劉禮杰，盛 敏，李 蛟，冉曉龍，李靖寧，王新衛(wèi)

（1. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州 450002；2. 河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 471000；3. 寧夏回族自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏銀川 750000）

布魯菌氏?。╞rucellosis，以下簡(jiǎn)稱(chēng)布病）是由布魯氏菌（Brucella）引起的人獸共患傳染病。該病主要傳染源是發(fā)病及帶菌的牛、羊等家畜。布魯氏菌主要侵害感染動(dòng)物的生殖系統(tǒng)，導(dǎo)致懷孕母畜胎膜發(fā)炎，引起不孕、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等，從而降低家畜的繁殖成活率，使產(chǎn)肉和產(chǎn)奶量下降，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展[1]。該病還具有重要的公共衛(wèi)生意義，人可通過(guò)接觸病畜流產(chǎn)物等而感染，導(dǎo)致感染者出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)等的損害[2]。而家畜，特別是牛、羊、豬等，是導(dǎo)致人患病的主要傳染源。國(guó)內(nèi)布病總體上表現(xiàn)為以羊種布魯氏菌為主的混合感染，但隨著時(shí)間和地域的改變，其流行特點(diǎn)也有所變化[3-4]。為此，本研究以河南省某縣所有養(yǎng)羊場(chǎng)和散養(yǎng)村為研究對(duì)象，通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)，掌握該縣羊群布病感染狀況，找出布病感染陽(yáng)性場(chǎng)，通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查，探尋該縣羊養(yǎng)殖場(chǎng)布病發(fā)生的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，為羊布病的綜合防控提供技術(shù)支持，也為人布病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究設(shè)計(jì)

采用橫斷面研究方法[5]，通過(guò)抽樣采樣、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和問(wèn)卷調(diào)查相結(jié)合的方式，獲得該縣羊布病的場(chǎng)群血清流行率及相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素。

1.1.1 研究區(qū)域和群體 據(jù)2016年底調(diào)查數(shù)據(jù)，該縣共有323個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)和散養(yǎng)村，存欄羊18 500只，其中養(yǎng)殖場(chǎng)（存欄≥30只）54個(gè)，存欄10 307只，占總存欄的 55.71%。目標(biāo)群是全縣所有羊養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)村，以場(chǎng)（群）為研究單元，即以1個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的所有羊或1個(gè)村的散養(yǎng)羊?yàn)?個(gè)研究單元。該縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)羊養(yǎng)殖情況見(jiàn)表1。

表1 某縣不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的羊養(yǎng)殖情況

1.1.2 病例定義 對(duì)該縣羊養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)村采集的羊血清樣本，經(jīng)虎紅平板凝集試驗(yàn)初篩和試管凝集試驗(yàn)確診為陽(yáng)性的羊定義為陽(yáng)性羊；至少有1只陽(yáng)性羊的養(yǎng)殖場(chǎng)（群）定義為陽(yáng)性場(chǎng)（群），未檢測(cè)到陽(yáng)性羊的場(chǎng)（群）為陰性場(chǎng)（群）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 采用虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的垂直聯(lián)合試驗(yàn)方法。據(jù)相關(guān)資料[6]，所用試驗(yàn)的敏感性和特異性如下：虎紅平板凝集試驗(yàn)敏感性為95%、特異性為80%；試管凝集試驗(yàn)敏感性為85%、特異性為90%；垂直聯(lián)合試驗(yàn)敏感性為81%、特異性為98%。依據(jù)文獻(xiàn)[5]所述方法，計(jì)算真實(shí)流行率和置信區(qū)間。

1.1.4 抽樣策略 采用分層兩階段隨機(jī)抽樣，即養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)村分層抽樣。第1階段：在全縣范圍內(nèi)隨機(jī)抽取養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)村，按估計(jì)流行率方法抽取[7]，采用WinEpi軟件，按照95%的置信水平，50%的預(yù)期群流行率和5%的可接受誤差抽樣，計(jì)算出從全縣269個(gè)村中，需抽取159個(gè)村；采取隨機(jī)抽樣方式確定最終采樣村，全縣54個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)全部抽取。第2階段：在所抽取的場(chǎng)群內(nèi)，按發(fā)現(xiàn)疫病方法進(jìn)行隨機(jī)抽樣，以95%的置信水平、15%的預(yù)期流行率，計(jì)算出每個(gè)場(chǎng)群內(nèi)需抽取20只羊（少于20只的全抽）；以基于風(fēng)險(xiǎn)的方式采樣，優(yōu)先抽取種公羊、有流產(chǎn)史的母羊、年齡超過(guò)6個(gè)月的羊以及從外地新引進(jìn)的羊。

1.1.5 調(diào)查問(wèn)卷設(shè)計(jì) 依據(jù)生產(chǎn)實(shí)際，從飼養(yǎng)管理、生物安全等方面，設(shè)計(jì)“羊群布魯菌病感染風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查表”，在采樣的同時(shí)開(kāi)展問(wèn)卷調(diào)查。

1.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

對(duì)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果和調(diào)查數(shù)據(jù)，用Excel進(jìn)行匯總和描述性分析，用IBM SPSS 22統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素分析，保留P＜0.2的風(fēng)險(xiǎn)因素，然后對(duì)保留的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，得到回歸模型；對(duì)建立的Logistic模型制作ROC曲線(xiàn)，評(píng)估模型的擬合度。

2 結(jié)果

2.1 血清流行率

2.1.1 總體情況 共采集159個(gè)散養(yǎng)村、54個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的3 528份血清樣品。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，檢出26個(gè)陽(yáng)性散養(yǎng)村、12個(gè)陽(yáng)性養(yǎng)殖場(chǎng)，散養(yǎng)村表觀(guān)群體流行率為16.35%，真實(shí)群流行率為18.17%（95%CI：12.14%～24.20%），養(yǎng)殖場(chǎng)表觀(guān)群體流行率為22.22%，真實(shí)群流行率為25.60%（95%CI：13.87%～37.33%）。

2.1.2 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)情況 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的群體流行率差別很大，在0～33.63%之間不等（表2），其中4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的群體真實(shí)血清流行率在20%以下。

2.2 感染風(fēng)險(xiǎn)因素分析

針對(duì)12個(gè)陽(yáng)性養(yǎng)殖場(chǎng)、38個(gè)陰性養(yǎng)殖場(chǎng)，發(fā)放調(diào)查問(wèn)卷54份，回收有效問(wèn)卷50份，回收有效率為92.59%。對(duì)調(diào)查問(wèn)卷涉及的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行二分類(lèi)變量轉(zhuǎn)換并進(jìn)行分析。

2.2.1 單因素分析 針對(duì)問(wèn)卷中的12個(gè)可能風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行分析，篩選到2個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的風(fēng)險(xiǎn)因素（P＜0.05），分別是“羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)”和“共用種公羊”（表3）。

2.2.2 多因素Logistic回歸模型建立 將單因素分析中P＜0.2的變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果見(jiàn)表4。針對(duì)Logistic回歸模型建立了ROC曲線(xiàn)見(jiàn)圖 1，曲線(xiàn)下面積為0.809（95%CI：0.670～0.949）。

表2 某縣不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)散養(yǎng)村羊群布病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本研究顯示，該縣散養(yǎng)村的羊布病表觀(guān)群體流行率為16.35%，真實(shí)群流行率為18.17%，養(yǎng)殖場(chǎng)的表觀(guān)群體流行率為22.22%，真實(shí)群流行率為25.60%。26個(gè)陽(yáng)性場(chǎng)（村）分布在全縣11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的流行率差別較大。本研究以羊群內(nèi)個(gè)體預(yù)期流行率15%計(jì)算抽樣量，可能對(duì)結(jié)果造成一定影響。實(shí)際上，每個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)戶(hù)的群內(nèi)流行率也不同，若使用同一預(yù)期流行率計(jì)算個(gè)體抽樣量，可能導(dǎo)致

場(chǎng)村內(nèi)個(gè)體流行率低于15%的養(yǎng)羊場(chǎng)戶(hù)難以被發(fā)現(xiàn)，從而出現(xiàn)假陰性群的情況。羊種布魯氏菌致病力強(qiáng)、群內(nèi)傳播速度快，因此對(duì)陰性場(chǎng)戶(hù)的鑒別影響不大。本研究?jī)?yōu)先抽取風(fēng)險(xiǎn)動(dòng)物群體，且陽(yáng)性場(chǎng)群定義為至少有1只羊經(jīng)虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的垂直試驗(yàn)檢測(cè)為陽(yáng)性，這樣可以降低假陰性群出現(xiàn)的概率，減少低特異性對(duì)陽(yáng)性場(chǎng)戶(hù)判斷的影響。

表3 羊養(yǎng)殖場(chǎng)布病傳播風(fēng)險(xiǎn)因素單變量分析

表4 某縣布病傳播風(fēng)險(xiǎn)因素多因素Logistics回歸分析結(jié)果

圖1 Logistic回歸模型的ROC曲線(xiàn)

風(fēng)險(xiǎn)因素單因素分析顯示，“存欄量、是否有技術(shù)人員和近1年來(lái)是否有流產(chǎn)、羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)、共用種公羊等”是可能的風(fēng)險(xiǎn)因素，但僅有“羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)、共用種公羊”2個(gè)因素存在顯著差異，提示其為該地羊患布病的高風(fēng)險(xiǎn)因子。Logistic 回歸結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了兩因素的高風(fēng)險(xiǎn)性。但也應(yīng)該看到，本調(diào)查依據(jù)橫斷面問(wèn)卷和現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查獲得的信息，結(jié)合采樣獲得的血清學(xué)結(jié)果，設(shè)計(jì)了病例對(duì)照研究，以此來(lái)進(jìn)行羊群或者羊只感染布病的風(fēng)險(xiǎn)因素分析研究。此研究中，因?yàn)檠鍖W(xué)檢測(cè)方法自身的敏感性和特異性具有客觀(guān)不足的問(wèn)題，而且采用的抽樣方法盡管經(jīng)過(guò)嚴(yán)密設(shè)計(jì)，但在實(shí)際執(zhí)行中可能受到養(yǎng)殖戶(hù)不接受和不配合等因素影響，因而不能排除存在假陰性或假陽(yáng)性場(chǎng)戶(hù)的可能。在收集信息過(guò)程中，少部分調(diào)查者不愿意參與答題，導(dǎo)致調(diào)查沒(méi)有回應(yīng)，使結(jié)果可能存在一定偏倚，尤其對(duì)“是否共用種公羊、羊羔出生地是否清洗和消毒、公羊來(lái)源”等敏感問(wèn)題。此外，由于問(wèn)卷調(diào)查中的小規(guī)模飼養(yǎng)場(chǎng)戶(hù)居多，飼養(yǎng)管理情況比較相似，因而導(dǎo)致“發(fā)病羊是否隔離、是否有專(zhuān)用產(chǎn)房”等因素在分析中差異不顯著。

此外，研究中把存欄量≥30只定義為羊養(yǎng)殖場(chǎng)，但僅依靠存欄量來(lái)劃分，而不依據(jù)生物安全水平、養(yǎng)殖場(chǎng)建設(shè)等其他情況來(lái)取舍，這會(huì)導(dǎo)致一定的選擇偏倚。但該調(diào)查結(jié)果能基本反映該縣的羊布病實(shí)際流行情況，當(dāng)然也需要進(jìn)一步的隊(duì)列研究。

4 結(jié)論

本研究表明，該縣羊布病流行較為嚴(yán)重，“羊販隨意進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)、共用種公羊”是該縣羊養(yǎng)殖場(chǎng)感染布病高危風(fēng)險(xiǎn)因素。研究提示，該縣需要加強(qiáng)布病防控，提高養(yǎng)羊場(chǎng)戶(hù)的生物安全管理水平，加強(qiáng)散養(yǎng)村內(nèi)種公羊的監(jiān)測(cè)與凈化，及時(shí)淘汰陽(yáng)性羊。