張春霆，劉冉錄，徐 勇

多基因參與了膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展[1]，抑癌基因FHIT在多種腫瘤組織中表達(dá)缺失和下調(diào)[2-3]，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切有關(guān)[4-5]。Ki67與腫瘤增殖有關(guān)的基因，上升表達(dá)表明腫瘤惡性增殖，但FHIT在膀胱尿路上皮癌中的作用機(jī)制遠(yuǎn)未闡明。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)膀胱尿路上皮癌中FHIT與Ki67蛋白的表達(dá)狀況，探討FHIT與膀胱尿路上皮癌的臨床、病理特征之間及Ki67之間的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取浙江省金華市人民醫(yī)院和天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2010年1月—2015年1月標(biāo)本庫(kù)中手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的膀胱尿路上皮癌標(biāo)本66例，男41例，女25例；年齡42～75歲，平均58.5歲。腫瘤分期按UICC -TNM標(biāo)準(zhǔn)，Tis～T1期38例，T2～T4期28例。病理分級(jí)按WHO方案，I級(jí)41例，II級(jí)13例，III級(jí)12例。病理類型均為膀胱尿路上皮癌，術(shù)前未接受放療、化療或免疫治療。另取42例患者，距腫瘤邊緣3 cm以上癌旁正常膀胱進(jìn)行對(duì)照。

1.2 免疫組化染色方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋。采用S-P 免疫組化染色（S-P試劑盒及兔抗人FHIT、Ki67多克隆抗體購(gòu)于北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司），免疫組化步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：按FHIT蛋白的分布陽(yáng)性強(qiáng)度和陽(yáng)性率。先按細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分：染色強(qiáng)度與背景著色相對(duì)比，無(wú)色為0分；淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。再按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：陰性為0分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)11%～50%為2分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞75%為4分。Ki67以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性(染色的內(nèi)皮細(xì)胞不記入），比較同一標(biāo)本癌組織和正常組織中FHIT和Ki67蛋白的表達(dá)狀況，同時(shí)進(jìn)行FHIT和Ki67蛋白的陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的成積≥2分為免疫反應(yīng)（+）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及精確概率法，兩者相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，以P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 膀胱尿路上皮癌組織中FHIT和Ki67蛋白染色 FHIT表現(xiàn)主要為細(xì)胞漿著色，呈棕黃色或棕褐色顆粒；Ki67表現(xiàn)主要為細(xì)胞核著色，呈棕褐色顆粒，見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 UCI級(jí)FHIT蛋白表達(dá)（×200）

圖2 UCIII級(jí)KI67蛋白表達(dá)（×200）

2.2 FHIT蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá) FHIT蛋白在膀胱尿路上皮癌中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯低于正常膀胱組織，在膀胱尿路上皮癌I期和II～I(xiàn)II期相比，差異有顯著性。在表淺性膀胱尿路上皮癌中的陽(yáng)性率是50.05%，在浸潤(rùn)性膀胱尿路上皮癌中是24.00%（P＜0.05）。Ki67蛋白在膀胱尿路上皮癌中表達(dá)的陽(yáng)性率高于正常膀胱組織，在膀胱尿路上皮癌I級(jí)低于II～I(xiàn)II級(jí)，在浸潤(rùn)性膀胱癌中表達(dá)高于表淺性膀胱癌。見(jiàn)表1。

2.3 FHIT與Ki67在膀胱尿路上皮癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 在26例FHIT陽(yáng)性病例中，Ki67陰性表達(dá)21例。在42例Ki67陽(yáng)性病例中，F(xiàn)HIT陰性表達(dá)24例。兩者都為陽(yáng)性5例，都為陰性2例。兩者呈負(fù)相關(guān)rs = -0.924，P＜0.05。見(jiàn)圖3。

圖3 膀胱尿路上皮癌中FHIT蛋白表達(dá)與Ki67蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

腫瘤抑制基因FHIT包含脆性區(qū)域FRA3B位點(diǎn)，其翻譯的蛋白質(zhì)通過(guò)與Ap3A結(jié)合成FHIT-Ap3A復(fù)合物，促使腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抑癌作用[6]。也可與微管蛋白結(jié)合干擾微管形成，干擾細(xì)胞有絲分裂，阻止細(xì)胞過(guò)度增殖[7]。還可通過(guò)APO-1（凋亡蛋白-1）依賴凋亡途徑，阻止了P53有關(guān)的MDM2的活性，使P53穩(wěn)定表達(dá)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖[8]。

表1 FHIT和Ki67蛋白與膀胱尿路上皮癌臨床病理特征之間的關(guān)系

本研究采用免疫組化SP法，對(duì)66例膀胱尿路上皮癌及42例正常膀胱上皮進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在膀胱尿路上皮癌組織中的FHIT表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于正常膀胱尿路上皮，F(xiàn)HIT表達(dá)陽(yáng)性率隨細(xì)胞分化程度降低和臨床分期上升而逐漸降低。FHIT表達(dá)與年齡、吸煙、腫瘤＞3 cm均有關(guān)，表明FHIT表達(dá)隨著年齡增長(zhǎng)而下降，煙草中的某種有害物引起FHIT基因的表達(dá)缺失。腫瘤大、惡性程度FHIT表達(dá)降低更加顯著，提示FHIT蛋白失活在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)展。Ki67是細(xì)胞周期相關(guān)的腫瘤增殖核抗原，是常用的細(xì)胞增殖標(biāo)志物[9-10]。Ki67在膀胱尿路上皮癌組織中顯著高于正常膀胱尿路上皮組織。Ki67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率隨細(xì)胞分化程度降低有逐漸增高的趨勢(shì)，中高分化組明顯低于低分化組。表淺性腫瘤Tis～T1期明顯高于T2～T4期，浸潤(rùn)性腫瘤陽(yáng)性率高于非浸潤(rùn)性。提示Ki67表達(dá)增高可能與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)，促進(jìn)腫瘤的異常分化和浸潤(rùn)發(fā)展。有研究表明，Ki67的表達(dá)與腫瘤的預(yù)后有關(guān)[11-12]。本組資料顯示，膀胱尿路上皮癌組織中FHIT蛋白下降表達(dá)與Ki67表達(dá)增強(qiáng)相關(guān)性，且二者呈負(fù)相關(guān)。FHIT作為腫瘤抑制基因，可能通過(guò)多種方式失活致使膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展，也可能通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞周期抑制多種腫瘤相關(guān)基因而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

FHIT基因失活與多種腫瘤相關(guān)，F(xiàn)HIT基因在膀胱尿路上皮癌中作用機(jī)制可能抑制腫瘤細(xì)胞周期的進(jìn)展而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。但要了解FHIT基因在膀胱尿路上皮癌中確切作用的分子機(jī)制，尚需進(jìn)一步深入研究。