規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)在內(nèi)的1 151戶71 054只羊，其中羊存欄200只以上規(guī)模（養(yǎng)殖小區(qū)）55個(gè)，實(shí)現(xiàn)全覆蓋檢測(cè)，散養(yǎng)戶1 096戶，占到玉門市羊散養(yǎng)戶9.75%。2014年抽檢規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)共9 204只羊，檢出布魯氏菌病陽性羊302只，其中有31只是種公羊，六墩鄉(xiāng)4個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)中的1個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)陽性羊54只，其余3個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)未檢出陽性羊，花海鎮(zhèn)、赤金鎮(zhèn)、下西號(hào)鄉(xiāng)、清泉鄉(xiāng)、柳河鄉(xiāng)、小金灣的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)未檢出陽性羊。2015年抽檢規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)共9 000只羊，共檢出布魯氏菌病陽性羊170只，其中有玉門鎮(zhèn)、下西號(hào)鄉(xiāng)、黃閘灣鄉(xiāng)、飲馬農(nóng)場(chǎng)、黃花農(nóng)場(chǎng)的養(yǎng)殖場(chǎng)全部檢出陽性羊，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)未檢出陽性羊。2016年抽檢規(guī)模場(chǎng)共9 002只，共檢出陽性羊22只，玉門鎮(zhèn)、下西號(hào)鄉(xiāng)、黃閘灣鄉(xiāng)、黃花農(nóng)場(chǎng)、飲馬農(nóng)場(chǎng)均檢出陽性羊，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)未檢出陽性羊。2017年抽檢全市規(guī)模場(chǎng)檢出布病陽性畜3只，花海鎮(zhèn)一個(gè)種羊場(chǎng)檢出2只種公畜，玉門鎮(zhèn)一個(gè)種羊場(chǎng)檢出1只種公畜，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)未檢出陽性畜，2018年檢出陽性羊1只，來自飲馬農(nóng)場(chǎng)的散養(yǎng)戶（見圖1）。

表1. 2014-2016年玉門未經(jīng)免疫羊布魯氏菌病檢測(cè)結(jié)果

表2. 2017-2018年玉門市經(jīng)免疫羊布魯氏菌病檢測(cè)結(jié)果

圖1. 2014-2018年玉門市各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)羊布病檢測(cè)結(jié)果柱狀圖

圖1反映出，玉門市的布病陽性數(shù)呈現(xiàn)出了明顯的點(diǎn)狀分布特征，以靠近城市中心、交通條件便利、活畜交易頻繁的鄉(xiāng)鎮(zhèn)和農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)出現(xiàn)陽性數(shù)目居多，偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和沿山鄉(xiāng)鎮(zhèn)的陽性數(shù)較少。玉門市2013年至2016年的人間布魯氏菌疫情情況及感染布病新增病例數(shù)的分布情況也印證了這一結(jié)果，即羊布病陽性率高的地區(qū)，人感染布病的新增病例數(shù)也較高，人間布魯氏菌病感染率的趨勢(shì)跟隨動(dòng)物布魯氏菌病疫情的變化而變化，畜間陽性率越高，人間布魯氏菌病也呈現(xiàn)逐年升高[6]。

2.4 2014-2018年玉門市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)及散養(yǎng)戶布病檢測(cè)結(jié)果及分析

玉門市散養(yǎng)戶的羊布病陽性率明顯高于規(guī)模戶的羊陽性率，且散養(yǎng)戶的羊只布病陽性率在逐年升高，在2016年達(dá)到峰值，規(guī)模場(chǎng)的陽性率卻在逐年下降，這可能是由于規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)一旦檢測(cè)發(fā)現(xiàn)陽性畜，便及時(shí)采取撲殺焚燒深埋方式處理凈化，消滅了傳染源，切斷了傳播途徑，迅速控制了疫情。玉門散養(yǎng)戶較多，養(yǎng)殖的羊只所占比例較大，專業(yè)技術(shù)人員缺乏，撲殺補(bǔ)助較低，加上養(yǎng)殖戶有養(yǎng)殖效益、經(jīng)濟(jì)價(jià)值等方面的思想顧慮，給撲殺凈化滅源工作帶來了很大的困難，造成散養(yǎng)戶陽性率逐年升高。詳見表3和圖2。

表3. 2014-2018年玉門市規(guī)模場(chǎng)及散養(yǎng)戶布病檢測(cè)結(jié)果

圖2. 2014-2018年玉門市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶羊布病檢測(cè)結(jié)果柱狀圖

3 討論

檢測(cè)數(shù)據(jù)分析表明，異地調(diào)引和活畜交易進(jìn)入玉門市的母畜及種用公畜是畜間布魯氏菌病爆發(fā)的主要來源，異地調(diào)運(yùn)和交易多在5、6、7、8月份進(jìn)行，春末夏初為發(fā)病的高峰季節(jié)，呈點(diǎn)狀暴發(fā)流行。從地域性看，發(fā)病率農(nóng)墾團(tuán)場(chǎng)（黃花農(nóng)場(chǎng)、飲馬農(nóng)場(chǎng)）＞城郊鄉(xiāng)鎮(zhèn)（玉門鎮(zhèn)、下西號(hào)鎮(zhèn)、黃閘灣鎮(zhèn)、柳河鎮(zhèn)）＞移民鄉(xiāng)鎮(zhèn)（六墩鄉(xiāng)、獨(dú)山子鄉(xiāng)、小金灣鄉(xiāng)）＞偏遠(yuǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（花海鎮(zhèn)、昌馬鄉(xiāng)、赤金鎮(zhèn)、清泉鄉(xiāng)）；從養(yǎng)殖規(guī)模上看，散養(yǎng)戶的發(fā)病率明顯高于規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的發(fā)病率；從年齡分布看，性成熟動(dòng)物的陽性率明顯高于幼齡動(dòng)物；從養(yǎng)殖畜別上看，母畜的易感性明顯高于公畜，公畜多以隱形感染或帶菌狀態(tài)為主，母畜多是通過交配感染了病原。

導(dǎo)致玉門市羊布魯氏菌病的暴發(fā)和地方流行的原因可能有：一是2010年政府加大了對(duì)畜牧養(yǎng)殖業(yè)的投入，以肉羊養(yǎng)殖業(yè)為代表的畜牧業(yè)迅速發(fā)展，外地引種及活畜交易頻繁，養(yǎng)殖戶布病防控檢疫意識(shí)不強(qiáng)，經(jīng)引種、交易將外源性布魯氏菌病引入該市；二是玉門市肉羊養(yǎng)殖管理粗放，養(yǎng)殖水平低下，多以圈舍簡(jiǎn)陋的散養(yǎng)和草場(chǎng)放牧為主，規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖還沒有全部實(shí)現(xiàn)，對(duì)于布病的防控措施無法全部落實(shí)到位；三是由于牛羊的經(jīng)濟(jì)價(jià)值逐年升高，撲殺補(bǔ)助資金過低，出于收支盈利的考慮，散養(yǎng)戶普遍存在畏難隱瞞不報(bào)心理，發(fā)現(xiàn)布病動(dòng)物寧可出售轉(zhuǎn)讓也不報(bào)告，造成布病的零散傳播。

采用疫苗免疫防控布病初步取得了的明顯效果，玉門市現(xiàn)階段布魯氏菌病流行病學(xué)的發(fā)病率介于10%～0.2%之間，且主要集中在種公畜。為確保與玉門市畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全，提出以下防制措施：一是采用疫苗免疫預(yù)防和檢疫撲殺凈化相結(jié)合的方式是現(xiàn)階段以及今后布魯氏菌病防控的有效手段。對(duì)所有生產(chǎn)母畜進(jìn)行疫苗免疫，減少因流產(chǎn)造成的經(jīng)濟(jì)損失，形成免疫保護(hù)屏障，對(duì)種公畜及幼年畜實(shí)施實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)，淘汰凈化陽性種畜，撲殺無害化處理陽性畜[7]；二是加強(qiáng)引種及種用動(dòng)物的布病檢疫，引入動(dòng)物必須經(jīng)檢疫合格隔離飼養(yǎng)1個(gè)月經(jīng)監(jiān)測(cè)健康無疫后混群飼養(yǎng)[8]；三是推行標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)?；B(yǎng)殖，轉(zhuǎn)變養(yǎng)殖方式，提高管理防疫水平，強(qiáng)化從業(yè)者責(zé)任；四是利用融媒體等平臺(tái)宣傳科普布病防控知識(shí)，提高養(yǎng)殖戶和公眾的防病和公共衛(wèi)生安全意識(shí)；五是政府加大對(duì)布病防控的財(cái)政投入力度，提高免疫和撲殺補(bǔ)助補(bǔ)貼，解決廣大養(yǎng)殖戶的后顧之憂，從而控制零散發(fā)病率。

肉牛口炎如何防治？

肉牛口腔黏膜潰爛或潰瘍，洗口后可用碘甘油（5%碘酒1份，甘油9份）或10%磺胺甘油涂抹，每日2次。也可用青霉素1 000國(guó)際單位加適量蜂蜜混勻后，涂患部。已化膿出血的，將獸用冰硼散用紙筒吹入患處，每天1～2次3天可以治愈。

用1%食鹽水，或2%～3%硼酸液，或2%～3%碳酸氫鈉溶液沖洗口腔，一日2～3次?？谇挥袗撼舻模?.1%高錳酸鉀液洗口，唾液分泌旺盛，用1%明礬溶液或鞣酸溶液防治。

觀察肉牛體溫，如果體溫升高，不能采食時(shí)，靜脈注射10%～25%葡萄糖液l 000～1 500 ml，結(jié)合青霉素或磺胺制劑即可，每天兩次。