段玉書 ，胡 永，楊萬霞，熊 燕，杜彩霞，苑春茂，郝小江*，顧 瑋*

1貴州大學(xué)藥學(xué)院，貴陽 550025；2貴州醫(yī)科大學(xué)藥用植物資源功效利用與開發(fā)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；3貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽 550014

繼心腦血管、癌癥、腫瘤之后，糖尿病現(xiàn)已成為當(dāng)今又一個疾病殺手。隨著社會的進(jìn)步與發(fā)展，生活水平的提高，因進(jìn)食過多，體力活動減少而導(dǎo)致的肥胖糖尿病發(fā)病率逐年升高，且我國糖尿病患者呈年輕化，截止2018年其患病人數(shù)超過9 000萬，占據(jù)全球患病率第1位[1]。青錢柳為我國珍貴藥用植物，在降血糖、降血脂方面有良好的療效且藥用歷史悠久，闡明青錢柳中的降血糖功效成分，具有重要的科研價值。

青錢柳青錢柳(Cyclocaryapaliurus)系胡桃科青錢柳屬落葉喬木，又稱為青錢李、搖錢樹或金錢柳，屬于國家二級保護(hù)樹種，該屬現(xiàn)僅存一種，且僅存于中國，因而被譽(yù)為植物界的大熊貓，醫(yī)學(xué)界的第三棵樹[2]。廣泛分布于江西、江蘇、貴州、四川、云南、湖北、湖南、廣西、廣東等地[3]?！吨袊兴庂Y源志要》記載：其樹葉，樹皮具有清熱，消腫的功能，可用于治療頑癬。青錢柳的根、枝、葉均可入藥，具有降血糖和血壓、減肥、抗腫瘤、抗衰老、抗過敏、清熱解暑、提高人體免疫力、促進(jìn)新陳代謝等多種功效。民間常用青錢柳葉當(dāng)茶葉泡茶飲用，因其味甘甜，有“甜茶、神茶”之稱[2]。

青錢柳的研究始于上世紀(jì)70年代,但對其理化成分及保健藥用研究始于上世紀(jì)80年代中期，青錢柳中主要含有三萜類、黃酮、甾體、萜類、有機(jī)酸、多糖等類型成分[4]。動物及臨床試驗(yàn)研究表明，青錢柳具有多種對人體有益的生理和藥理功能，尤其在降血糖、降血脂方面有獨(dú)特的療效。目前，對青錢柳不同部位的降血糖研究已經(jīng)取得了一定的成果，但是對其降血糖作用的研究尚缺乏系統(tǒng)性，其降糖物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制仍不明確[5]。

用植物化學(xué)方法對黔產(chǎn)青錢柳葉進(jìn)行了系統(tǒng)的提取分離，得到化合物13個，包括黃酮類化合物3個，萜類及甾體6個，其他類4個。其中，化合物9為新天然產(chǎn)物，化合物2～4、7、8、11、13為首次從該植物中分離得到。用PNPG法對化合物1～10進(jìn)行了體外α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選。結(jié)果顯示，化合物1和2有較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制活性，表明黃酮類成分是青錢柳降血糖功效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

干燥的青錢柳葉(20 kg)2015年由黔東南雷山縣百佳尚品有限公司提供，經(jīng)貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室顧瑋副研究員鑒定其為胡桃科青錢柳屬植物青錢柳(Cyclocaryapaliurus)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

半制備型高效液相色譜儀：Waters 600(美國)，日立Primaide(日本)，一維核磁共振儀：INOVA-400和500型(Bruker公司，瑞士，TMS為內(nèi)標(biāo))，EI-MS質(zhì)譜儀：安捷倫-5973型，ESI-MS質(zhì)譜儀：惠普LC-MSD型高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，循環(huán)水式多用真空泵：SHE-DⅢ型(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，低溫冷卻液循環(huán)泵：DLSB-D/20型(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)，電熱鼓風(fēng)干燥箱：WGLL-230BE型(天津泰斯特儀器有限公司)，三用紫外分析儀：ZF-6型(上海嘉鵬科技有限公司)，電熱恒溫水浴鍋：HWS24型(上海一恒儀器有限公司)，BioTek Epoch全波長酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

有機(jī)試劑：石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮、乙醇、正丁醇、吡啶。除色譜甲醇、色譜乙腈為分析純，其余均為工業(yè)純。α-葡萄糖苷酶抑制活性試劑： Na2CO3、Na2HPO4、NaH2PO4、DMSO、PNPG均為分析純，阿卡波糖(上海源葉生物科技有限公司，日本)，α-葡萄糖苷酶(Sigma公司，美國)。

1.4 提取與分離

青錢柳干燥葉(20 kg)經(jīng)粉碎后80%的甲醇加熱回流提取三次(4 h/次)，得到青錢柳浸膏。加水溶解成混懸液后依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇分別萃取4次，合并濃縮每部分萃取液。將乙酸乙酯部分浸膏(770 g)用正相硅膠(40～80目)色譜柱梯度洗脫，洗脫體系依次為石油醚/乙酸乙酯(20∶1,10∶1,5∶1)，氯仿/甲醇(1∶0,20∶1,10∶1,5∶1,1∶1,0∶1)，將得到的樣品組分分為得到6個組分(標(biāo)記為A-F)。A(50 g)組分使用正相硅膠(300～400目)色譜柱，經(jīng)石油醚/乙酸乙酯體系洗脫得到化合物8(15 mg)、化合物12(50 mg)和化合物13(30 mg)。經(jīng)正相柱洗脫其他成分經(jīng)MCI柱除去大部分葉綠素，再經(jīng)C-18反相色譜柱(MeOH/H2O 50∶50～100∶0)，得到五個組分(標(biāo)記為A1-A5)。A2經(jīng)石油醚/乙酸乙酯洗脫體系(PE/EtOAc 20∶1～10∶1;)，石油醚/丙酮體系(PE/DMK 15∶1～5∶1,v/v)分離得到化合物10(20 mg)、化合物9和化合物7(26 mg)。D組(37 g)使用反相MCI柱進(jìn)行分離(MeOH/H2O 30∶70～90∶10)，得到7個組分(標(biāo)記為D1～D7)。D1部分正相硅膠柱洗脫(CHCl3/MeOH 20∶1～10∶1)，經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離得到化合物4，剩余部分進(jìn)一步正相硅膠柱洗脫得到化合物1(15 mg)，化合物2(21 mg)經(jīng)HPLC純化分離得到(MeOH/H2O 53：47，流速為2 mL/min,tR=39 min)。D2部分經(jīng)正相硅膠柱洗脫(CHCl3/MeOH 20∶1～10∶1)得到化合物(50 mg)，經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離得到化合物5(100 mg)。 E組(340 g)經(jīng)梯度洗脫(CHCl3/MeOH 20∶1～1∶1)得到5個組分(標(biāo)記為E1-5)，E2部分使用C18反相色譜柱進(jìn)行分離(CH3OH/H2O 50∶50～100∶0)得到5個組分(標(biāo)記為E2-1～E2-5)，E2-2部分經(jīng)正相硅膠柱洗脫(CHCl3/MeOH 20∶1～1∶1)得到化合物6(100 mg)和化合物11，剩余部分經(jīng)Sephadex LH-20、HPLC純化得到化合物3(19 mg)，(MeOH/H2O 40∶60,流速為2 mL/min,tR=126 min)。

1.5 α-葡萄糖苷酶抑制活性測定

α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選使用PNPG法，參考Chen Z等[6]方法略加修改。向96孔板中加入70 μL的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.8)稀釋的樣品和20 μL的0.5 U/mLα-葡萄糖苷酶混溶后置于37 ℃溫浴30 min。之后加入20 μL的10 mmol/L的PNPG，37 ℃孵育45 min。結(jié)束后加入80 μL的0.2 mol/L Na2CO3溶液終止反應(yīng)，置酶標(biāo)儀405 nm下檢測吸光值。同時設(shè)定相同體系下的樣品背景對照組、空白對照組，A為實(shí)驗(yàn)組吸光度；A0為背景組吸光度；B為陰性對照吸光度；B0為空白對照組吸光度。酶活抑制率計(jì)算公式如下：

抑制率(%)=[(B-B0)-(A-A0)]/(B-B0)× 100%

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色粉末(CH3OH)；ESI-MS:m/z455 [M+Na]+;分子式:C21H20O10;1H NMR (CD3OD,400 MHz)δH:7.76 (2H,d,J=8.0 Hz,H-2′,6′),6.93 (2H,d,J=8.0 Hz,H-3′,5′),6.34 (1H,d,J=1.2 Hz，H-8),6.17 (1H,d,J=1.2 Hz,H-6),5.37 (1H,d,J=1.2 Hz,H-1′′),4.22 (1H,dd,J=2.8,1.2 Hz,H-2′′),3.71 (1H,dd,J=9.2,2.8 Hz,H-5′′),3.32 (1H,d,J=9.2 Hz,H-3″),3.32 (1H,m H-5′′),0.92 (3H,d,J=5.2 Hz,H-6′′);13C NMR (CD3OD,100 MHz)δC:179.4 (C-4),167.6 (C-7),163.1(C-5),161.6 (C-4′),159.1(C-2),158.7 (C-9),136.1 (C-3),131.9 (C-2′,6′),122.7 (C-1′),116.5 (C-3′,C-5′),105.5 (C-10),103.5 (C-1′′),100.4 (C-6),95.1 (C-8),73.2 (C-4′′),72.1 (C-5′′),72.0 (C-3′′),71.9 (C-2′′),17.7 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[7]對照一致，因此確定化合物1為阿福豆苷。

化合物2黃色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z473 [M-H]-;分子式:C23H22O11;1H NMR (CDCl3,400 MHz)δH:7.67 (2H,d,J=8.0 Hz,H-2′,6′),6.89 (2H,d,J=8.0 Hz,H-3′,5′),6.32 (1H,s,H-8),6.15 (1H,s,H-6),5.44 (1H,s,H-1′′),4.76 (1H,s,H-4′′),4.16 (1H,dd,J=4.0,4.0 Hz H-2′′),3.80 (1H,dd,J=4.0,4.0 Hz,H-3′′),3.15 (1H,m,H-5′′),1.98 (3H,s,OAc),0.71 (3H,d,J=8.0 Hz H-6′′);13C NMR (CDCl3,100 MHz)δC:178.1 (C-4),171.2 (Ac),164.6 (C-7),161.8 (C-4),160.3 (C-5),157.4 (C-9),157.2 (C-2),134.1 (C-3),130.5 (C-2′ C-6′),121.1 (C-1′),115.1 (C-3′ C-5′),104.5 (C-9),101.1 (C-1′′),98.6 (C-6),93.5 (C-8),73.5 (C-4′′),70.3 (C-3′′),68.6 (C-2′′),68.2 (C-5′′),19.6 (Ac-4′′),16.2 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[8]對照一致,因此確定化合物2為山柰酚3-O-(4′′-O-乙?；?-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物 3黃色粉末(CH3OH)；ESI-MS:m/z485 [M-H]-;分子式:C25H26O10;1H NMR (CD3OD,400 MHz)δH:7.59 (1H,d,J=8.0 Hz H-7′′),7.43 (2H,d,J=8.0 Hz,H-3′′,5′′),7.42 (1H,d,J=8.0 Hz,H-8),6.80 (2H,d,J=8.0 Hz H-2′′,6′′),6.78 (1H,d,J=8.0 Hz,H-6),6.31 (1H,d,J=16.0 Hz H-8′′),5.35 (1H,m H-4),4.81 (1H,d,J=8.0 Hz H-1′),4.51 (1H,dd,J=1.8,1.9 Hz H-6′),4.36 (1H,dd,J=8.5,8.5Hz,H-6′),3.51 (2H,m,H-3′,4′),3.43 (1H,m,H-2′),2.49 (1H,dt,J=3.4,3.1 Hz,H-2),2.20 (1H,m,H-2);13C NMR (CD3OD,100 MHz)δC:206.5 (C-1),168.9 (C-9′′),161.4 (C-4′′),159.3 (C-5),148.4 (C-7′′),146.9 (C-7),135.3 (C-8a),131.3 (C-3′′),131.3 (C-5′′),128.9 (C-4a),127.0 (C-1′′),119.0 (C-8),116.9 (C-6),116.2 (C-2′′,C-6′′),114.9 (C-8′′),104.4 (C-1′),77.8 (C-3′),75.7 (C-5′),75.2 (C-2′),71.7 (C-4′),64.5 (C-4),61.3 (C-6′),33.5 (C-2),30.3 (C-3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[9]對照一致,故確定化合物3為juglanoside J。

化合物 4白色粉末(CH3OH)；ESI-MS:m/z203 [M+Na]+;分子式:C10H12O3;1H NMR (CD3OD,400 MHz)δH:7.53 (H,d,J=8.0 Hz,H-8),7.38 (H,d,J=8.0 Hz,H-5),7.28 (2H,m,H-6,7),4.38 (1H,d,J=8.0 Hz,H-4),4.06 (1H,m,H-1),3.30 (1H,m,H-2),2.16 (2H,m,H-3),2.00 (1H,m H-2);13C NMR (CD3OD,100 MHz)δC:137.7 (C-4a),137.6 (C-8a),128.2 (C-8),127.6 (C-6),127.4 (C-7),73.6 (C-2),68.9 (C-2),66.7 (C-4),37.1 (C-3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[10],因此確定化合物4為1α,2α,4β-3羥基-1,2,3,4-四氫萘酮。

化合物 5白色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z659 [M+Na]+;分子式:C36H60O9;1H NMR (CDCl3,400 MHz)δH:0.91 (3H,s,H-19),1.09 (3H,s,H -29),1.20 (3H,s,H-21),1.36 (3H,s,H-18),1.38 (3H,s,H-27),1.42 (3H,s,H-26),1.87 (3H,s,H-30),4.39 (1H,dt,J=4.8,10.7 Hz,H-12),4.95,4.97 (each 1H,s,H-28),4.99 (1H,d,J=7.3 Hz,H-1′),3.94 (1H,t,J=7.5 Hz,H-2′),4.10 (1H,t,J=9.0 Hz,H-3′),3.63 (1H,t,J=8.8 Hz,H-4′),3.80 (1H,m,H-5′),1.56 (3H,d,J=6.1 Hz,H-6′);13C NMR (CDCl3,100 MHz)δC:179.8 (C-3),148.0 (C-4),113.5 (C-28),97.8 (C-1′),86.9 (C-20),83.6 (C-24),77.4 (C-3′),76.3 (C-4′),75.3 (C-2′),75.1 (C-12),72.8 (C-5′),71.4 (C-25),52.1 (C-5),50.4 (C-14),48.6 (C-17),44.1 (C-9),40.7 (C-13),40.7 (C-10),39.8 (C-8),37.1 (C-7),34.7 (C-11),33.9 (C-22),33.9 (C-15),31.5(C-1),29.9 (C-2),27.4 (C-27),26.7 (C-17),26.3 (C-23),26.2 (C-26),25.9 (C-6),25.0 (C-21),24.6 (C-30),19.9 (C-18),17.6 (C-6′),16.7 (C-29),16.5 (C-19)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[11]對照一致，因此確定化合物5為青錢柳苷III。

化合物6黃色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z777 [M+Na]+;分子式:C41H70O12;1H NMR (CDCl3,400 MHz)δH:5.0 (2H,d,J=6.4 Hz,H-1′,H-1′′),4.33 (1H,dd,J=9.6,2.8 Hz,H-5′a),3.77 (1H,br d,J=9.6 Hz,H-5′b),1.62 (3H,d,J=5.2 Hz,H-6′′),1.49 (3H,s,H-26),1.42(3H,s,H-19),1.41 (3H,s,H-27),1.27 (3H,s,H-29),1.17 (3H,s,H-21),1.09 (3H,s,H-18),1.01 (3H,s,H-28),0.63 (3H,s,H-30);13C NMR (CDCl3,100 MHz)δC:102.4 (C-1′′),102.3 (C-1′),86.9 (C-20),84.7 (C-24),81.9 (C-3),78.8 (C-3′′),77.8 (C-12),77.3(C-4′′),76.0 (C-2′′),75.1 (C-3′),73.3 (C-5′′),72.9 (C-2′),71.6 (C-25),69.6 (C-4′),66.8 (C-5′),54.4 (C-9),51.5 (C-5),50.5 (C-14),49.6 (C-17),42.0 (C-8),41.6 (C-13),40.4 (C-10),38.6(C-4),36.9 (C-7),36.0 (C-1),35.0 (C-11),34.5 (C-22),32.0 (C-15),30.7 (C-29),28.2 (C-27),27.2 (C-2),26.8 (C-23),26.5 (C-26),25.0 (C-21),23.6 (C-28),22.3 (C-16),19.1(C-6),18.8(C-6′′),17.6 (C-18),17.2 (C-19),17.2 (C-30)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[12]對照一致,因此確定化合物6為青錢柳苷J(rèn)。

化合物7黃色粉末(CH3OH)；ESI-MS:m/z325 [M+Na]+;分子式:C20H30O2;1H NMR (CD3OD,400MHz)δH:5.71 (1H,s,H-4),2.10 (3H,s,H-21),1.16 (3H,s,H-19),0.64 (3H,s,H-18);13C NMR (CD3OD,100 MHz)δC:209.4 (C-20),199.6 (C-3),171.0 (C-5),124.0 (C-4),63.6 (C-17),56.0 (C-14),53.7 (C-9),44.0 (C-13),38.7 (C-12),38.7(C-10),35.8(C-1),35.6 (C-8),34.0 (C-2),32.9 (C-6),32.0 (C-7),31.6 (C-21),24.4 (C-15),22.9 (C-16),21.1 (C-11),17.5 (C-19),13.4 (C-18)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[13]對照一致，因此確定化合物7為黃體酮。

化合物8黃色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z403 [M+Na]+;分子式:C21H32O6;1H NMR (CDCl3,400 MHz)δH:5.53 (1H,s,H-6),2.07,2.03 (each,1H,m,H-12,H-3),1.11 (each,1H,m,H-21,18),0.93 (3H,s,H-19);13C NMR (CDCl3,100 MHz)δC:209.6 (C-20),140.6(C-5),118.7 (C-6),92.6 (C-17),89.2 (C-14),74.5 (C-8),72.0 (C-3),69.4 (C-12),60.5 (C-12),44.8 (C-9),43.1 (C-4),39.4 (C-1),37.5 (C-10),35.1 (C-15),34.3 (C-7),32.5 (C-16),31.9 (C-2),29.0 (C-11),27.6 (C-21),18.6 (C-19),8.7 (C-18)。 以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[14]對照一致,因此確定化合物8為去?；}藦苷。

化合物9白色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z381 [M+Na]+;分子式:C23H34O3;1H NMR (CDCl3,400 MHz);δH:5.73 (1H,s,H-4),5.06 (1H,q,H-20β),1.27 (3H,d,J=4.0 Hz,H-21),1.18 (3H,s,H-19),0.74 (3H,s,H-18);13C NMR (CDCl3,100 MHz)δC:199.6 (C-3),171.3 (Ac-CO),160.8 (C-5),123.9 (C-4),73.1 (C-20),55.6 (C-17),55.2 (C-14),53.7 (C-9),41.7 (C-13),38.6 (C-10,12),35.7 (C-8),35.2 (C-1),33.9 (C-2),32.8 (C-6),31.9 (C-7),29.7 (C-16),25.7 (C-15),23.9 (Ac-CH3),20.7 (C-11),20.6 (C-21),17.3 (C-19),12.5 (C-18)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[15]對照一致，因此確定化合物9為20-乙酰氧基-4-烯-3-酮。

化合物10白色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z479 [M+Na]+;分子式:C30H48O3;1H NMR (CDCl3,400 MHz)δH:5.20 (1H,m,H-12),3.20 (1H,m,H-3),2.80 (1H,m,H-18),1.90(1H,m,H-11b),1.86 (1H,m,H-11a),1.72 (1H,m,H-22b),1.68 (1H,m,H-19b),1.68 (1H,m,H-22a),1.67 (1H,m,H-15b),1.64 (1H,m,H-7b),1.63 (1H,m,H-1b),1.63 (1H,m,H-16b),1.61 (1H,m,H-2b),1.59 (1H,m,H-21b),1.58 (1H,m,H-2a),1.58(1H,m,H-7a),1.58 (1H,m,H-16a),1.58 (1H,m,H-19a),1.57 (1H,m,H-1a),1.54 (1H,m,H-21a),1.53 (1H,m,H-9),1.12 (1H,m,H-27),0.97 (1H,s,H-23),0.97 (1H,m,H-6b),0.92 (1H,m,H-16a),0.91 (1H,s,H-30),0.90 (1H,s,H-29),0.89 (1H,s,H-25),0.75 (1H,s,H-24),0.72 (1H,s,H-26),0.72 (1H,m,H-5);13C NMR (CDCl3,100MHz)δC:180.3(C-28),143.6 (C-13),122.7 (C-12),79.1 (C-3),55.2 (C-5),47.6 (C-9),46.5 (C-17),45.9 (C-9a,9b),41.6 (C-14),41.0 (C-18),39.4 (C-4),38.8 (C-16a,16b),37.4 (C-8),33.8 (C-21a,21b),33.1 (C-29),32.7 (C-22a,22b),32.5 (C-7a,7b),30.7 (C-20),28.0 (C-23),27.7 (C-15a,15b),27.2 (C-1a,1b),25.9 (C-27),23.6 (C-11a,11b),23.4 (C-2a,2b),18.3 (C-6a,6b),17.1 (C-26),15.5 (C-24),15.3 (C-25)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[16]對照一致，因此確定化合物10為齊墩果酸。

化合物11白色粉末(CH3OH)；ESI-MS:m/z375 [M+Na]+;分子式:C17H20O8;1H NMR (CD3OD,400 MHz)δH:7.65 (1H,d,J=8.0 Hz H-7′),7.46 (2H,d,J=8.0 Hz,H-2′,6′),6.81 (2H,d,J=8.0 Hz,H-3′,5′),6.28 (1H,d,J=8.0 Hz H-8′),5.28 (1H,m,HO-4),4.13 (1H,m,HO-1),3.31 (1H,dd,J=4.0,8.0 Hz,HO-3),3.69 (3H,s,MeO-7),3.31 (1H,m,H-4),2.21 (1H,dd,J=4.0,8.0 Hz,H-5),2.10 (2H,d,J=8.0 Hz,H-2),2.01 (2H,d,J=8.0 Hz,H-6);13C NMR (CD3OD,100 MHz)δC:175.7 (CO-7),168.5 (C-9′),161.7 (C-4′),147.1 (C-7′),134.0 (C-6′),131.4 (C-2′),127.3 (C-1′),116.7(C-5′),116.1 (C-3′),115.3 (C-8′),76.1 (C-1),72.8 (C-5),72.4 (C-4),70.6 (C-3),53.2 (OMe),38.3 (C-2),30.9 (C-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[17]對照一致，因此確定化合物11為5-O-P香豆?？鼘幩峒柞ァ?/p>

化合物12白色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z315 [M+Na]+;分子式:C19H32O2;1H NMR (CDCl3,400 MHz)δH:5.20-5.40 (6H,m),3.64 (3H,s),2.28 (2H,t,J=7.4 Hz),2.78 (4H,m),1.59 (2H,m),1.23-1.30 (CH2),0.95 (3H,t,J=7.4 Hz);13C NMR (CDCl3,100 MHz)δC:174.3 (s),131.9 (d),130.3 (d),128.2 (d),128.2 (d),127.7 (d),127.1 (d),51.4 (q),34.1 (t),29.7 (t),29.6 (t),29.1 (t),29.0 (t),27.2 (t),25.6 (t),25.5 (t),24.9 (t),20.5 (t),14.2 (q)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[18]對照一致，因此確定化合物12為亞麻酸甲酯。

化合物13白色粉末(CHCl3)；ESI-MS:m/z289 [M+Na]+;分子式:C19H32O2;1H NMR(CDCl3,400 MHz)δH:2.58 (2H,t,J=4.0,4.0 Hz,H-2),1.65 (2H,m,H-3),1.28 (24H,m,H-4～15),0.96 (3H,t,J=8.0,4.0 Hz,H-16);13C NMR(CDCl3,100 MHz)δC:180.1 (C-1),34.0 (C-2),24.7 (C-3),29 (C-4),29.2 (C-5),29.4(C-6),29.7 (C-7～12),29.3 (C-13),31.9 (C-14),22.7 (C-15),14.1 (C-16)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[19]，因此確定化合物13為軟脂酸。

2.2 活性評價

對分離得到的化合物進(jìn)行體外α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選，結(jié)果顯示化合物1和2有較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其IC50分別為18.5 μmol/L和175 μmol/L，均高于陽性對照阿卡波糖(IC50=405 μmol/L)，其余化合物均沒有表現(xiàn)出明顯活性。

圖1 化合物1抑制率曲線Fig.1 Compound 1 inhibition rate curve

圖2 化合物2抑制率曲線Fig.2 Compound 2 inhibition rate curve

3 結(jié)論

青錢柳中主要含有三萜類、黃酮、甾體、萜類、有機(jī)酸、多糖等類型成分,青錢柳具有多方面的藥理活性，尤其在降血糖方面有獨(dú)特的療效。目前研究的藥理功效多集中在提取部位，并未確定其真正的活性成分，而且對其降血糖作用的研究尚缺乏系統(tǒng)性，其降糖物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制仍不明確。本次實(shí)驗(yàn)從黔產(chǎn)青錢柳葉中分離得到化合物13個，其中，化合物9為新天然產(chǎn)物，化合物2～4、7、8、11、13為首次從該植物中分離得到。對分離得到的化合物1～10進(jìn)行了體外α-葡萄糖苷酶活性測定，結(jié)果顯示黃酮類化合物1和2顯示了較強(qiáng)的抑制活性，其余的萜類、甾體類和脂肪酸均沒有活性。由此可以推測黃酮類化合物是青錢柳降血糖有效成分之一。從上述實(shí)驗(yàn)分析青錢柳中有降糖作用的物質(zhì)不只是多糖類，還有可能為黃酮類成分。為進(jìn)一步研究降血糖機(jī)制提供一定的思路和方向。