王曉敏，范哲鋒

(山西師范大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，山西 臨汾 041004)

2-巰基苯并噻唑(MBT)應(yīng)用于工業(yè)中的各個(gè)方面，可用于抗生素的合成、硫化促進(jìn)劑、金屬腐蝕抑制劑及非食用農(nóng)藥[1-2]。但MBT是一種有毒且生物降解性差的環(huán)境污染物，由于MBT在工業(yè)中的廣泛應(yīng)用使其存在于水系統(tǒng)中，對(duì)水生生物及人類造成了很大危害，可誘發(fā)人類腫瘤和過(guò)敏，已引起了人們的廣泛關(guān)注[3-5]。因此，開(kāi)發(fā)水系統(tǒng)中MBT的檢測(cè)方法具有重要意義。目前，檢測(cè)MBT的方法有液相色譜法[6]、氣相色譜法[7]、電化學(xué)法[8-9]等，但這些方法操作繁瑣、靈敏度低、耗時(shí)長(zhǎng)且費(fèi)用昂貴，因此，建立一種經(jīng)濟(jì)、靈敏、快速且操作簡(jiǎn)單的分析方法具有重要意義。

石墨烯量子點(diǎn)(GQDs)是橫向尺寸小于100 nm的石墨烯片，零維GQDs因具有與量子限制和邊緣效應(yīng)相關(guān)的突出特性，而顯示出新的化學(xué)和物理性質(zhì)：低毒性、高穩(wěn)定性、良好的生物相容性與水溶性等[10-12]。GQDs作為熒光傳感器可用于檢測(cè)生物和化學(xué)物質(zhì)，如生物成像[13]、離子檢測(cè)、小分子檢測(cè)等[14]。然而，GQDs具有較大的帶隙，為了改善GQDs的帶隙，提高量子產(chǎn)率(QY)和熒光壽命，在其中摻雜雜原子如氮、磷和硼，可極大地改變它們的光學(xué)性質(zhì)和電子特性，并提供更多的活性位點(diǎn)[15-17]。

本研究通過(guò)一步水熱合成法制備氮摻雜石墨烯量子點(diǎn)(N-GQDs)，構(gòu)建了N-GQDs/Cu2+體系用于快速檢測(cè)環(huán)境水樣中的MBT。該方法操作簡(jiǎn)單、選擇性好、靈敏度高，可應(yīng)用于實(shí)際水樣中MBT的檢測(cè)，并獲得了滿意的結(jié)果。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

LS-55發(fā)光光譜儀(Perkin Elmer，USA)；Cary 300紫外可見(jiàn)(UV-Vis)分光光度計(jì)(Varian，USA)；Invia拉曼光譜儀(Renishaw，UK)；Tecnai G2 F20透射電子顯微鏡(TEM，F(xiàn)EI，USA)；Nicolet 380傅立葉變換紅外光譜儀(FT-IR，Thermo Electron Corp.，USA)；Ultima IV-I85 X射線衍射光譜儀(XRD，Rigaku，Japan)。

尿素、檸檬酸(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司)；十二水磷酸氫二鈉、二水磷酸二氫鈉(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)；五水硫酸銅(天津市申泰化學(xué)試劑有限公司)；2-巰基苯并噻唑(MBT)、苯并噻唑(BT)(阿拉丁試劑(上海)有限公司)；所有化學(xué)試劑均為分析級(jí)試劑；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均使用超純水。

1.2 氮摻雜石墨烯量子點(diǎn)(N-GQDs)的合成

在0.18 g(3 mmol)尿素和0.21 g(1 mmol)檸檬酸中加入5 mL水，攪拌至形成透明澄清溶液，將澄清液移至25 mL特氟龍內(nèi)襯的不銹鋼高壓釜中于160 ℃下保持4 h，待產(chǎn)物自然冷卻至室溫，向產(chǎn)物中加入乙醇，5 000 r/min離心5 min，洗滌3次，60 ℃的真空干燥箱中干燥24 h后得到水溶性良好的固體[18]。

1.3 分析方法

將合成的N-GQDs用水稀釋至0.1 g/L備用，將70 μL 0.1 g/L的N-GQDs和250 μL PBS緩沖溶液(0.2 mol/L，pH 8.5)加至10 mL比色管中，依次加入不同濃度的Cu2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水稀釋至5 mL，充分混合溶液并放置5 min后，將激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)定在365 nm，測(cè)量380～630 nm范圍內(nèi)的熒光光譜。

將70 μL 0.1 g/L 的N-GQDs，250 μL PBS緩沖溶液(0.2 mol/L，pH 8.5)和6.0 μmol/L Cu2+標(biāo)準(zhǔn)溶液加至10 mL比色管中，充分搖勻并放置5 min后，依次加入不同濃度的MBT標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水稀釋至5 mL，充分混合并放置5 min后進(jìn)行熒光檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 N-GQDs的表征

通過(guò)紫外可見(jiàn)吸收光譜和熒光發(fā)射光譜對(duì)N-GQDs的光學(xué)性質(zhì)進(jìn)一步表征。圖2為GQDs和N-GQDs的UV-Vis吸收光譜及熒光光譜?？捎^察到GQDs在360 nm處顯示出強(qiáng)烈的UV吸收，而N-GQDs在330 nm處有顯著的UV吸收，與GQDs相比，N-GQDs的吸收峰藍(lán)移30 nm，由此可以判斷氮原子已摻入GQDs中。曲線c為在365 nm處激發(fā)時(shí)N-GQDs的熒光光譜，可觀察到445 nm處出現(xiàn)最大發(fā)射峰。

圖2 GQDs(a)與N-GQDs(b)的UV-Vis吸收光譜，以及N-GQDs的熒光光譜(c)Fig.2 UV-Vis absorption spectra of GQDs(a) and N-GQDs(b),and fluorescence spectrum of N-GQDs(c)

2.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

2.2.1 pH值的影響分別研究了不同pH值(5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0)的PBS緩沖液對(duì)體系熒光強(qiáng)度猝滅和恢復(fù)的影響，并采用等式進(jìn)行計(jì)算：ΔFq=F0-F；ΔFr=Fr-F。式中，F(xiàn)0和F分別表示不存在和存在Cu2+時(shí)N-GQDs在445 nm處的熒光強(qiáng)度;Fr表示在相同pH下添加MBT時(shí)N-GQDs/ Cu2+體系的熒光強(qiáng)度;如圖3所示，當(dāng)pH范圍在5.0～8.0時(shí)，Cu2+對(duì)N-GQDs的猝滅強(qiáng)度隨pH值的增大而逐漸增加，在pH值為8.0～8.5時(shí)穩(wěn)定，但當(dāng)pH值大于8.5時(shí)，熒光猝滅強(qiáng)度減小。這是由于 N-GQDs表面的羥基和羧基在酸性條件下會(huì)質(zhì)子化，導(dǎo)致Cu2+與這些基團(tuán)的絡(luò)合反應(yīng)受到影響，而當(dāng)pH大于8.0時(shí)，量子點(diǎn)表面的這些基團(tuán)被去質(zhì)子化，Cu2+與N-GQDs的絡(luò)合反應(yīng)增強(qiáng)，并在pH 8.0～8.5時(shí)熒光猝滅強(qiáng)度達(dá)到最大值。當(dāng)加入MBT時(shí)，熒光強(qiáng)度隨著pH值在5.0～8.5范圍內(nèi)逐漸恢復(fù)，且在pH 8.5時(shí)恢復(fù)強(qiáng)度達(dá)到最大值，當(dāng)pH值大于8.5時(shí)，恢復(fù)強(qiáng)度顯著降低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇最佳pH值為8.5。

圖3 pH值對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響Fig.3 Effect of pH value on fluorescence intensity of the systema:fluorescence intensity(ΔFq) for the quenched N-GQDs,b:fluorescence intensity(ΔFr) for the recovered N-GQDs/Cu2+ system

圖4 不同過(guò)渡金屬離子對(duì)N-GQDs熒光猝滅的影響Fig.4 Effects of different transition metal ions on fluorescence quenching of N-GQDs metal ion(1-8):QDs，Cd2+，F(xiàn)e3+，Zn2+，Mn2+，Co2+，Ni2+，Cu2+

2.2.2 猝滅劑的影響考察了過(guò)渡金屬離子對(duì)N-GQDs熒光猝滅的影響，結(jié)果如圖4所示，從圖中可以看出，在相同實(shí)驗(yàn)條件下，Cd2+、Fe3+、Zn2+、Mn2+的猝滅程度很小，Co2+、Ni2+可以猝滅N-GQDs的熒光，Cu2+的猝滅效率最大，因此實(shí)驗(yàn)選擇Cu2+作為猝滅劑。

2.2.3 反應(yīng)時(shí)間的影響考察了反應(yīng)時(shí)間對(duì)N-GQDs與Cu2+以及MBT與N-GQDs/Cu2+作用的影響，結(jié)果表明，體系幾乎不受時(shí)間的影響，本實(shí)驗(yàn)均在反應(yīng)5 min后進(jìn)行測(cè)定。

2.2.4 Cu2+濃度的影響Cu2+加至N-GQDs中可以有效地猝滅熒光，該機(jī)理可以用N-GQDs的π-系統(tǒng)，其邊緣和表面上大量的羥基和羧基來(lái)解釋，即Cu2+很容易吸附于其表面，通過(guò)電子或能量轉(zhuǎn)移導(dǎo)致表面缺陷或電子-空穴復(fù)合消失，從而猝滅N-GQDs的熒光[20]。

如圖5所示，在最佳pH值下，隨著Cu2+濃度的增加，N-GQDs的熒光強(qiáng)度逐漸被猝滅，當(dāng)Cu2+濃度為6.0 μmol/L時(shí)達(dá)到平臺(tái)，進(jìn)一步增加Cu2+濃度時(shí)，體系的熒光強(qiáng)度保持穩(wěn)定。

2.3 不同濃度MBT的檢測(cè)

將MBT加至N-GQDs/Cu2+溶液中，可觀察到體系的熒光強(qiáng)度快速恢復(fù)，這可能是由于MBT結(jié)構(gòu)中存在硫醇基團(tuán)，巰基和Cu2+間的強(qiáng)作用力導(dǎo)致發(fā)生更強(qiáng)的絡(luò)合反應(yīng)[21]，MBT與N-GQDs競(jìng)爭(zhēng)Cu2+，使得Cu2+從N-GQDs表面解離下來(lái)，體系熒光得到恢復(fù)。

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，研究不同濃度MBT對(duì)N-GQDs/Cu2+體系的影響。如圖6所示，隨著MBT濃度的增加，N-GQDs的熒光強(qiáng)度逐漸恢復(fù)，且445 nm處的熒光強(qiáng)度與MBT的濃度在0.4～40.0 μmol/L范圍內(nèi)呈線性，其線性方程為：ΔFr=9.541[MBT]+13.89(μmol/L)，r2為0.995 5，檢出限為0.1 μmol/L。

圖5 不同濃度Cu2+ 對(duì)N-GQDs的熒光猝滅光譜Fig.5 Fluorescence quenching spectra of different concentrations of Cu2+ for N-GQDs

圖6 不同濃度MBT對(duì)N-GQDs/Cu2+體系的熒光恢復(fù)光譜Fig.6 Fluorescence recovery spectra of different concentrations of MBT for N-GQDs/Cu2+ system inset：a linear relationship between MBT concentration and fluorescence recovery intensity

將該方法與文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)MBT的方法進(jìn)行對(duì)比(見(jiàn)表1)，結(jié)果顯示，本文構(gòu)建的體系操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)少、成本低，具有較寬的線性范圍以及較低的檢出限等優(yōu)點(diǎn)。與Li等[22]同樣采用量子點(diǎn)的檢測(cè)方法相比，此量子點(diǎn)為非金屬量子點(diǎn)，其毒性較小，易于制備，且靈敏度更高。

表1 該方法與文獻(xiàn)報(bào)道的MBT檢測(cè)方法的比較Table 1 Comparison between this method and the MBT detection method reported in the literature

圖7 干擾物質(zhì)對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響Fig.7 Effect of interfering substance on fluorescence intensity of the system

2.4 共存物質(zhì)的影響

2.5 實(shí)際樣品的分析

使用上述構(gòu)建的體系檢測(cè)環(huán)境水樣中的MBT。將所收集水樣在4 000 r/min離心10 min，上清液通過(guò)0.2 μm水膜過(guò)濾和適當(dāng)稀釋后，進(jìn)行MBT檢測(cè)以及加入不同濃度MBT標(biāo)準(zhǔn)溶液(10.0、15.0 μmol/L)進(jìn)行回收率研究。結(jié)果如表2所示，水樣中均未檢出MBT，其加標(biāo)回收率為95.0%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD,n=3)為1.7%～2.5%。表明該方法可應(yīng)用于實(shí)際水樣中MBT的檢測(cè)。

表2 實(shí)際水樣中MBT的檢測(cè)Table 2 Detection of MBT in real water samples

*no detected

3 結(jié) 論

本文基于Cu2+可以有效地猝滅N-GQDs的熒光，添加MBT后使得N-GQDs/Cu2+體系熒光恢復(fù)的特性，構(gòu)建了N-GQDs/Cu2+體系的高靈敏熒光傳感器用于環(huán)境水樣中MBT的檢測(cè)。方法具有良好的線性范圍和較低的檢出限，并成功用于實(shí)際樣品的測(cè)定。該方法簡(jiǎn)單、環(huán)保、成本低，有望應(yīng)用于各種水樣中MBT的分析和檢測(cè)。