金建麗，李偉航，2，劉泓瑋，陸 灝

(1.牡丹江師范學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011；2.牡丹江市衛(wèi)生學(xué)校，黑龍江 牡丹江 157011)

擬赤梢魚(Pseudaspiusleptocephalus)屬鯉科雅羅魚亞科擬赤梢魚屬，在黑龍江中游分布最廣，烏蘇里江和松花江次之。因其脂肪少，肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美而深受消費(fèi)者喜愛，魚產(chǎn)品供不應(yīng)求，且在黑龍江上游和下游漁獲物中占據(jù)顯著成分，是當(dāng)?shù)匾环N重要的經(jīng)濟(jì)魚類[1]。目前，有關(guān)擬赤梢魚的相關(guān)研究報(bào)道主要在核型分析[2]，人工養(yǎng)殖[3]，肌肉的營養(yǎng)成分與品質(zhì)[4]，種群資源、魚類群落結(jié)構(gòu)及多樣性[5-7]，遺傳分化和系統(tǒng)發(fā)生[8-9]等方面。但對擬赤梢魚消化系統(tǒng)的形態(tài)學(xué)與組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征的研究未見報(bào)道，為此，筆者采用消化系統(tǒng)指數(shù)測定和H.E染色技術(shù)研究其消化系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)特征，并分析與食性的適應(yīng)性，以期為擬赤梢魚野生資源保護(hù)和人工養(yǎng)殖提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 擬赤梢魚 共30條，均為健康成體，于2015年5月在牡丹江市鏡泊湖捕獲，樣本從湖中出水即用固定液對其進(jìn)行固定處理后帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行后續(xù)研究。

1.1.2 儀器 移液槍(型號：Rainin Pipetlite Magnetic Assist Pipette SL-10、SL-100、SL-500，德國Eppendorf公司)，脫水機(jī)(型號：MICROM STP42 ES，Therom Scientific公司)，干燥箱(Thermo，美國)；自動封片機(jī)(型號：MICROM CTM6，美國Thermo公司)，全自動染色機(jī)(型號：Autostainer XL，德國Leica公司)，組織脫水機(jī)(型號：MICROM STP420ES，美國Thermo公司)，打號機(jī)(型號：PRINTMATE，美國Thermo公司)，病理包埋機(jī)(型號：EG1160，德國Leica公司)，烤片機(jī)(型號：SLIDE WARMER PS-53，SAKURA)，轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)(型號：MICROM HM 340E，美國Thermo公司)，熒光正置顯微鏡(德國Leica公司)，一次性切片刀片(Feather，日本)。

1.1.3 藥品 無水乙醇、95%乙醇、75%乙醇、氨水、鹽酸、二甲苯(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)，石蠟(上海龍圖蠟業(yè)有限公司)，蘇木精、伊紅，中性樹膠(上海如吉生物科技發(fā)展有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 消化系統(tǒng)指數(shù)測定 用直尺測定擬赤梢魚體長，電子天平稱重。解剖后將其消化系統(tǒng)中的食道、前腸、中腸、后腸和肝胰臟取出，剔除肝胰臟周圍的脂肪組織并將腸道中的糞便清除，使用生理鹽水清洗后用電子天平稱重。

1.2.2 石蠟切片及染色方法 消化系統(tǒng)的組織學(xué)特征觀察采用H.E染色技術(shù)[10]進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

用軟件SPSS 16.0計(jì)算體重、體長、腸長、腸重和肝胰臟重的均值和標(biāo)準(zhǔn)差以及肝胰臟重比、腸重比、腸長比等消化系統(tǒng)指數(shù)，并進(jìn)行方差分析及差異顯著性檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)用軟件Excel 2010整理，用軟件Sigmaplot 12.5繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 消化系統(tǒng)形態(tài)學(xué)特征及消化系統(tǒng)指數(shù)

經(jīng)測定，擬赤梢魚的平均體重為(217.81±53.50)g，體長為(24.88±1.49)cm，體重(y)隨體長(x)變化的回歸方程為y=0.004x3.417，R2=0.745(圖1)。經(jīng)剖檢，擬赤梢魚無胃，其消化系統(tǒng)由消化道和消化腺兩部分組成，消化道分為食道、前腸、中腸、后腸，消化腺由肝胰臟組成。

食道為短而粗的直管，食道與腸道膨大處為界，肉眼清晰可見。食道的肌層很厚，具有較好的彈性，這也使其在吞咽食物時表現(xiàn)出較好的膨大和收縮能力。腸道緊隨食道后，呈長管狀，腸長(27.73±2.82)cm，約為體長的1.11倍。腸道在腹腔內(nèi)按“S”形走向，按回折度分為前腸、中腸和后腸，其前腸、中腸到后腸直徑逐漸變小，肌層厚度也呈遞減趨勢。腸重比為0.006±0.003，腸長比(腸道系數(shù))為1.114±0.088。前腸長(7.990±1.180)cm，中腸長(8.074±1.356)cm，二者差異不顯著(P>0.05)；后腸最長，為(11.670±1.473)cm，極顯著長于前腸和后腸(P<0.01)。肝胰臟覆蓋在在消化道上面，分為左右兩葉，呈鮮紅色，肝臟無游離部分，對腸系膜表現(xiàn)出一定的依賴性，兩葉大小基本無差異，起始端寬大，延伸變細(xì)，肝胰臟重比為0.010±0.003。

圖1擬赤梢魚體重與體長的關(guān)系
Fig.1 Relationship between body weight and body length ofP.leptocephalus

2.2 消化系統(tǒng)的組織學(xué)特征

2.2.1 食道 擬赤梢魚的食道在消化道中管徑最粗、管壁最厚，管壁由內(nèi)向外依次分為黏膜層、肌層和漿膜層(圖2)。黏膜層由上皮細(xì)胞組成，平均厚度為(57.67±27.04)μm；肌層由平滑肌組成，平均厚度為(2 073.67±79.61)μm，與黏膜層和漿膜層差異極顯著(P<0.01)；漿膜層由單層扁平上皮細(xì)胞組成，平均厚度為(14.33±2.08)μm，與黏膜層差異不顯著(P>0.05)。食道中幾乎沒有杯狀細(xì)胞。

注：左為H.E ×100，右為H.E ×400；M為黏膜，ML為肌層，S為漿膜層。
Note：H.E ×100(Left)，H.E ×400(Right)；M，mucos；ML，muscularis；S，serosa.

圖2擬赤梢魚食道的橫切結(jié)構(gòu)
Fig.2 Trtansverse cutting ofP.leptocephalusesopagus

2.2.2 腸 擬赤梢魚的前腸緊隨食道后，管徑小于食道而大于中腸和后腸，管壁比食道薄、比中腸和后腸厚，管壁由內(nèi)向外依次分為黏膜層、肌層和漿膜層；中腸管徑小于前腸而大于后腸，管壁比后腸稍厚，管壁由內(nèi)向外依次分為黏膜層、肌層和漿膜層；后腸管壁由內(nèi)向外依次分為黏膜層、肌層和漿膜層3層(圖3)。

前腸黏膜層由杯狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞組成，杯狀細(xì)胞數(shù)量為(116.00±6.00)個/100μm，黏膜層為消化道所有組織中最厚，平均厚度為(849.33±195.06)μm，與肌層和漿膜層差異極顯著(P<0.01)；肌層由平滑肌細(xì)胞組成，平均厚度為(119.00±33.05)μm；漿膜層由單層扁平上皮細(xì)胞組成，平均厚度為(55.00±3.61)μm，與黏膜層差異不顯著(P>0.05)。

中腸黏膜層由杯狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞組成，杯狀細(xì)胞數(shù)量為(102.00±3.00)個/100 μm，黏膜層平均厚度為(643.33±99.75)μm，與肌層和漿膜層差異極顯著(P<0.01)；肌層由成纖維細(xì)胞組成，平均厚度為(126.67±27.10)μm；漿膜層由單層扁平上皮細(xì)胞組成，平均厚度為(42.33±6.51)μm，與黏膜層差異不顯著(P>0.05)。

后腸黏膜層由杯狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞組成，杯狀細(xì)胞數(shù)量為(498.00±12.00)個/100 μm，黏膜層平均厚度為(550.67±50.90)μm，與肌層和漿膜層差異極顯著(P<0.01)；肌層由平滑肌細(xì)胞組成，平均厚度為(89.67±7.23)μm；漿膜層由單層扁平上皮細(xì)胞組成，平均厚度為(51.33±3.06)μm，與黏膜層差異不顯著(P>0.05)。

注：左為前腸(H.E ×400)，中為中腸(上為H.E ×100，下為H.E ×200)，右為后腸(H.E ×400)；M為黏膜，ML為肌層，S為漿膜層，GC為杯狀細(xì)胞，SSE為單層扁平上皮細(xì)胞，L為淋巴細(xì)胞，SMC為平滑肌細(xì)胞。
Note：Left,foregut(H.E ×400),middle,midgut(up H.E ×100，down H.E ×200)，right,hindgut(H.E ×400)；M,mucos;ML,muscularis;S,serosa;GC,goblet cell;SSE,simple squamous epithelium;L,lymphocyte;SMC,smooth muscle cell.

圖3擬赤梢魚前腸、中腸和后腸的橫切結(jié)構(gòu)
Fig.3 Transeverse cutting of foregut,midgut and hindgut ofP.leptocephalus

2.2.3 肝胰臟 擬赤梢魚肝胰臟具有發(fā)達(dá)的中央膽管和小葉間動脈(圖4)，大量的肝細(xì)胞聚集成肝小葉，但是其間結(jié)締組織較少故肝小葉不明顯，中央靜脈位于每一肝小葉的中央。肝細(xì)胞索為多列肝細(xì)胞，以中央靜脈為中心向四周呈放射狀排列形成。肝細(xì)胞呈卵圓形或近似長方形，分界明顯，細(xì)胞核大，單個，位于細(xì)胞的中央，呈圓形或卵圓形。胰腺組織彌散分布于肝組織中，無明顯的胰島。胰腺細(xì)胞呈橢圓形或梭形，細(xì)胞間的分界不明顯，細(xì)胞核單個，呈梭形。

注：左為H.E ×40，右為H.E ×400；CBD為中央膽管，IV為小葉間靜脈，H為肝細(xì)胞，PC為胰腺細(xì)胞。
Note：Left,H.E ×40;right,H.E ×400;CBD,central bile duct;IV,interlobular veins;H,hepatocyte;PC,pancreatic cell.

圖4擬赤梢魚肝胰臟的橫切結(jié)構(gòu)
Fig.4 Transverse cutting ofP.leptocephalushepatopancreas

3 結(jié)論與討論

3.1 擬赤梢魚消化系統(tǒng)的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)結(jié)構(gòu)

擬赤梢魚具有無胃魚的典型特征，消化系統(tǒng)由消化道和消化腺組成，消化道分為食道、前腸、中腸、后腸，腸道在腹腔內(nèi)按“S”形走向；消化腺中肝臟和胰臟不分，合為肝胰臟，胰腺組織彌散分布于肝組織中。消化道有黏膜層、肌層和漿膜層組成，各層的厚度和杯狀細(xì)胞數(shù)均有較大差異。食道的黏膜層最薄，為(57.67±27.04)μm；前腸的最厚，為(849.33±195.06)μm，由前腸到后腸逐漸減??；前腸和中腸黏膜層厚度差異不顯著(P>0.05)，二者顯著厚于食道和后腸(P<0.05)。食道的肌層最厚，為(2073.67±79.61)μm，與腸道的差異顯著(P<0.05)，腸道各段的肌層厚度差異不顯著(P>0.05)。前腸的漿膜層最厚，為(55.00±3.61)μm；其次是后腸，為(51.33±3.06)μm；食道的最薄，為(14.33±2.08)μm。前腸的漿膜層顯著厚于食道和中腸(P<0.05)，與后腸差異不顯著(P>0.05)。后腸富含杯狀細(xì)胞，為(498.00±12.00)個/100μm，顯著多于其他部位(P<0.05)；其次是前腸，為(116.00±6.00)個/100μm，食道中幾乎沒有杯狀細(xì)胞。擬赤梢魚的肝臟和胰臟不分，胰腺組織彌散分布于肝組織中。

3.2 擬赤梢魚消化系統(tǒng)形態(tài)特征與食性的關(guān)系

擬赤梢魚消化道細(xì)長，沒有胃的分化，具鯉科魚類典型的無胃特征。消化道分段明顯，分為前腸、中腸和后腸。其前腸的容量不大，與其以食小型魚類的特點(diǎn)相適應(yīng)。腸道系數(shù)作為重要的形態(tài)學(xué)指標(biāo)，被國內(nèi)外有關(guān)專家應(yīng)用于魚類營養(yǎng)類型的劃分。普遍認(rèn)為，植食性魚類的腸道系數(shù)最高，肉食性魚類的腸道系數(shù)最小，雜食性魚類的腸道系數(shù)居中。植食性和雜食性魚類的腸較長，一般可達(dá)體長的2～5倍，湘華鯪[11]的腸長比甚至達(dá)21.42。一般肉食性魚類的腸較短，為直管狀或有一彎曲，其腸長比值≤1[12]。擬赤梢魚的腸長比為1.11±0.09，長度相對較短，只盤旋2次，與一般肉食性魚類的腸長比相差較大，但與翹嘴紅鲌的腸長比(1.119±0.069)[13]極為接近，與鯉(1.00)[14]、蘭州鲇(0.912±0.035)[15]和黑斑原鮡(0.90±0.19)[16]的腸長比較接近，這些魚中除鯉外都屬肉食性魚類。擬赤梢魚腸道的長度具有較為典型肉食性魚類的特點(diǎn)，也說明肉食性魚類的腸長接近或小于體長。消化道管徑從食道到后腸逐漸變小，腸道從前腸到后腸逐漸變長。肌層較為發(fā)達(dá)，其厚度從食道到后腸逐漸減小，食道的肌層厚度是腸道的十幾倍。魚類的消化道指數(shù)，如腸長比、腸重比、肝胰臟重比等，與魚類消化能力具有密切的關(guān)聯(lián)性[15]。擬赤梢魚的腸重比為0.006±0.003，肝胰臟重比為0.010±0.003，與肉食性的大鰭鳠[17](腸重比為0.017±0.003，肝胰臟重比為0.0084±0.0029)、蘭州鲇[15](比腸重為0.016±0.001，比肝胰臟重為0.020±0.001)較為接近，而與雜食性的湘華鯪[11](肝胰臟重比為1.21±0.15)差距較大?？梢姡瑪M赤梢魚具有較為典型的肉食性魚類的消化系統(tǒng)形態(tài)特點(diǎn)。

3.3 擬赤梢魚消化系統(tǒng)組織學(xué)特征與食性的關(guān)系

擬赤梢魚的食道很短，黏膜層也是消化道中最薄的，但其具有較厚的肌層，而食道的黏膜層是消化道中最厚的，因此，食道具有儲存食物和將食物向前腸推進(jìn)的重要作用，前腸具有重要的消化作用。擬赤梢魚的這些特點(diǎn)與其食性有關(guān)，擬赤梢魚為肉食性魚類，主要的食物為魚類，其次為甲殼動物，食物的體積較大，且擬赤梢魚無胃，決定了食道須有較大的空間以容納食物。食道的肌層相對消化道其余組織較厚，因此食道具有很好的伸縮性，可以在短時間內(nèi)擴(kuò)大以容納體積較大的食物。腸黏膜層形成寬大的縱行黏膜褶，黏膜褶上還有大量的二級和三級指狀突起，這些復(fù)雜的黏膜突起可以減少食物團(tuán)對食道組織的損傷[18]。前腸的黏膜層明顯厚于消化道其余組織，其肌層厚度僅次于食道，且杯狀細(xì)胞數(shù)量較多，因此前腸在食物的消化中起主要作用。有研究表明，杯狀細(xì)胞分泌的黏液不僅能潤滑食物，便于其吞咽，還能緩沖硬質(zhì)食物對上皮細(xì)胞的機(jī)械損傷[19]；杯狀細(xì)胞具有潤滑、吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)大分子、輔酶因子，抵御外來致病因子等作用[20]。由此推測，擬赤梢魚前腸杯狀細(xì)胞的主要作用是消化，其次具有將食物從前向后推進(jìn)的作用。此外，后腸黏膜層雖然比前腸和后腸都薄，但其具杯狀細(xì)胞的數(shù)量顯著多于消化道中其余組織，因此，后腸可通過杯狀細(xì)胞分泌黏液來增加對黏膜的保護(hù)，同時增強(qiáng)對食物殘?jiān)鼒F(tuán)的通過和排出的潤滑作用，經(jīng)腸的蠕動，把已消化的食物吸收入分布于腸壁上的血管和淋巴管中，未消化的食物殘?jiān)?jīng)肛門排出體外[21]。擬赤梢魚的食道直徑最大，與前腸相接處膨大，類似真胃魚的胃，證明食道是儲存食物的主要場所，前腸是重要的消化場所。肝胰臟作為最大的消化腺，在機(jī)體代謝過程中具有重要的作用。擬赤梢魚胰臟彌散性分布在肝臟中，與波紋唇魚[18]、湘華鯪[11]和烏鱧[22]肝胰臟的組織結(jié)構(gòu)相似。擬赤梢魚消化系統(tǒng)的組織學(xué)特征與其消化功能相適應(yīng)，與食性密切相關(guān)。