文 /馬善磊 孫健 王敏

沉淀劑可以除去牛奶樣品中的脂肪、蛋白等物質(zhì)，提高檢測有機氯類農(nóng)殘的效率 // 硫酸鋅與亞鐵氰化鉀反應生成的氰亞鐵酸鋅沉淀有較強的除蛋白質(zhì)能力，適用蛋白質(zhì)含量較高的樣液的澄清。通過向牛奶樣品中添加沉淀劑除去其中的脂肪、蛋白等物質(zhì)，降低氣相色譜法檢測有機氯類農(nóng)殘含量時的色譜峰干擾，達到快速、準確檢測農(nóng)殘含量的目標。

牛奶是一種營養(yǎng)成分齊全、組成比例適宜、易于消化吸收的天然優(yōu)質(zhì)食品。牛奶在食物營養(yǎng)鏈中處于較高級位置，牛奶產(chǎn)業(yè)鏈中涉及的土壤、牧草、水源等環(huán)節(jié)存在被農(nóng)藥污染的可能。食用被農(nóng)藥污染的牛奶對人體健康危害較大。因此GB 2763中對六六六、滴滴涕、硫丹、氯丹、林丹、七氯、艾氏劑、狄氏劑等高毒長殘留期的有機氯類農(nóng)藥制定了殘留限量標準。

氣相色譜法目前廣泛應用于有機氯類農(nóng)殘的檢測中。但在使用氣相色譜法檢測牛奶中的有機氯類農(nóng)藥殘留時發(fā)現(xiàn)，樣品色譜圖中存在大量干擾色譜峰，為了獲得準確數(shù)值需要反復調(diào)整儀器參數(shù)重新進樣分析或重新稱樣進行檢測，這樣不僅增加了試劑耗材的使用量還延長了檢測時間。通過分析發(fā)現(xiàn)，色譜圖中的干擾峰主要來源于牛奶中的脂肪、蛋白等有機物，通過去除牛奶中的有機物，可以有效減少儀器分析中的干擾色譜峰。本文通過研究沉淀劑在去除牛奶中脂肪、蛋白的作用，達到快速、準確檢測樣品的目的。

圖1 未加入沉淀劑的檢測現(xiàn)象（左），加入沉淀劑的檢測現(xiàn)象（右）。

圖2 未加入沉淀劑的檢測譜圖（藍色），加入沉淀劑的檢測譜圖（紅色）。

實驗部分

材料與儀器

1.實驗材料

生乳

2.實驗儀器

450-GC型氣相色譜儀；

AL204型電子天平；

RV 10 basic型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；

MS3 basic型旋渦混勻器；

BF-2000型氮氣干燥系統(tǒng)。

3.試劑耗材

標準物質(zhì)（甲體六六六、乙體六六六、丙體六六六、丁體六六六、O,p’-DDT、p,p’-DDD,p’-DDT、p,p’-DDE、七氯、環(huán)氧七氯、α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸鹽、順式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹、艾氏劑、狄氏劑、）；

乙腈、正己烷、丙酮為色譜純；

硫酸鎂、氯化鈉、亞鐵氰化鉀、硫酸鋅為分析純；

SPE固相萃取柱；

DB-1701P型氣相色譜柱；

VF-17MS型氣相色譜柱。

實驗方法

1.樣品處理

準確稱量9-11g原奶樣品于50ml離心管中，加入20ml乙腈，然后加入約3.5-4.5g硫酸鎂和1.0-1.5g氯化鈉，加入2ml濃度為150g/l亞鐵氰化鉀溶液，混勻，再加入2ml濃度為300g/l硫酸鋅溶液，渦旋混勻后將上層乙腈轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，再用10ml乙腈重復提取一次，合并提取液水浴蒸干。然后向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中加入9ml正己烷、3ml水，搖勻靜置，提取上層正己烷于試管中，氮氣吹干后過SPE小柱凈化。將凈化后樣液氮氣吹干后準確加入1ml正己烷，旋渦混勻后過0.45μm有機系濾膜過濾，進氣相色譜檢測。

2.結(jié)果計算

選擇合適的儀器條件，注射1μl樣品溶液及標準品工作液，得到樣品和標準品中各物質(zhì)的峰面積，然后通過以下公式計算：

式中：X—試樣中待測物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

表1 4個生乳樣品，不加沉淀劑與加入沉淀劑后的檢測結(jié)果。

表2 加入沉淀劑法的加標檢測結(jié)果。

m——稱取試樣的質(zhì)量（g）

C——標準溶液的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）

V——試樣定容的體積，單位為毫升（mL）

As——標準溶液中待測物的峰面積

Ai——試樣溶液中待測物的峰面積

結(jié)果與分析

1.樣品旋蒸完畢后，未添加沉淀劑時，雞心瓶內(nèi)壁有大量白色物質(zhì)；添加沉淀劑后，雞心瓶內(nèi)壁無大量白色物質(zhì)，如圖1所示。

2.上機分析后，不加沉淀劑樣品，存在較多色譜峰干擾的項目；加入沉淀劑后，色譜峰干擾減少或消失，如圖2所示。

加標樣項目平行樣偏差結(jié)果（mg/kg） 回收率 結(jié)果（mg/kg） 回收率α-六六六 0.000489 65.30% 0.000477 63.70% 2.50%林丹 0.000629 83.90% 0.000616 82.20% 2.00%β-六六六 0.0022 93.30% 0.00225 96.60% 2.20%七氯 0.000886 59.10% 0.000896 59.80% 1.10%δ-六六六 0.000661 72.70% 0.000667 73.50% 0.90%艾氏劑 0.000472 63.00% 0.000479 64.00% 1.60%氧化氯丹 0.000426 71.10% 0.000455 75.90% 6.50%環(huán)氧七氯 0.000977 65.20% 0.000989 66.00% 1.20%反式氯丹 0.000366 61.00% 0.000378 63.10% 3.40%色譜柱：VF-17MS順式氯丹 0.000372 62.10% 0.000394 65.80% 5.80%α-硫丹 0.000957 63.90% 0.000988 65.90% 3.20%p，p’-DDE 0.00127 84.50% 0.00118 78.60% 7.20%狄氏劑 0.000911 60.80% 0.000921 61.40% 1.10%O，p’-DDT 0.00106 71.10% 0.00110 73.20% 3.00%p，p’-DDD 0.000977 65.20% 0.000984 65.70% 0.70%β-硫丹 0.00104 69.40% 0.00108 72.40% 4.20%p，p’-DDT 0.00123 68.70% 0.00120 66.30% 2.90%硫丹硫酸鹽 0.000317 63.30% 0.000302 60.40% 4.80%

3.通過檢測4個生乳樣品，不加沉淀劑時有機氯結(jié)果較高的項目，加入沉淀劑后樣品結(jié)果明顯降低。其中δ-六六六、β-六六六、β-硫丹項目，改善后樣品譜圖中已無干擾峰，結(jié)果如表1所示。

4.加標實驗：分別向樣品中添加不同濃度的標準溶液，并通過DB-1701P、VF-17MS兩種氣相色譜柱檢測，加標回收率、平行樣偏差均比較滿意，結(jié)果如表2所示。

結(jié)論

使用氣相色譜法檢測牛奶中有機氯類農(nóng)殘，樣品前處理時，通過加入硫酸鋅溶液與亞鐵氰化鉀溶液生成沉淀劑，可以沉淀、去除牛奶中的部分蛋白、脂肪等物質(zhì)，可顯著降低樣品中的色譜峰干擾，而樣品沉淀過程中，并不會去除樣品中的待測物質(zhì)，說明本方法適用于檢測牛乳中的有機氯類農(nóng)殘檢測。 ■