楊春葆，登增卓嘎，王玉林，羊海珍，扎 桑

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院農(nóng)業(yè)研究所，西藏拉薩 850032）

青稞是藏區(qū)第一大糧食作物，占西藏糧食總產(chǎn)的80%以上[1]，青藏高原高寒缺氧，降雨量少，蒸發(fā)量大，在地下水位較淺及湖泊密集的地區(qū)[2]，青稞在種子萌發(fā)階段和苗期極易遭受鹽脅迫的影響[3]。目前，雖然傳統(tǒng)育種方法可以有效提高作物耐鹽性[4]，但是對青稞的耐鹽機(jī)理研究較少，難以取得很大突破。由于植物的耐鹽機(jī)理十分復(fù)雜，涉及大量的基因表達(dá)與調(diào)控，必須不斷發(fā)掘青稞耐鹽相關(guān)基因，深入研究這些耐鹽基因的功能，明確青稞耐鹽的分子機(jī)制，為青稞耐鹽新品種選育提供基因資源。本試驗(yàn)為青稞耐鹽基因功能研究的預(yù)試驗(yàn)，篩選耐鹽青稞材料，為培育耐鹽青稞新品種和接下來青稞耐鹽基因的深入研究打下材料基礎(chǔ)，對西藏糧食增產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境的改善具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)以自西藏各地收集來的1160個青稞品種作為試驗(yàn)材料。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分種 每個材料選取30～40粒種子放入紙袋，紙袋上標(biāo)好對應(yīng)材料名稱，依照材料順序及對應(yīng)的編號序錄入電腦，制作成表格。

1.2.2 浸種 將裝有種子的紙袋15個1捆，放入尼龍網(wǎng)袋，將網(wǎng)袋放入加水的培養(yǎng)箱，保證網(wǎng)袋全部浸沒（為防上浮，可用重物壓一下）。溫度25℃，黑暗環(huán)境浸種12～15 h。

1.2.3 催芽 取出浸種的紙袋，在鐵盤上鋪上用水浸透的毛巾，將紙袋側(cè)放在毛巾上，然后在紙袋上覆蓋兩塊水浸透的毛巾。將鐵盤放入人工氣候室，恒溫24℃，黑暗環(huán)境催芽24 h。

1.2.4 播種 在32孔培養(yǎng)盤的每個孔穴上按照順序貼上對應(yīng)數(shù)字標(biāo)簽，裝入2/3的基質(zhì)。取萌發(fā)效果較好的種子放入孔穴，每個材料1個孔穴，每個孔穴播15～20粒，然后覆蓋基質(zhì)。

表1 青稞苗期耐鹽等級劃分Table 1 Classification of salt tolerance grade of highland barley at seedling stage

1.2.5 培養(yǎng) 將培養(yǎng)盤放入鐵盤中，在鐵盤中加水，保持水位在鐵盤深1/3處，使水在培養(yǎng)盤中自由上吸。調(diào)節(jié)環(huán)境溫度20～24℃，12 h光照，12 h黑暗培養(yǎng)。1周后倒出鐵盤中剩余水，換上營養(yǎng)液，營養(yǎng)液液面保持在鐵盤深1/3處。

1.2.6 鹽脅迫處理 青稞幼苗兩葉期時開始對其進(jìn)行鹽脅迫處理。在原營養(yǎng)液配方中加入NaCl，使?fàn)I養(yǎng)液中NaCl濃度達(dá)到400 mmol/L。倒掉鐵盤中原有營養(yǎng)液，加入含NaCl的新營養(yǎng)液，鐵盤中液面高度不變。每天拍照記錄，鹽脅迫處理10 d后開始青稞苗期耐鹽評級。

1.3 數(shù)據(jù)處理分析

采用Microsoft Excel2007進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和圖表繪制，用SPSS22.0軟件進(jìn)行方差分析與多重比較。

2 結(jié)果與分析

鹽脅迫處理10 d后，青稞幼苗生長狀況出現(xiàn)顯著差異。利用K-均值聚類算法，依據(jù)各材料幼苗在鹽脅迫下的死亡比例將各材料耐鹽性劃分為強(qiáng)、較強(qiáng)、中、較弱、弱5級[5]。1160個青稞材料中，幼苗死亡率在0～20.0%的30個，屬強(qiáng)耐鹽性材料；幼苗死亡率在20.1%～40.0%的158個，屬耐鹽性較強(qiáng)材料；幼苗死亡率在40.1%～60.0%的247個，屬中度耐鹽性材料；幼苗死亡率在60.1%～80.0%的361個，屬耐鹽性較弱材料；幼苗死亡率在80.1%～100.0%的365個，屬弱耐鹽性材料。

本試驗(yàn)按表1所示標(biāo)準(zhǔn)劃分青稞幼苗耐鹽等級，其中強(qiáng)耐鹽等級材料為30個，占全部材料比例的2.6%；耐鹽性較強(qiáng)的材料占比13.6%；中耐鹽性占比21.3%；較弱占31.1%；弱耐鹽性占31.3%。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)獲得30個苗期強(qiáng)耐鹽性青稞材料，包括品比 14、ZDM08819、ZDM08941、ZDM08951 等。 本試驗(yàn)采用NaCl濃度為400 mmol/L的營養(yǎng)液對青稞幼苗進(jìn)行處理，調(diào)查第10天各材料幼苗死亡率，從而獲得苗期耐鹽青稞材料。由于作物不同生育時期耐鹽能力不同[6]，接下來還需進(jìn)行青稞不同生育時期耐鹽性試驗(yàn)，對本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。青稞耐鹽品種材料篩選的目的在于為耐鹽基因在青稞材料中的結(jié)構(gòu)、功能與青稞耐鹽性之間關(guān)系研究[7-9]、篩選耐鹽品種奠定一定的研究基礎(chǔ)。