韋明思 谷筱玉 袁銘 王暉 黃天述 劉佳琪 申玲玲 譚曉杰

摘?要?采用超臨界流體萃?。⊿FE）技術(shù)提取廣西莪術(shù)根莖，應(yīng)用超高效合相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPC2-QTOF-MS）分析其提取物，結(jié)合UNIFI軟件的內(nèi)置中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和自建的姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)篩查，快速分離鑒定廣西莪術(shù)SFE提取物中的化學(xué)成分。本研究初步鑒定出廣西莪術(shù)SFE提取物中47種化合物，其中42種是倍半萜類化合物。47種化合物中有8組同分異構(gòu)體化合物，共37種化合物。UPC2采用Torus Diol 130 色譜柱分離，流動(dòng)相A為CO2，流動(dòng)相B為甲醇/異丙醇（3∶1， V/V）+0.1%甲酸，進(jìn)行梯度洗脫，在7 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了47種化合物的分離。本方法無(wú)需復(fù)雜的樣品前處理過程，分析速度快、試劑用量少、成本低、環(huán)保，是一種全面高效的分析方法，為中藥的化學(xué)成分分析提供了新方法。

關(guān)鍵詞?超高效合相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用; 廣西莪術(shù); 同分異構(gòu)體; 超臨界流體萃取

1?引 言

中藥是發(fā)現(xiàn)新的生物活性物質(zhì)的重要來源[1]，是典型的復(fù)雜物質(zhì)體系[2]。當(dāng)前亟需新的分析方法和技術(shù)快速鑒定中藥中具有生物活性的化學(xué)成分[3～5]。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)越來越多地用于中藥成分的研究，如超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-QTOF-MS），促進(jìn)了中藥成分的研究[6～10]。

高效分離是準(zhǔn)確進(jìn)行中藥化學(xué)成分鑒定的關(guān)鍵。以低黏度、高傳質(zhì)以及溶劑化能力強(qiáng)的超臨界流體為流動(dòng)相的超臨界流體色譜（Supercritical fluid chromatography， SFC）具有高效分離和分析速度快等特點(diǎn)[11]。因此，SFC可作為氣相色譜（GC）和液相色譜（LC）的互補(bǔ)技術(shù)[12]。超高效合相色譜（Ultra-performance convergence chromatography， UPC2）結(jié)合了SFC和UPLC及亞2 μm色譜柱技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，提高了儀器的分析通量、重現(xiàn)性和精密度[13]。UPC2在復(fù)雜樣品的分析中表現(xiàn)出強(qiáng)大的分離能力[14]，已被用于食品、藥品和環(huán)境的分析研究[15～17]。超高效合相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（UPC2-QTOF-MS）結(jié)合了具有強(qiáng)大分離能力的UPC2和能提供高分辨、高靈敏度、精確質(zhì)量數(shù)和豐富結(jié)構(gòu)信息的QTOF-MS，將會(huì)在復(fù)雜樣品分析中表現(xiàn)出巨大潛力。目前，UPC2-QTOF-MS技術(shù)主要應(yīng)用于食品科學(xué)領(lǐng)域的研究[18～20]。

廣西莪術(shù)（Curcuma kwangsiensis S. G. Lee & C. F. Liang）的根莖具有行氣破血、消積止痛的功效[21]，主要活性成分是二苯庚烷類化合物和萜類化合物[22～24]。 其中廣西茂術(shù)的糖類化合物也有生物活性作用[25，26]。廣西莪術(shù)的活性成分表現(xiàn)為抗炎、抗腫瘤、抗增殖和免疫刺激活性[25～29]。

氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）是分析廣西莪術(shù)揮發(fā)油中化學(xué)成分的常用方法[30]。GC-MS適用于分析可氣化且熱穩(wěn)定的化合物，對(duì)難氣化或熱不穩(wěn)定的化合物需化學(xué)衍生化處理。在分析中藥化學(xué)成分時(shí)，常會(huì)同時(shí)分離鑒定多種非目標(biāo)未知化合物，當(dāng)其難以氣化或熱不穩(wěn)定時(shí)，化學(xué)衍生化的前處理結(jié)果較差，無(wú)法進(jìn)行GC-MS分析。因此，GC-MS分析中藥的化學(xué)成分會(huì)受到一定的限制。全二維高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（RPLC×RPLC-Q-TOF-MS）分析廣西莪術(shù)根莖時(shí)共分離鑒定出105種化合物[31]。雖然RPLC×RPLC具有超強(qiáng)的分離能力，但僅1D LC的運(yùn)行時(shí)間為120 min，分析時(shí)間長(zhǎng)，不適于中藥的質(zhì)量控制和日常分析。因此，需要建立一種快速、靈敏、高效和全面的分離鑒定中藥化學(xué)成分的新方法。

本研究應(yīng)用超臨界CO2萃?。⊿FE）廣西莪術(shù)根莖，UPC2-QTOF-MS分析其提取物，建立了一種快速、高效分離鑒定中藥化學(xué)成分的新方法。本方法無(wú)需復(fù)雜的樣品前處理過程，分析速度快、全面、高效且環(huán)保。

2?實(shí)驗(yàn)部分

2.1?儀器與試劑

ACQUITY UPC2超高效合相色譜-Xevo G2-XS Q-TOF四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters公司），配有電噴霧離子源（ESI），ISM補(bǔ)償泵; 色譜柱：Torus DEA （100 mm×3 mm， 1.7 μm）、 Torus 1-AA （150 mm×3 mm， 1.7 μm）、Torus 2-PIC （100 mm×3 mm， 1.7 μm）、Viridis BEH （100 mm ×3 mm， 1.7 μm）、Torus Diol 130（100 mm ×3 mm， 1.7 μm）（美國(guó)Waters公司）; UNIFI 1.8.2軟件，內(nèi)置中藥數(shù)據(jù)庫(kù)（美國(guó)Waters公司）; SFE-30A超臨界流體萃取儀（日本島津公司）; GRX6電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海天恒醫(yī)療器械有限公司）; FW135中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）; Milii-Q超純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

甲醇、異丙醇、甲酸（色譜純，美國(guó)Fisher公司）; 乙醇（色譜純，德國(guó)Merck公司）; ?CO2（99.999%，上海振信氣體有限公司）; 實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

2.2?實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1?樣品處理?廣西莪術(shù)根莖樣品采集自廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)藥用植物園蘇燕秋研究員鑒定為廣西莪術(shù)根莖。將其切成片，用電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（40℃）烘干，然后用中草藥粉碎機(jī)粉碎（24目）。取2.0 g干燥粉末于5 mL 萃取罐中，在超臨界流體萃取儀中進(jìn)行萃取。萃取條件：萃取背壓15 MPa，萃取壓力20 MPa，改進(jìn)劑為乙醇，其比例為15%，萃取溫度50℃，靜態(tài)萃取時(shí)間10 min，動(dòng)態(tài)萃取時(shí)間10 min，萃取次數(shù)（靜態(tài)萃取+動(dòng)態(tài)萃取）1次。獲得的提取液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后， 待測(cè)。

2.2.2?超高效合相色譜條件?色譜柱為Torus Diol 130 （100 mm×3 mm，1.7 μm）; 流動(dòng)相A為CO2，流動(dòng)相B為甲醇/異丙醇（3∶1， V/V）+ 0.1%甲酸; 梯度洗脫：0～2 min，98% A; 2～4 min，98%～92% A; 4～9 min，92%～60% A; 9～9.5 min，60%～98% A; 9.5～11 min，98% A; 流速0.4 mL/min; 補(bǔ)償溶劑為甲醇，流速0.2 mL/min; 進(jìn)樣體積為1 μL; 柱溫： 45℃; 背壓：12.41 MPa。

2.2.3?質(zhì)譜條件?比較正負(fù)離子兩種掃描模式，結(jié)果正離子模式下質(zhì)譜響應(yīng)更強(qiáng)，在高能量通道下碎片信息更豐富。因此，最終選擇在正離子模式下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。離子化模式：ESI+; 毛細(xì)管電壓：2.5 kV; 錐孔電壓：40 V; 離子源溫度：120℃; 霧化氣溫度：500℃; 霧化氣流速：800 L/h; 錐孔氣流速：50 L/h。掃描模式：Full Scan/MSE; MS1和MS2掃描范圍：m/z 50～1200。

2.2.4?姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)的建立?根據(jù)文獻(xiàn)[32]報(bào)道的姜黃屬植物的化學(xué)成分，建立姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)。每種化合物條目包括化合物的名稱、化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子式、精確分子量、植物來源及其拉丁名。姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)共收錄了211種化合物。

2.2.5?數(shù)據(jù)處理和化合物鑒定

把自建姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)導(dǎo)入U(xiǎn)NIFI軟件后，設(shè)置UNIFI數(shù)據(jù)處理的參數(shù)：保留時(shí)間范圍0～7.0 min; 在3D峰檢測(cè)中高能量的峰強(qiáng)度閥值設(shè)為20 counts， 低能量的峰強(qiáng)度閥值設(shè)為160 counts; 分子質(zhì)量偏差和碎片質(zhì)量偏差分別設(shè)為5.0和10.0 mDa; 質(zhì)量范圍：50～1200 Da; 加合離子包括+H， +Na， +K和+NH4。亮氨酸腦啡肽[M+H]+=556.2766作為L(zhǎng)ockSpray校正標(biāo)準(zhǔn)液。UNIFI軟件可自動(dòng)完成以下數(shù)據(jù)處理，包括色譜峰的提取、分子式的確定、在內(nèi)置的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和自建姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)篩查、離子碎片的匹配到化學(xué)成分的初步鑒定。對(duì)未與內(nèi)置的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和自建姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)匹配的化學(xué)成分，可通過UNIFI軟件中的“說明”工具實(shí)現(xiàn)未知組分的鑒定，包括未知組分的分子式確定，在PubChem、ChemSpider等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行在線數(shù)據(jù)庫(kù)搜索，然后通過離子碎片匹配來確認(rèn)化合物結(jié)構(gòu)。

3?結(jié)果與討論

3.1?色譜條件的優(yōu)化

考察了Waters Acquity UPC2 Torus DEA （100 mm×3 mm， 1.7 μm）、Torus 1-AA （150 mm×3 mm， 1.7 μm）、Torus 2-PIC （100 mm×3 mm， 1.7 μm）、Viridis BEH （100 mm×3 mm， 1.7 μm） 和 Torus Diol 130（100 mm×3 mm， 1.7 μm） 5種色譜柱的分離效果，結(jié)果表明，Torus Diol 130 色譜柱的分離效果最好。因此，選用Torus Diol 130 色譜柱進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用梯度洗脫，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的比例，確定的最佳梯度洗脫條件如2.2.2節(jié)所述。應(yīng)用Waters ISM補(bǔ)償泵補(bǔ)充溶劑，增強(qiáng)化合物的離子化，補(bǔ)償溶劑為甲醇，流速為0.2 mL/min。UPC2的背壓為12.41 MPa。由色譜圖（圖1）可知，UPC2分離廣西莪術(shù)化學(xué)成分的時(shí)間為7 min，運(yùn)行時(shí)間短，體現(xiàn)了UPC2快速分離復(fù)雜中藥化學(xué)成分的能力。

3.2?應(yīng)用UNIFI軟件鑒定廣西莪術(shù)化學(xué)成分的方法

LC-MS聯(lián)用鑒定中藥化學(xué)成分的傳統(tǒng)方法是通過手動(dòng)提取每個(gè)色譜峰，然后由精確分子量推測(cè)出可能的分子式，檢索在線數(shù)據(jù)庫(kù)，最后由二級(jí)碎片離子推出可能的裂解途徑，進(jìn)而確定化學(xué)結(jié)構(gòu)，這種方法費(fèi)時(shí)、低效[33]。本研究應(yīng)用UNIFI軟件完成姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)的建立和導(dǎo)入，自動(dòng)進(jìn)行分子式的確定、峰的提取、數(shù)據(jù)庫(kù)篩查、數(shù)據(jù)處理以及化合物鑒定，進(jìn)行中藥的化學(xué)成分鑒定，快速、簡(jiǎn)單、高效。

3.2.1?建立姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)?姜黃屬植物包括廣西莪術(shù)、蓬莪術(shù)（Curcuma phaeocaulis Valeton）、溫郁金（Curcuma wenyujin）、姜黃（Curcuma longa L.）和郁金（Curcuma aromatica Salisb.）等植物。通過檢索PubChem、ChemSpider等數(shù)據(jù)庫(kù)并結(jié)合文獻(xiàn)收錄的姜黃屬植物的化學(xué)成分[32]，建立姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)，該數(shù)據(jù)庫(kù)共收錄了211種化合物，包括二苯庚烷類、單萜、倍半萜、二萜、多糖和酚酸類等化合物。姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)的基本結(jié)構(gòu)及其包含的信息包括化合物的名稱、化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子式、精確分子量、植物來源及其拉丁名。

藥用植物親緣學(xué)理論認(rèn)為，親緣相近的藥用植物所含的化學(xué)成分通常也相似，同一屬的藥用植物含有許多相同化學(xué)成分[34]。據(jù)此， 廣西莪術(shù)的化學(xué)成分與姜黃屬中其它藥用植物會(huì)有許多相同的化學(xué)成分。有的化學(xué)成分實(shí)際上存在于廣西莪術(shù)中，不過尚未有文獻(xiàn)報(bào)道其在廣西莪術(shù)中有分布，但已有文獻(xiàn)報(bào)道其在姜黃屬其它植物中有分布[33]。因此，建立姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)作為篩查數(shù)據(jù)庫(kù)，擴(kuò)大了化合物的篩查范圍，但篩查范圍又比在線數(shù)據(jù)庫(kù)小很多，這樣有助于快速全面鑒定廣西莪術(shù)中的化學(xué)成分。

3.2.2?UNIFI軟件自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和化學(xué)成分鑒定?使用UNIFI軟件的內(nèi)置中藥數(shù)據(jù)庫(kù)（1.8.2版）和自建的姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)共同作為篩選數(shù)據(jù)庫(kù)。UNIFI數(shù)據(jù)處理的參數(shù)如2.2.5節(jié)所述。通過UNIFI軟件的工作流程快速篩選出目標(biāo)組分。UNIFI軟件自動(dòng)完成色譜峰的提取識(shí)別、分子式的確定、對(duì)中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)的篩查以及將軟件計(jì)算的理論碎片和儀器采集的碎片離子進(jìn)行匹配，給出碎片離子的可能化學(xué)結(jié)構(gòu)。對(duì)與中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)中化合物結(jié)構(gòu)匹配的組分，僅需要判斷Mass Fragment自動(dòng)給出碎片的合理性，便可初步鑒定目標(biāo)組分。

3.2.3?鑒定未與篩選數(shù)據(jù)庫(kù)匹配的未知化合物?對(duì)未與內(nèi)置中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)匹配的組分，可通過精確質(zhì)量數(shù)和元素組成分析，推測(cè)可能的分子式，再以分子式在PubChem、ChemSpider等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行在線搜索，得到可能的化學(xué)成分，并進(jìn)行質(zhì)譜碎片自動(dòng)匹配，從而實(shí)現(xiàn)未知組分的鑒定。對(duì)未與篩選數(shù)據(jù)庫(kù)匹配且并未在在線數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到的化學(xué)成分，需根據(jù)其精確分子質(zhì)量、質(zhì)譜碎片以及同類化合物的特征碎片推斷其結(jié)構(gòu)。

3.3?廣西莪術(shù)的化學(xué)成分鑒定

應(yīng)用UNIFI軟件鑒定廣西莪術(shù)化學(xué)成分的方法，得到其化學(xué)組分，并通過與文獻(xiàn)報(bào)道的化學(xué)成分的分子式、化學(xué)結(jié)構(gòu)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)相比較，對(duì)一些化合物進(jìn)行了進(jìn)一步驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)初步鑒定廣西莪術(shù)干燥根莖的SFE提取物中共47種化學(xué)成分，其中42種是倍半萜類化合物， 有8組同分異構(gòu)體共37種化合物，結(jié)果見表1。

應(yīng)用GC-MS方法分析6個(gè)不同產(chǎn)地廣西莪術(shù)的揮發(fā)油，GC運(yùn)行時(shí)間約50 min，各產(chǎn)地廣西莪術(shù)的化學(xué)成分種類和含量都有非常大的差別，所含的化學(xué)成分都是單萜和倍半萜類化合物，其中廣西玉林福棉區(qū)的樣品測(cè)出的化合物種類最多，為40種[35]。應(yīng)用RPLC×RPLC-Q-TOF-MS分析廣西莪術(shù)根莖的超聲提取物，初步鑒定出105種化學(xué)成分，但分離時(shí)間太長(zhǎng)，僅1D LC的運(yùn)行時(shí)間就達(dá)到120 min[31]。以上兩種方法與本方法分離鑒定廣西莪術(shù)的化學(xué)成分的種類有區(qū)別。一種原因是不同地區(qū)不同時(shí)間采集的廣西莪術(shù)樣品所含的化學(xué)成分有不同。正如Zhang等[35]用同樣的樣品制備和分析方法分析不同產(chǎn)地的廣西莪術(shù)，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是它們的化學(xué)成分，還是化學(xué)成分含量都有明顯的區(qū)別。另一種原因是樣品提取的方法不一樣，導(dǎo)致提取物中的化學(xué)成分不完全相同。還有一種原因是分析方法不同，可能也會(huì)導(dǎo)致分離鑒定的化學(xué)成分不一樣。GC-MS無(wú)法分離鑒定高沸點(diǎn)、難氣化或熱不穩(wěn)定的化合物。二維色譜比一維色譜具有更強(qiáng)的分離能力，可分離出比一維色譜更多的化合物。

對(duì)復(fù)雜中藥中化學(xué)成分的分析，RPLC×RPLC-Q-TOF-MS比UPC2-QTOF-MS具有更高的峰容量，但UPC2-QTOF-MS比RPLC×RPLC-Q-TOF-MS的分析速度快，更適合中藥的質(zhì)量控制和日常分析。應(yīng)用GC-MS分析中藥中化學(xué)成分時(shí)，為了將化合物更好地分離，并得到較好的峰形，常采用程序升溫方法，但會(huì)導(dǎo)致分析時(shí)間較長(zhǎng)。如應(yīng)用GC-MS分析廣西莪術(shù)時(shí)，采用程序升溫方法，升溫速度為5℃/min， 柱溫從40℃升溫到280℃需要48 min[35]。本方法僅需7 min即可分離廣西莪術(shù)中的47種化合物。由此可見，UPC2-QTOF-MS方法分析復(fù)雜中藥中化學(xué)成分具有比GC-MS方法更快的速度，并且無(wú)需衍生化處理也能分析難氣化或熱不穩(wěn)定的化合物。因此，UPC2-QTOF-MS是一種快速分離鑒定中藥中化學(xué)成分的方法。

由于化學(xué)成分復(fù)雜，天然產(chǎn)物的分離是一個(gè)很大的挑戰(zhàn)，尤其是當(dāng)同分異構(gòu)體是結(jié)構(gòu)類似物和立體異構(gòu)體時(shí)，分離和純化難度更大[36]。大量的同分異構(gòu)體分析物對(duì)色譜分離是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)[37]。本研究共分離鑒定出47種化學(xué)成分，其中有8組同分異構(gòu)體共37種化合物，說明UPC2-QTOF-MS具有卓越的分離鑒定同分異構(gòu)體的能力。

4?結(jié) 論

建立了一種應(yīng)用SFE萃取廣西莪術(shù)、UPC2-QTOF-MS分析其提取物，結(jié)合UNIFI軟件的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)和自建的姜黃屬植物化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)篩查，快速分離鑒定廣西莪術(shù)中的化學(xué)成分的方法。本方法具有前處理簡(jiǎn)單、分析速度快、高效全面以及綠色環(huán)保等特點(diǎn)，為廣西莪術(shù)中藥材及其產(chǎn)品的質(zhì)量控制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了一種新的分離鑒定方法。UPC2-QTOF-MS也可用于其它中藥化學(xué)成分的分析。

References

1?Jiang Y， David B， Tu P F， ?Barbin Y. Anal. Chim. Acta， ?2010， 657（1）： 9-18

2?Li D X， ?Schmitz O J. Anal. Bioanal. Chem.， ??2015， ?407（1）： 231-240

3?LIU Xuan， ?YUE Qing-Xi， ?GUO De-An. Chin. J. Nat. Med.， ??2009， ??7（4）： 260-269

劉 璇， ?岳慶喜， ?果德安. 中國(guó)天然藥物， ??2009， ??7（4）： 260-269

4?Li F S， Weng J K. Nat. Plants， ??2017， ?3： 17109-17116

5?GAO Wen， SONG Hui-Peng， YANG Hua， LI Ping. Chinese Journal of Chromatography， 2017， 35（1）： 121-128

高 雯， 宋慧鵬， 楊 華， 李 萍. 色譜， 2017， 35（1）： 121-128

6?Zhang Z X， ?Bo T， Bai Y， ?Ye M， ?An R， ?Cheng F F， ?Liu H W. TrAC-Trend. Anal. Chem.， ??2015， ?72： 169-180

7?SONG Wei-Feng， TAO Ling， ZHONG Ming. Journal of Instrumental Analysis， 2012， 31（7）： 810-815

宋偉峰， 陶 玲， 鐘 鳴. 分析測(cè)試學(xué)報(bào)， 2012， 31（7）： 810-815

8?Sun H， ?Liu C， ?Zhang A H， ?Han Y， ?Yan G L， ?Wang P， ?Wang X J. Anal. Methods， ??2015， ?7： 279-286

9?Fan YY， ?Man S L， ?Li H F， ?Liu Y X， ?Liu Z， ?Gao W Y. J. Pharmaceut. Biomed.， ??2016， ?120： 364-373

10?Zhuang B， ?Bi Z M， ?Wang Z Y， ?Duan L， ?Lai C J S， ?Liu E H. J. Pharmaceut. Biomed.， ??2018， ?154： 207-215

11?Perrenoud A G G， ?Veuthey J L， ?Guillarme D. J. Chromatogr. A， ??2014， ??1339： ?174-184

12?Huang Y， ?Tang G Y， ?Zhang T T， ?Fillet M， ?Crommen J， ?Jiang Z J. J. Pharmaceut. Biomed.， ??2018， ??147： 65-80

13?XU Yong-Wei， ?SUN Qing-Long， ?HUANG Jing， ?TAN Xiao-Jie. Mod. Instrum.， ??2012， ??18（5）： ?45-48

徐永威， ?孫慶龍， ?黃 靜， ?譚曉杰. 現(xiàn)代儀器， ???2012， ??18（5）： 45-48

14?Gourmel C， ?Perrenoud A G G， ?Waller L， ?Reginato E， ?Verne J， ?Dulery B， ?Veuthey J L， ?Rudaz S， ?Schappler J， ?Guillarme D. J. Chromatogr. A， ??2013， ??1282： ?172-177

15?Gong X， ?Qi N L， ?Wang X X， ?Lin L J， ?Li J H. Food Chem.， ??2014， ?162： ?172-175

16?Guo W Y， ?Bian Z Y， ?Zhang D H， ?Tang G L， ?Liu W， ?Wang J L， ?Li Z H， ?Yang F. J. Sep. Sci.， ??2015， ??38（5）： 858-863

17?Jiang H， ?Yang L， ?Xing X D， ?Yan M L， Guo X Y， ?Yang B Y， ?Wang Q H， ?Kuang H X. J. Pharmaceut. Biomed.， ??2018， ??153： ?117-125

18?Zhou Q， Gao B Y， ?Zhang X， ?Xu Y W， ?Shi H M， ?Yu L L （Lucy）. Food Chem.， ??2014， ??143： ?199-204

19?Gao B Y， ?Luo Y H， ?Lu W Y， ?Liu J， ?Zhang Y Q， ?Yu L L （Lucy）. Food Chem.， ??2017， ?218： ?569-574

20?Tu A Q， ?Ma Q， ?Bai H， ?Du Z X. Food Chem.， ??2017， ?221： 555-567

21?Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. Beijing： ?China Medical Science Press， ??2015： ??274-275

國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典. ?北京： ?中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， ??2015： ??274-275

22?Li J， ?Zhao F， ?Li M Z， ?Chen L X， Qiu F. J. Nat. Prod.， ??2010， ?73（10）： 1667-1671

23?Phan M G， ?Tran T T N， ?Phan T S， ?Matsunami K， ?Otsuka H. Phytochem. Lett.， ??2014， ?9： 137-140

24?Xiang F F， ?He J W， ?Liu Z X， ?Peng Q Z， ?Wei H. Nat. Prod. Res.， ??2018， ?32（22）： 2670-2675

25?Dong C X， ?Zhang L J， Xu R， ?Zhang G， ?Zhou Y B， ?Han X Q， ?Zhang Y， ?Sun Y X. Int. J. Biol. Macromol.， ???2015， ??77： 99-104

26?Dong C X， ?Zhang W S， ?Sun Q L， ?Jiang Y J， ?Fu Z， ?Zhang Y， ?Du J， ?Sun Y X， ?Tao N， ?Yao Z. Int. J. Biol. Macromol.， ??2018， ??115： 1233-1240

27?LIN Guo-Biao， ?SU Jiang-Yu， ?YANG Xiu-Fen. Chin. J. Exp. Tradit. Med. Form.， ??2011， ?17（16）： 171-173

林國(guó)彪， ?蘇姜羽， ?楊秀芬. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， ???2011， ?17（16）： 171-173

28?ZENG Jian-Hong， ?MO Xuan-Yong， ?DAI Ping， ?HUANG Feng-Xiang， ?LIAO Ying， ?WANG Jian-Hong， ?CHEN Xu. ?Chin. J. Exp. Tradit. Med. Form.， ??2012， ?18（13）： 91-94

曾建紅， ?莫炫永， ?戴 平， ?黃鳳香， ?廖 迎， ?王建紅， ?陳 旭. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， ??2012， ?18（13）： 91-94

29?Chen S D， Gao J T， ?Liu J G， ?Liu B， ?Zhao R Z， ?Lu C J. ?Fitoterapia， ??2015， ??102： ?67-73

30?Yang F Q， ?Li S P， ?Zhao J， ?Lao S C， ?Wang Y T. J. Pharmaceut. Biomed.， ?2007， ??43（1）： 73-82

31?Zhou W J， Guo Z M， ?Yu L， ?Zhou H， ?Shen A J， ?Jin Y， ?Jin G W， ?Yan J Y， ?Yang F， ?Liu Y M， ?Wang C R， ?Feng J T， ?Liu Y F， ?Liang X M. Talanta， ??2018， ??186： 73-79

32?Sun W， ?Wang S， ?Zhao WW， ?Wu C H， ?Guo S H， ?Gao H W， ?Tao H X， ?Lu J J， ?Wang Y T， ?Chen X P. Crit. Rev. Food Sci. Nutr.， ??2017， ??57（7）： 1451-1523

33?Deng L， ?Shi A M， ?Liu H Z， Meruva N， ?Liu L， ?Hu H， ?Yang Y， ?Huang Ch， ?Li P， ?Wang Q. J. Mass Spectrom.， ??2016， ??51（12）： ?1157-1167

34?CHEN Si-Bao， ?PENG Yong， ?CHEN Shi-Lin， ?XIAO Pei-Gen. Mod. J. Tradit. Chin. Med. Mater. Medica.-World Sci. Technol.， ??2005， ??7（6）： 97-103

陳四保， ?彭 勇， ?陳士林， ?肖培根. 世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化， ???2005， ??7（6）： 97-103

35?Zhang L Y， ?Yang Z W， ?Huang Z B， ?Zhao M C， ?Li P H， ?Zhou W， ?Zhang K， Zheng X， ?Lin L， ?Tang J， ?Fang Y X， ?Du Z Y. Chem. Biodivers.， ?2017， 14（7）， e1700020

36?Xin H X， ?Da Z S， ?Cai J F， ?Ke Y X， ?Shi H， ?Fu Q， ?Jin Y， ?Liang X M. J. Chromatogr. A， ??2017， ?1509： ?141-146

37?Teubel J， ?Wust B， ?Schipke C， ?Peters O， ?Parr M K. J. Chromatogr. A， ??2018， ?1554： ?101-116